布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)

布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)資料僅供參考文件編號(hào)：2022年4月布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)版本號(hào)：A修改號(hào)：1頁(yè)次：1.0審核：批準(zhǔn):發(fā)布日期：布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)

WS268-2007

1

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了人群布魯氏菌病的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷和鑒別診斷。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類(lèi)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及其工作人員對(duì)布魯氏菌病診斷與報(bào)告。2

診斷依據(jù)

流行病學(xué)史

發(fā)病前病人與家畜或畜產(chǎn)品、布魯氏菌培養(yǎng)物有密切接觸史，或生活在疫區(qū)，或與疫苗生產(chǎn)、使用和研究有密切關(guān)系。其他流行病學(xué)參見(jiàn)附錄A。

臨床表現(xiàn)

出現(xiàn)持續(xù)數(shù)日乃至數(shù)周發(fā)熱(包括低熱)，多汗，乏力，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等。多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹和黃疸；慢性期患者多表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。具體臨床表現(xiàn)參見(jiàn)附錄B。

實(shí)驗(yàn)室檢查（操作方法見(jiàn)附錄C)實(shí)驗(yàn)室初篩平板凝集試驗(yàn)(PAT)(見(jiàn)或虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)(見(jiàn)結(jié)果為陽(yáng)性或可疑。

皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(見(jiàn)后24h、48h分別觀(guān)察1次，皮膚紅腫浸潤(rùn)范圍有一次在×及以上(或以上)。

血清學(xué)檢查

試管凝集試驗(yàn)(SAT)(見(jiàn)滴度為1：l00++及以上，過(guò)2周-4周后應(yīng)再檢查，滴度升高4倍及以上）。

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)(見(jiàn)滴度1：lO++及以上。

抗人免疫球蛋白試驗(yàn)(Coomb’s)(見(jiàn)C.滴度l：400++及以上。

分離細(xì)菌

從病人血液、骨髓、其他體液及排泄物等任一種培養(yǎng)物中分離到布魯氏菌。3

診斷原則

布魯氏菌病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸比較復(fù)雜，其臨床表現(xiàn)多種多樣，很難以一種癥狀來(lái)確定診斷。對(duì)人布魯氏菌病的診斷，應(yīng)是綜合性的。即結(jié)合病人流行病學(xué)接觸史，臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查。4

診斷

疑似病例

應(yīng)同時(shí)符合和中任一項(xiàng)者。

確診病例

疑似病例和或中任何一項(xiàng)者。

隱性感染符合和或中任何一項(xiàng)者，但不具備者。5

鑒別診斷主要應(yīng)與風(fēng)濕熱、傷寒、副傷寒、肺結(jié)核、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等做出鑒別診斷（參見(jiàn)附錄D）。

附錄A

（資料性附錄）布魯氏菌病流行病學(xué)A．1

貯存宿主及傳染源

布魯氏菌（以下簡(jiǎn)稱(chēng)布氏菌）的貯存宿主很多，已知有六十多種動(dòng)物（家畜、家禽、野生動(dòng)物、馴化動(dòng)物）可以作為布氏菌貯存宿主。布魯氏菌?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱(chēng)布病）往往先在家畜或野生動(dòng)物中傳播，隨后波及人類(lèi)，是人畜共患的傳染病。

疫畜是布病的主要傳染源，我國(guó)大部分地區(qū)羊是主要傳染源；有些地方牛是主要傳染源；南方有的省份，豬是主要傳染源；鹿和犬是次要傳染源。A．2傳播途徑及傳播因子

布氏菌可以通過(guò)體表皮膚粘膜、消化道和呼吸道等侵入機(jī)體。人的感染途徑與職業(yè)、飲食、生產(chǎn)生活習(xí)慣有關(guān)。

含有布氏菌的各種污染物及食品均可成為傳播媒介，主要有病畜流產(chǎn)物，病畜的乳、肉、內(nèi)臟，被布氏菌污染的皮毛、水、土壤、塵埃等。A．3易感人群

人群對(duì)布氏菌普遍易感。人群感染率與傳染源和傳播媒介密切接觸的機(jī)會(huì)、程度有關(guān)。布病患者可重復(fù)感染布氏菌。A．4分布A．職業(yè)

