衛(wèi)生微生物學(xué)-第四章方法衛(wèi)檢

1第四章衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法

2衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)及基本原則衛(wèi)生指示微生物衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法衛(wèi)生微生物研究和檢測方法的前景

3第一節(jié)衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)及基本原則41.衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)與醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的區(qū)別與特點(diǎn)?2.樣品的采集原則？3.影響采樣代表性的因素有哪些？4.怎樣使采樣具有針對性？5.樣品采集后為什么要盡快送檢？6.怎樣保護(hù)樣品中的待檢微生物？7.樣品中抑菌物質(zhì)去除方法有哪些？8.樣品的處理策略（目的）與方法9.怎樣濃縮樣品中的微生物？10.環(huán)境中的微生物數(shù)量低，怎樣提高檢出率？

5衛(wèi)生微生物檢測的特點(diǎn)

1．檢測的對象多病原微生物+非致病和條件致病微生物特別是能反映環(huán)境、食品、健康相關(guān)產(chǎn)品等樣品衛(wèi)生質(zhì)量的衛(wèi)生指示微生物。62．檢測的范圍廣，標(biāo)本的來源不僅局限于人體，也來源于空氣、水、食品等環(huán)境。73．檢測的方法更敏感，以檢測環(huán)境標(biāo)本中數(shù)量很低的致病微生物。問題：你知道哪些方法？你認(rèn)為什么方法更敏感？84．定量測定和分型檢測，以探明感染性疾病的傳染源、傳播途徑、流行情況等。9衛(wèi)生微生物檢測的基本原則

采集、保存、運(yùn)送、檢測10總原則生物安全代表性/針對性防污染防殺菌細(xì)標(biāo)記11生物安全防人員感染：個人防護(hù)（？）防標(biāo)本和環(huán)境的污染：無菌操作、恰當(dāng)處理污染廢棄物裴曉方

xxpei@12注意采樣的代表性影響采樣代表性的因素包括:采樣量采樣部位采樣時間采樣的隨機(jī)性和均勻性以及按批號抽樣

13注意采樣的針對性樣品種類恰當(dāng)時間采樣量14避免采樣時外界微生物對樣品的新污染：所有采樣用具、容器需嚴(yán)格滅菌，并以無菌操作采樣。15避免采樣時對微生物的殺滅作用和引入新的抑菌物質(zhì)：如容器是否有消毒劑的殘留，或使用剛燒灼未冷卻的采樣工具。裴曉方

xxpei@16注意對樣品的詳細(xì)標(biāo)記：樣品名稱編號采樣時間采樣者檢測項(xiàng)目2025/1/5裴曉方

xxpei@17樣品的運(yùn)送原則

盡快送檢采集的樣品，應(yīng)在規(guī)定的時間內(nèi)（一般不超過3~4小時）送到實(shí)驗(yàn)室，盡快送檢。

一方面可減少待測微生物的死亡。

另一方面可防止微生物的繁殖對計(jì)數(shù)結(jié)果的影響2025/1/5裴曉方

xxpei@18保護(hù)待檢微生物溫度調(diào)節(jié)加入保護(hù)劑去除其他不利于待測微生物生存的因素2025/1/5裴曉方

xxpei@19pH蛋白質(zhì)抑制劑抑制非目的微生物滲透壓氣體2025/1/5裴曉方

xxpei@20遵循完善的樣品交接制度

送往實(shí)驗(yàn)室的樣品，必須附有樣品送檢單，實(shí)驗(yàn)室收到樣品應(yīng)按送檢單逐項(xiàng)核對，檢查樣品是否符合檢驗(yàn)要求，確證無誤方可簽收待檢。2025/1/5裴曉方

xxpei@21實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)原則

2025/1/5裴曉方

xxpei@22相應(yīng)的硬件條件和設(shè)備具有合格的檢驗(yàn)人員標(biāo)準(zhǔn)/公認(rèn)的檢驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制環(huán)境實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不應(yīng)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性工作區(qū)與辦公區(qū)分開工作面積應(yīng)滿足檢驗(yàn)工作的需要溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求整體布局應(yīng)采用單方向工作流程，避免交叉污染一般樣品檢驗(yàn)：潔凈區(qū)（超凈工作臺或潔凈實(shí)驗(yàn)室）病原微生物分離鑒定：BSL-22025/1/5裴曉方

xxpei@24

應(yīng)有檢測不同病原菌的相應(yīng)的條件和設(shè)備微生物按其是否致病、致病力強(qiáng)弱、危害人體的嚴(yán)重性、傳染性的大小、當(dāng)?shù)厝巳旱拿庖咚?、有無免疫制劑和特效治療藥物等可分成不同的危害等級。在不同生物安全級別實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行2025/1/5裴曉方