有明顯的職業(yè)性，凡與病畜、染菌畜產(chǎn)品接觸多者發(fā)病率高。牧民、獸醫(yī)、皮毛和乳肉加工人員感染率比一般人高。A．性別

人對(duì)布氏菌易感，無(wú)性別差異，主要取決于接觸機(jī)會(huì)。A．年齡

一歲以上各年齡組均有惑染發(fā)病報(bào)道。由于青壯年是主要?jiǎng)趧?dòng)力，接觸病畜頻繁，因而感染率比其他年齡組高。A．季節(jié)

一年四季各月均可發(fā)病。羊種布氏菌流行區(qū)有明顯的季節(jié)性高峰。我國(guó)北方牧區(qū)人群發(fā)病高峰在4～5月。夏季剪羊毛和乳制品增多，也可出現(xiàn)一個(gè)小的發(fā)病高峰。豬種菌和牛種菌流行區(qū)，發(fā)病季節(jié)性不明顯。A．地區(qū)

一般情況下，牧區(qū)感染率高于農(nóng)區(qū)，農(nóng)區(qū)高于城鎮(zhèn)。牧區(qū)牲畜多，人與之接觸頻繁，感染機(jī)會(huì)多。牧區(qū)草原遼闊，居住分散，因此病人分布廣，很少集中暴發(fā)和流行。在農(nóng)區(qū)或半農(nóng)半牧區(qū)，以農(nóng)業(yè)生產(chǎn)為主，兼有少量牲畜，感染機(jī)會(huì)相對(duì)減少，但由于居住較密集，發(fā)病易呈點(diǎn)狀暴發(fā)。城市病人多集中在一些皮毛乳肉加工企業(yè)或城郊養(yǎng)畜戶(hù)。A．5不同疫區(qū)流行特點(diǎn)由于傳染源的種類(lèi)、病原菌的種型、毒力和人群免疫水平不同，表現(xiàn)不同的流行病學(xué)特點(diǎn)。A．

羊種布氏菌疫區(qū)

羊種布氏菌疫區(qū)的主要傳染源是病羊。羊種菌各生物型對(duì)人、畜均有較強(qiáng)的侵襲力和致病力，易引起人、畜間布病暴發(fā)和流行，疫情重。大多出現(xiàn)典型的臨床癥狀和體征。A．牛種布氏菌疫區(qū)

牛種布氏菌疫區(qū)的主要傳染源是病牛。牛種菌生物型較多，毒力不一，有的菌株毒力接近羊種菌強(qiáng)毒株。就總體而言，牛種菌毒力較弱，但有較強(qiáng)的侵襲力，即使是弱毒株，也可使牛發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)或不孕，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展。但對(duì)人致病較輕，感染率高而發(fā)病率低，呈散發(fā)性，臨床癥狀和體征多不典型；病程短，后遺癥少。A．豬種布氏菌疫區(qū)

豬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病豬。通常由豬1型和豬3型菌致病，毒力介于羊種菌和牛種菌之間。同一生物型菌株，既有強(qiáng)毒株，也有弱毒株。豬種菌對(duì)豬致病力強(qiáng)。對(duì)羊、牛致病力較低。對(duì)人致病力比牛種菌強(qiáng)，但也是感染率高，發(fā)病率低，除少數(shù)病例病情較重外，大多數(shù)無(wú)急性期臨床表現(xiàn)。A．犬種布氏菌疫區(qū)

犬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病犬。犬種菌除了侵犯犬，引起犬流產(chǎn)外，也可使貓、牛、豬、兔、梅花鹿、鼠等動(dòng)物感染，產(chǎn)生抗犬種布氏菌抗體。人也可被感染，但癥狀較輕。A．混合型布氏菌疫醫(yī)

兩種或兩種以上布氏菌同時(shí)在一個(gè)疫區(qū)存在，這與羊、牛在一個(gè)牧場(chǎng)放牧或圈舍鄰近有關(guān)。由于彼此接觸密切，菌種可以發(fā)生轉(zhuǎn)移，羊種菌轉(zhuǎn)移到牛多見(jiàn)，也有羊種菌轉(zhuǎn)移到豬；豬種菌、牛種菌也可以轉(zhuǎn)移到羊?；旌闲鸵邊^(qū)流行特點(diǎn)取決于當(dāng)?shù)卮嬖诘闹饕N。

附錄B

（資料性附錄）布魯氏菌病臨床表現(xiàn)

布病的臨床癥狀多種多樣，病情的差別也很大。潛伏期一般為l周～3周，平均2周，最短僅3天，最長(zhǎng)可達(dá)1年。B．1

主要癥狀B．發(fā)熱

是布病最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)之一，發(fā)熱多在午后或晚上開(kāi)始，可見(jiàn)于各期病人，熱型不一、變化多樣，也有典型的波狀熱熱型，多數(shù)為低熱和不規(guī)則熱型。發(fā)熱常伴有寒戰(zhàn)等癥狀。

布病患者在高熱時(shí)神志清醒，痛苦也較少，但體溫下降時(shí)自覺(jué)癥狀?lèi)夯?，這種高熱與病況相矛盾的現(xiàn)象為布病所特有。B．1。2多汗

也是布病患者的主要癥狀之一，尤其急性期患者，出汗非常嚴(yán)重，體溫下降時(shí)更為明顯，?？蓾裢敢卵?，使患者感到緊張、煩躁，甚至影響睡眠。B．骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛

骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛也是布病最常見(jiàn)的癥狀，大關(guān)節(jié)多見(jiàn)，常呈游走性疼痛。有的慢性期病人，關(guān)節(jié)強(qiáng)直，活動(dòng)受限。B．乏力

這一癥狀幾乎為全部病人所具有，尤以慢性期患者為甚。B．頭痛

為急性期的常見(jiàn)癥狀之一。慢陛期患者在疲乏無(wú)力的同時(shí)，也經(jīng)常伴有頭痛。個(gè)別頭痛劇烈者常伴有腦膜刺激癥狀。當(dāng)大腦皮層功能降低時(shí)，往住反應(yīng)遲鈍，記憶力減退。部分病人可有眼眶內(nèi)疼痛和眼球脹痛等。B．其他癥妝

心悸、神經(jīng)痛、食欲不振、腹瀉、便秘等。B．2主要體征

急性期患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹，多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)黃疸；慢性期患者多表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。B．3臨床分期B．急性期

發(fā)病3個(gè)月以?xún)?nèi)，凡有高熱和有明顯其他癥狀、體征（包括慢性期患者急性發(fā)作），并出現(xiàn)較高滴度的血清學(xué)反應(yīng)者。B．亞急性期

發(fā)病在3～6個(gè)月，凡有低熱和有其他癥狀、體征（即有慢性炎癥），并出現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)或皮膚變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性者。B．慢性期

發(fā)病6個(gè)月以上，體溫正常，有布病癥狀、體征，并出現(xiàn)血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng)或皮膚變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性者。B．殘余期

體溫正常，癥狀、體征較固定或功能障礙往往因氣候變化，勞累過(guò)度而加重者。

附錄C

（規(guī)范性附錄）布魯氏菌病診斷的特異性實(shí)驗(yàn)室檢查技術(shù)C．1

特異性血清學(xué)檢查C．

平板凝集試驗(yàn)(PAT)C．

器材及試劑

赫德遜凹玻板或一塊清潔無(wú)油脂玻璃板，平板凝集抗原，被檢血清，已知陰性和陽(yáng)性血清，0.2mL吸管或微量加樣器，牙簽或細(xì)鐵絲。C．，2操作方法C．備方形潔凈的玻璃板，劃成25個(gè)方格，橫數(shù)5格，縱數(shù)5格，第一列各格寫(xiě)下血清號(hào)碼。C．用0.2mL吸管按下列劑量加受檢血清于任何一行的各格中：第一格，第二格0.04mL，第三格，第四格。C．加平板凝集抗原0.03mL于各血清格中，用牙簽或細(xì)鐵絲混合，由血清量最小的格混起，每份血清用一根牙簽}昆合即可，用后燒毀；若用細(xì)鐵絲混合時(shí)，每份血清混合后用酒精棉球擦凈，然后再用作另一份血清。C．混勻后將玻璃板置于酒精燈火焰或凝集反應(yīng)箱上，均勻加溫，使其達(dá)到30℃左右，5min內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果。C．每次試驗(yàn)用陰、陽(yáng)性血清各1份作對(duì)照。C．按下列標(biāo)準(zhǔn)用加號(hào)記錄反應(yīng)強(qiáng)度：