xxpei@25實(shí)驗(yàn)室生物安全與管理很重視?2025/1/5裴曉方

xxpei@26病毒滅活不徹底引發(fā)實(shí)驗(yàn)室感染

2004北京、安徽發(fā)生非典疫情原因調(diào)查結(jié)果。調(diào)查組認(rèn)為，本起疫情來自中國疾控制中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染，而引起實(shí)驗(yàn)室感染的環(huán)節(jié)，是腹瀉病毒室工作人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時，對SARS病毒滅活不徹底。

2025/1/5裴曉方

xxpei@27實(shí)驗(yàn)室生物安全與管理生物危害非工作人員嚴(yán)禁入內(nèi)2025/1/5裴曉方

xxpei@28實(shí)驗(yàn)室生物危害在微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究過程中生物因子（病原微生物）對人、環(huán)境、生態(tài)和社會造成的危害和污染。2025/1/5裴曉方

xxpei@29實(shí)驗(yàn)室生物安全為了避免微生物和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中在進(jìn)行各種有危害或有潛在危害的生物因子活動過程中，可能對人、環(huán)境和社會造成的危害或潛在危害，而采取的防護(hù)措施（硬件）和管理措施（軟件），達(dá)到對人、環(huán)境和社會的安全防護(hù)目的2025/1/5裴曉方

xxpei@30微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全主要考慮實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)，即實(shí)驗(yàn)室工作人員所處理的實(shí)驗(yàn)對象含有致病的微生物及其毒素時，通過在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造、使用個體防護(hù)設(shè)施、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不受實(shí)驗(yàn)對象的感染，確保周圍環(huán)境不受實(shí)驗(yàn)對象的污染。2025/1/5裴曉方

xxpei@31實(shí)驗(yàn)室生物安全級別2025/1/5裴曉方

xxpei@32感染性微生物的危險(xiǎn)度等級分類危害等級I(低個體危害，低群體危害)不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。危害等級Ⅱ(中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。2025/1/5裴曉方

xxpei@33感染性微生物的危險(xiǎn)度等級分類危害等級III

(高個體危害，低群體危害)能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。危害等級Ⅳ

(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體。2025/1/5裴曉方

xxpei@34實(shí)驗(yàn)室可以分為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

一級生物安全水平（BSL-1)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

二級生物安全水平（BSL-2)防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

三級生物安全水平（BSL-3)最高防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

四級生物安全水平（BSL-4)根據(jù)操作不同危險(xiǎn)度等級微生物所需的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)特點(diǎn)、建筑構(gòu)造、防護(hù)設(shè)施、儀器、操作以及操作程序來決定實(shí)驗(yàn)室的生物安全水平。2025/1/5裴曉方

xxpei@35傳染病分類——傳染病防治法甲類傳染病是指：鼠疫、霍亂。（2）乙類傳染病是指：傳染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血熱、狂犬病、流行性乙型腦炎、登革熱、炭疽、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、肺結(jié)核、傷寒和副傷寒、流行性腦脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生兒破傷風(fēng)、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾。（25）2025/1/5裴曉方

xxpei@36傳染病分類——傳染病防治法丙類傳染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、急性出血性結(jié)膜炎、麻風(fēng)病、流行性和地方性斑疹傷寒、黑熱病、包蟲病、絲蟲病，除霍亂、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉病、手足口病。（11）對乙類傳染病中傳染性非典型肺炎、炭疽中的肺炭疽和人感染高致病性禽流感，采取本法所稱甲類傳染病的預(yù)防、控制措施。2025/1/5裴曉方

xxpei@37傳染病分類——根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類：第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。

病原微生物實(shí)驗(yàn)室

生物安全管理?xiàng)l例2025/1/5裴曉方

xxpei@38傳染病分類——第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。

病原微生物實(shí)驗(yàn)室

生物安全管理?xiàng)l例人員-食品微生物檢驗(yàn)具有微生物專業(yè)背景和相應(yīng)資質(zhì)掌握生物安全知識和消毒知識，能夠理解并正確實(shí)施檢驗(yàn)（防止人為污染樣品、保護(hù)環(huán)境、自身安全）顏色視覺障礙涉及到辨色的實(shí)驗(yàn)2025/1/5裴曉方