++++：出現(xiàn)大的凝榘片或小的粒狀物，液體完全透明．100%凝集。

+++：有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明．7J%凝集。

++：有可見(jiàn)的凝集片，液體不甚透明，50%凝集。

+：液體混濁，只有少量粒狀物，25%凝集。

一：液體均勻混濁。C．平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系

0.08mL血清量出現(xiàn)凝集相當(dāng)于試管法1：25的血清稀釋度，相當(dāng)于1：50，相當(dāng)于1：100，相當(dāng)于1：200。C．判定

人血清0.02mL出現(xiàn)++及以上凝集程度判為陽(yáng)性，0.04mL出現(xiàn)++及以上凝集程度判為可疑。C．虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)C．

器材及試劑

清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0.ImL吸管或微量加樣器，牙簽或細(xì)鐵絲，虎紅平板凝集抗原，被檢血清。C．操作方法

在玻片上加0.03mL被檢血清，然后加入虎紅平板抗原，搖勻或用牙簽混勻，在5min內(nèi)判定結(jié)果。C．判定

判定凝集程度（一至++++）同平板凝集反應(yīng)；亦可只分為(+)陽(yáng)性，（一）陰性?xún)深?lèi)。C．試管凝集試驗(yàn)(SAT)C．

器材及試劑

試管凝集抗原，被檢血清，0.5%的石碳酸生理鹽水，吸管，凝集試管，溫箱和試管架等。C．操作方法C．被檢血清的稀釋?zhuān)涸谝话闱闆r下，每份血清用5支小試管(口徑8mm～lOmm)，第一管加入2.3mL石碳酸生理鹽水，第二管不加，第三、四、五管各加。用ImL吸管吸取被檢血清，加入第一管中，混勻。混勻后，以該吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL，以該吸管將第三管混勻，并吸取0.5mL加入第四管，混勻。從第四管吸取加入第五管，混勻。再?gòu)牡谖骞芪?.5ml。棄去。如此稀釋后，從第二管到第五管血清稀釋度分別為1：，1:25，1：50和1:100。C．加入抗原：先以0.5%石碳酸生理鹽水將抗原原液作適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄒ话闶亲?：10稀釋?zhuān)?。稀釋后的抗原加入各稀釋的血清管（第一管不加，作為血清?duì)照），每管加0.5mL，混勻。加入抗原后第二管至第五管，每管總量ImL，血清稀釋度從第二管至第五管分別為1:25，1:50，1：100和1:200，從第一管再吸出0.5mL，剩ImL。C．對(duì)照：陰牲血清對(duì)照，血清稀釋后加抗原（與被檢血清對(duì)照相似）。陽(yáng)性血清對(duì)照，其血清稀釋到原有滴度，再加抗原，抗原對(duì)照，適當(dāng)稀釋的抗原加石碳酸鹽水。C．判定C．判定比濁管制備：每次試驗(yàn)須配制比濁管作為判定的依據(jù)。配制方法是：取本次試驗(yàn)用的抗原稀釋液5mL--lOmIJ，加入等量的%石碳酸鹽水作倍比稀釋?zhuān)幢鞢．1配制比濁管。管號(hào)抗原稀釋液mL石碳酸鹽水mL清亮度標(biāo)記1100%++++275%+++350%++425%+50%—C．全部試驗(yàn)管，對(duì)照管及比濁管充分振蕩后置37℃溫箱中20h～22h，取出后放室溫2h，然后以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。C．記錄結(jié)果：根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄結(jié)果。特別是so%清亮度(++)對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對(duì)比判定。

++++：完全凝集，上層液100%清亮。+++：幾乎完全凝集，上層液75%清亮。++：顯著凝集，液體50%清亮。+：有微量凝集，液體25%清亮。一：無(wú)凝集，液體不清亮。確定每份血清滴度是以出現(xiàn)“十+”及以上的凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度。C．抗人免疫球蛋白試驗(yàn)(Coomb's)C．

器材及試劑

除試管凝集試驗(yàn)所需的一般器材及試劑外，還需抗人免疫球蛋白血清及普通離心機(jī)。C．揉作方法C．試管凝集試驗(yàn)階段：按C．進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)。C．抗球蛋白反應(yīng)階段：選取試管凝集試驗(yàn)的可疑反應(yīng)管及全部陰性反應(yīng)管，記錄管號(hào)，經(jīng)4000rlmin離心15min，用生理鹽水反復(fù)洗滌3次，然后向各管中加人生理鹽水、一定稀釋度（一般是1:20倍稀釋?zhuān)┑目谷嗣庖咔虻鞍籽?，混勻，將反?yīng)管置37℃溫箱中20h～22h，取出放室溫2h后判定結(jié)果。C．判定：判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)，程度均同試管凝集試驗(yàn)。C．補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)【CFI)C．

器材及試劑

37℃水浴箱，普通離心機(jī)，普通冰箱，各種容量的吸管，燒瓶，凝集管和試管架，生理鹽水，補(bǔ)體（新鮮豚鼠血清或凍干補(bǔ)體），2%的綿羊紅細(xì)胞懸液(2%SRBC)．溶血素，補(bǔ)體結(jié)合抗原，陰性和陽(yáng)性血清，被檢血清。C．操作方法C．補(bǔ)體滴定：在進(jìn)行CFT時(shí)，必須當(dāng)天滴定補(bǔ)體，將補(bǔ)體用生理鹽水稀釋為1:20，通常在十支凝集管中分別依次加入不同量的1:20補(bǔ)體稀釋液～O.2mL，然后各管中加入2個(gè)單位的抗原液0.2mL，再用生理鹽水把各管補(bǔ)至，混勻后放37℃水浴中30min，再加的溶血素(2個(gè)單位)和2%綿羊紅細(xì)胞，混勻，置37℃水浴中30min，判定結(jié)果（見(jiàn)表C．2）。表C．2補(bǔ)體滴定程序和結(jié)果

ml)管號(hào)12345678910對(duì)照抗原對(duì)照補(bǔ)體對(duì)照溶血素1:20補(bǔ)體量--2單位抗原量--生理鹽水量37℃水浴30分鐘2單位溶血素量

2%SRBC量

37℃水浴30分鐘結(jié)果舉例++++++++++++++++++++++++++++++++++----

上例中產(chǎn)生完全溶血且含補(bǔ)體量最少管為第八管，定為一個(gè)恰定單位，前一管（即第七管）為一個(gè)完全單位。在正式試驗(yàn)時(shí)采用兩個(gè)完全單位的補(bǔ)體量，按式(C．1)計(jì)算出補(bǔ)體稀釋倍數(shù)X。20:2Y—X:………

…一

式中：Y——1個(gè)完全單位補(bǔ)體量。X一墊薈孚一號(hào)，Y=O．08

x—番磊一25

即補(bǔ)體作1:25稀釋。C．溶血素及抗原滴定：在進(jìn)行CFT時(shí)溶血素和抗原亦需滴定，但不必在試驗(yàn)當(dāng)天進(jìn)行；而且，在購(gòu)到此二試劑時(shí)出售單位（或提供單位）都已滴定了，需用單位按說(shuō)明稀釋即可。C．被檢血清滅活

人血清滅活補(bǔ)體的溫度是56℃，時(shí)間為30min。C．本試驗(yàn)

滅活后的被檢血清從1:5稀釋開(kāi)始，然后做倍比稀釋?zhuān)抗苤邢♂屟辶繛?，再向各管中?個(gè)單位抗原0.2mL，2個(gè)單位補(bǔ)體．混勻，置37℃水浴中30min，取出后，向各管加的溶血系，再放37℃水浴中作用30min，判定結(jié)果（見(jiàn)表C．3）。表C3本試驗(yàn)程序

ml，成分血清稀釋度血清對(duì)照補(bǔ)體及抗原對(duì)照1:51:101:201:401:801:1601:5單位單位單位被檢血清

2單位抗原

2單位補(bǔ)體生理鹽水

37℃水浴30分鐘溶血系37℃水浴30分鐘結(jié)果++++++++++++++--++++-C．判定

++++：無(wú)溶血，SRBC沉于管底或懸浮。+++：25%溶血。++：50%溶血。+：75%溶血。-:100%溶血。以50%(++)及以上不溶血確定CFT的滴度。為防止判定的錯(cuò)誤，可配制標(biāo)準(zhǔn)溶血管（見(jiàn)表C．4）。C．2皮膚過(guò)敏試驗(yàn)C．