xxpei@40具有合格的檢驗(yàn)人員

必須經(jīng)常接受專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，

掌握檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理及技術(shù)方法

技術(shù)質(zhì)量考核：可用幾種基本技術(shù)作考核評價(jià)的指標(biāo)。①細(xì)菌計(jì)數(shù)：可使用分散性和穩(wěn)定性好的枯草菌CMCC（B）63501株制作芽孢懸液。請幾名被試人員用直徑9cm~10cm的普通營養(yǎng)瓊脂平板，作表面涂沫接種計(jì)數(shù)，重復(fù)作5次，求平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，以標(biāo)準(zhǔn)差小，和顯微鏡直接計(jì)數(shù)折算值接近的為佳。②生化試驗(yàn)重現(xiàn)性：用銅綠色假單胞菌CMCC（B）1012株，。③模擬樣品檢出考核：選合適的基質(zhì)如奶粉，加入指標(biāo)菌，如普通變形桿菌CMCC（B）49001株?？己饲跋茸黝A(yù)備試驗(yàn)。指定檢驗(yàn)方法，確定檢出最小菌數(shù)。然后用最小菌數(shù)的5倍量、10倍量加入模擬基質(zhì)中，進(jìn)行檢出試驗(yàn)，從盲檢結(jié)果的正誤進(jìn)行評定。

2025/1/5裴曉方

xxpei@41采用標(biāo)準(zhǔn)/公認(rèn)的檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢測凡有國家標(biāo)準(zhǔn)、部頒標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)檢查方法的均按標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗(yàn)。沒有國家或部頒標(biāo)準(zhǔn)，按上級疾病預(yù)防控制中心的要求，參照共同協(xié)定的方法檢驗(yàn)

2025/1/5裴曉方

xxpei@42加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制儀器設(shè)備的質(zhì)控：

培養(yǎng)基、試劑的質(zhì)量控制：

消毒滅菌效果的控制：

建立良好的實(shí)驗(yàn)記錄制度：

建立良好的核查、校對制度

報(bào)告與核查制度2025/1/5裴曉方

xxpei@43根據(jù)衛(wèi)生檢驗(yàn)的特點(diǎn)采取特殊措施做好應(yīng)對突發(fā)事件的準(zhǔn)備如果一個樣品需做多種分析，檢測微生物優(yōu)先樣品處理：均質(zhì)化、乳化后再行稀釋；抑菌物質(zhì)去除；目的菌濃縮

(樣品的處理策略（目的）與方法?)微生物的復(fù)蘇

2025/1/5裴曉方

xxpei@44避免微生物實(shí)驗(yàn)室感染

氣溶膠避免微生物污染操作環(huán)境作好培養(yǎng)廢棄物、用具和樣品等的處理作好個人防護(hù)

2025/1/5裴曉方

xxpei@45第二節(jié)衛(wèi)生指示微生物

2025/1/5裴曉方

xxpei@46

指示微生物indicatormicroorganism是在常規(guī)衛(wèi)生監(jiān)測中，用以指示樣品衛(wèi)生狀況及安全性的（非致?。┪⑸铮ɑ蚣?xì)菌）。2025/1/5裴曉方

xxpei@47分為四種類型

①菌落總數(shù)（細(xì)菌、霉菌和酵母菌數(shù)）②大腸菌群、糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌③其它指示菌：特定菌、某些致病菌④病毒（包括噬菌體）

2025/1/5裴曉方

xxpei@48選擇指示微生物的總原則數(shù)量大易于檢出檢驗(yàn)方法簡單、經(jīng)濟(jì)、方便有一定的代表性，其數(shù)量變化能反映樣品衛(wèi)生狀況及安全性

2025/1/5裴曉方

xxpei@49衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中最重要的指示微生物大腸菌群指示糞便污染2025/1/5裴曉方

xxpei@50作為糞便污染指示菌的條件有哪些？①大量存在于人及溫血動物腸道，未被糞便污染的樣品中無此種菌存在；②在外環(huán)境中的抵抗力，包括對消毒劑的抵抗力與腸道致病菌大致相似或稍強(qiáng)；③在外環(huán)境中不繁殖，存活時間與腸道致病菌大致相似或稍長；④檢驗(yàn)方法簡便，易于定量計(jì)數(shù)。2025/1/5裴曉方

xxpei@51為什么常常通過檢測指示微生物反映樣品衛(wèi)生安全性？

①致病微生物種類多，檢測方法各異，對樣品的衛(wèi)生安全性作出評價(jià)時，不可能分別檢測各種微生物；②致病微生物的數(shù)量少，而檢測方法的靈敏度不高；或者受到檢測量的限制，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果③分離、鑒定致病微生物需時長，不能滿足實(shí)際工作的需要