器材及試劑

布氏菌素，75%酒精棉球，1毫升注射器，皮內(nèi)注射針頭，測(cè)量尺。C．操作方法于被檢者前臂內(nèi)側(cè)前1／3處，用酒精棉球消毒后，晾干，皮內(nèi)注射0.ImL布氏菌素，在注射后24h和48h作兩次觀(guān)察。C．判定

兩次觀(guān)察，以反應(yīng)最強(qiáng)的結(jié)果為準(zhǔn)，注射局部出現(xiàn)充血，浸潤(rùn)為2.及以上（或以反應(yīng)面積≥4.Ocn12）判為陽(yáng)性。C．3分離布氏茵C．血培養(yǎng)C．

雙相培養(yǎng)基培養(yǎng)

從可疑病人靜脈無(wú)菌取血渡4mL～5mL，在酒精燈火焰附近將血液注入5～6支含雙相培養(yǎng)基的中試管內(nèi)，或2～4只含雙相培養(yǎng)基燒瓶中，輕輕混合傾斜，使被檢血液均勻分布在瓊脂斜面上，置37℃溫箱培養(yǎng)（如果懷疑病人是牛種布氏菌感染時(shí)，應(yīng)有一半標(biāo)本置C02環(huán)境中培養(yǎng)），三天后觀(guān)察結(jié)果。如未見(jiàn)布氏菌生長(zhǎng)，可按上法再傾斜，使血液均勻涂在瓊脂斜面上，繼續(xù)培養(yǎng)，每隔一天觀(guān)察一次，如有可疑布氏菌落，可用鉑金耳勾出接種到瓊脂試管培基，獲得純培養(yǎng)，進(jìn)一步作布氏菌鑒定，血培養(yǎng)30天仍不出菌，可定為陰性。C．接種未受精雞卵法

取新鮮雞蛋兩個(gè)，把雞蛋放在固定架上，鈍端向上，以碘酒和酒精依次消毒蛋殼，用眼科手術(shù)刀在頂部穿一小孔，用三厘米長(zhǎng)注射針頭將被檢血液徐徐注入卵黃中，每個(gè)雞蛋接種血液0.2mL，立即用滅菌石蠟將孔密封，置37℃溫箱中培養(yǎng)，五天后把接種血液的雞蛋無(wú)菌打開(kāi)，用滅菌的毛細(xì)管把接種血液部分的卵黃及蛋清吸出0.5mL～O.6mL，接種2～3支斜面培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)，2～3天觀(guān)察1次，15天仍不見(jiàn)可疑菌落生長(zhǎng)，定為陰性。C．尿液培養(yǎng)

用滅菌的導(dǎo)尿管將尿液導(dǎo)出放入滅菌容器中，為濃縮細(xì)菌，提高檢出率，可在尿液中加入1%～3%的高價(jià)布氏菌免疫血清，混合后，置37℃溫箱2h，高速離心沉淀，取沉淀物接種在選擇性培基上培養(yǎng)，或注射豚鼠，用生物學(xué)方法分離布氏菌。C．其他病原材料培養(yǎng)

由乳、腦脊液、關(guān)節(jié)液和滑囊液分離布氏菌，將液體標(biāo)本無(wú)菌接種到瓊脂斜面上，或培養(yǎng)平板上，參照血培養(yǎng)法觀(guān)察結(jié)果，15天仍無(wú)可疑菌生長(zhǎng)，定為陰性。C．生物學(xué)分離布氏茵法

為了提高對(duì)布氏菌的檢出率和從污染的材料中分離布氏菌，將被檢材料（固體標(biāo)本加滅菌的生理鹽水研磨成漿液態(tài)）經(jīng)皮下或腹腔