④分離、鑒定致病微生物費(fèi)用高，而且對人員的技術(shù)要求也相對較高2025/1/5裴曉方

xxpei@52與人類健康密切的樣品，如直接進(jìn)口的食品、飲用水，除檢測衛(wèi)生指示微生物外，還要求直接檢測某些致病菌如：沙門菌志賀菌金黃色葡萄球菌2025/1/5裴曉方

xxpei@53常用的指示微生物

2025/1/5裴曉方

xxpei@54菌落總數(shù)AerobicPlateCount

概念：菌落總數(shù)是指被檢樣品的單位重量(g)、容積(ml)、表面積(cm2)或體積(m3)內(nèi)，所含有的能在某種培養(yǎng)基上經(jīng)一定條件、一定時間培養(yǎng)后長出的菌落數(shù)量。以菌落形成單位數(shù)（colonyformingunit，cfu）表示。2025/1/5裴曉方

xxpei@55種類：菌落總數(shù)包括細(xì)菌菌落總數(shù)、霉菌菌落總數(shù)和酵母菌菌落總數(shù)。衛(wèi)生學(xué)意義：用于判定檢樣被微生物污染的程度或動態(tài)觀察，也是某些樣品的衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)。測定方法：常用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法(standardplate-countingmethod)和表面涂布法（SpatulaMethod

）

2025/1/5裴曉方

xxpei@56標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法(standardplate-countingmethod)又稱為傾注平板計(jì)數(shù)法Atwhattemperatureshouldpourplatesbedispensed?Desiredtemperatureis45±1°C.生長在固體培養(yǎng)基上，來源于一個?細(xì)胞，肉眼可見的細(xì)胞群體。2025/1/5裴曉方

xxpei@58菌落計(jì)算方法（1）菌落計(jì)數(shù)方法做平板菌落計(jì)數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。（2）菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告①平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落數(shù)；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計(jì)。②稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字。若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。③菌落數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。2025/1/5裴曉方

xxpei@64表面涂布法（SpatulaMethod

）傾注平板計(jì)數(shù)法表面涂布法2025/1/5裴曉方

xxpei@65標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法表面涂布法不透明培養(yǎng)基-+菌落生長處瓊脂表面+瓊脂內(nèi)瓊脂表面加樣量1ml0.1ml樣分散方式混勻涂布2025/1/5裴曉方

xxpei@66糞便污染指示菌

大腸菌群（coliformgroup）：是一群能在35~37

C、24小時內(nèi)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的、需氧或兼性厭氧的、革蘭陰性的無芽胞桿菌。是存在于人和溫血動物腸道中的一大群菌。2025/1/5裴曉方

xxpei@67主要包括：四個屬的菌埃希氏菌屬(Escherichae)克雷伯氏菌屬(Klebsiella)腸桿菌屬(Enterobacter)枸櫞酸桿菌屬（Citrobacter）2025/1/5裴曉方

xxpei@68根據(jù)生長溫度的差異，將能在37

C生長的稱為總大腸菌群，而在44.5

C仍能生長的大腸菌群稱為耐熱大腸菌群(thermo-tolerantcoliformgroup)或糞大腸菌群（faecal

coliform

Fc），耐熱大腸菌群的主要成員是埃希氏菌屬的菌。2025/1/5裴曉方

xxpei@69大腸桿菌（Escherichae

coli）：普遍存在于人和動物的腸道內(nèi)（新鮮糞便中每克可達(dá)109CFU），近年來隨著測定新方法的發(fā)現(xiàn)和建立，大腸桿菌作為糞便污染的指示菌的應(yīng)用越來越多。利用大腸桿菌產(chǎn)生的葡萄糖苷酸酶，分解吲哚葡萄糖苷酸，產(chǎn)生有色物質(zhì)，而使大腸桿菌菌落顯色，對大腸桿菌數(shù)進(jìn)行測定。2025/1/5裴曉方

xxpei@70作為糞便污染的指示菌，大腸桿菌檢出的意義最大，其次是耐熱大腸菌群，總大腸菌群的檢出意義略差一些。GB/T4789.3-2008大腸菌群MPN計(jì)數(shù)初發(fā)酵復(fù)發(fā)酵大腸菌群月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯發(fā)酵結(jié)果初發(fā)酵陽性陽性陽性陰性復(fù)發(fā)酵煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯接種樣本陰性陽性大腸菌群煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯發(fā)酵結(jié)果08版大腸菌群MPN計(jì)數(shù)較03版的優(yōu)勢有：⑴08版操作更簡單，適合批量檢測⑵08版檢出的概率大

乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基基本上不具備修復(fù)已損傷的細(xì)胞的作用，而月桂基硫酸鹽胰蛋白胨則可以。⑶08版減少了人為的誤差

03版需要挑選菌落，受人主觀的影響很大，沒有挑對或挑取的不夠多都會導(dǎo)致假陰性結(jié)果，而08版采取增菌液接種，會減少假陰性。GB/T4789.3-2008新增大腸菌群平板計(jì)數(shù)平板計(jì)數(shù)證實(shí)試驗(yàn)典型菌落：紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大大腸菌群在結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）上的生長情況GB/T4789.3-2008新增大腸菌群PetrifilmTM測試片法準(zhǔn)備PetrifilmTM測試片接種1ml樣本液緩慢蓋上上層膜用壓板輕壓培養(yǎng)基樣本接種結(jié)果紅色有氣泡的菌落確認(rèn)為大腸菌群大腸桿菌MPN計(jì)數(shù)初發(fā)酵復(fù)發(fā)酵伊紅美藍(lán)平板分離培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂斜面或平板培養(yǎng)生化試驗(yàn)大腸桿菌VRB-MUG平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)時用已知MUG陽性菌株（如大腸桿菌ATCC25922）和產(chǎn)氣腸桿菌（如ATCC13048）做陽性和陰性對照大腸桿菌PetrifilmTM測試片計(jì)數(shù)法與大腸菌群PetrifilmTM測試片計(jì)數(shù)法方法一致結(jié)果判讀大腸桿菌大腸菌群藍(lán)色帶氣泡的菌落紅色帶氣泡的菌落2025/1/5裴曉方

xxpei@82糞鏈球菌

（fecalStrptococcusFs）

2025/1/5裴曉方

xxpei@83產(chǎn)氣莢膜梭菌

（Clostirdia）是一類能還原亞硫酸鹽為硫化物、厭氧生長的、革蘭陽性梭狀芽胞桿菌。是人和動物，特別是食草動物腸道內(nèi)的常住菌，數(shù)量少于大腸桿菌，每克糞便約為105~106。由于該菌能形成芽孢，對含氯消毒劑及外界不良環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，在外環(huán)境中存活時間較長。所以若樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌被大量檢出而大腸菌群數(shù)量很少時，則表示樣品曾受過糞便污染，即有陳舊性污染。常被作為水或土壤衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的指標(biāo)菌。2025/1/5裴曉方

xxpei@84其它指示微生物

（1）不得檢出的致病菌（2）腸道病毒的指標(biāo)微生物1）大腸桿菌噬菌體f2(coliphage)2）脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)減毒疫苗株I2025/1/5裴曉方

xxpei@85第三節(jié)衛(wèi)生微生物研究和檢測的方法2025/1/5裴曉方

xxpei@86衛(wèi)生微生物樣品特點(diǎn)：

目的菌數(shù)量低

細(xì)菌受損

雜菌多數(shù)量低——濃縮細(xì)菌受損——復(fù)蘇雜菌多——選擇性增菌和分離2025/1/5裴曉方

xxpei@87（一）樣品處理1．樣品混勻：2．樣品濃縮：2025/1/5裴曉方

xxpei@88（一）樣品處理1．樣品混勻：液體樣品常通過電動、手搖或敲打震蕩，使之混勻；固體樣品需通過置滅菌乳缽內(nèi)研磨均勻，或于高速組織搗碎機(jī)或勻漿器中在少量液體存在下，搗碎混勻后再取樣，或使用商品化的均質(zhì)器混合待檢樣品。2025/1/5裴曉方

xxpei@892．樣品濃縮：常用的樣品濃縮方式有沉淀法過濾法吸附法2025/1/5裴曉方

xxpei@90（1）沉淀法：細(xì)菌可通過普通離心機(jī)離心沉淀而濃縮，或者通過差速離心，去除雜質(zhì)，收集菌體，達(dá)到濃縮的目的。病毒濃縮需采用高速或超速離心機(jī)。2025/1/5裴曉方

xxpei@912025/1/5裴曉方

xxpei@922025/1/5裴曉方

xxpei@932025/1/5裴曉方

xxpei@94（2）過濾法：是將樣品在負(fù)壓或正壓作用下，通過孔徑為0.45μm的濾膜，細(xì)菌被阻留在膜上，而達(dá)到濃縮的目的。樣品中的病毒可通過膜的靜電吸附濃縮。過濾法不但可濃縮微生物，還可消除樣品中的抑制劑對后續(xù)培養(yǎng)的影響。2025/1/5裴曉方