DB37T 3113-2018 豬圓環(huán)病毒2型抗體膠體金快速檢測技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.30DB37DB37/T3113—2018豬圓環(huán)病毒2型抗體膠體金快速檢測山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T3113—2018本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：李俊、時建立、彭喆、吳曉燕、徐紹建、于江、孫文博、叢曉燕、朱曉琳、韓紅、吳家強、杜以軍、陳蕾、陳智、劉暢。1DB37/T3113—2018豬圓環(huán)病毒2型抗體膠體金快速檢測技術(shù)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒2型(PorcineCircovirusType2,PCV2)的抗體膠體金試紙條制備方法及試紙條使用規(guī)范。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬圓環(huán)病毒2型的抗體快速檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語與定義3.13.2牛血清白蛋白。3.3硝酸纖維素膜。4材料及設(shè)備4.1主要儀器設(shè)備4.1.1微量移液器(最大量程分別為10μL、20μL、100μL、1000μL)。4.1.220000r/min低溫高速離心機。2DB37/T3113—20184.1.5PVC板。4.1.8電子天平精度為：0.001g。4.2.1BSA:配制見附錄A.1。4.2.3NC膜。4.2.6碳酸鉀分析純。4.2.7豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白。4.2.91×PBS溶液(pH值7.4):配制見附錄A.3。4.2.10超純水：符合GB/T6682,三級。4.2.110.1mol/LTris-HCL:配制見附錄A.4。所有試劑均需提前經(jīng)0.22μm無菌濾器濾過。即可。度為10μg/mL。5.3.2加入1/10體積的10%BSA溶液(終濃度1%為封閉液)封閉，混勻并靜置15min。5.3.34℃,8000r/min離心20min3DB37/T3113—20185.3.4用原體積1/20且含有10%蔗糖的0.1mol/LTris-HCL(pH值8.5)儲存液重新懸浮沉淀。5.4.1聚酯纖維膜(金標(biāo)結(jié)合墊)用Tween-20,37℃浸泡30min。5.4.2玻璃纖維膜(樣品墊)、NC膜用封閉液37℃浸泡30min。5.4.3用1×PBS溶液(pH值7.4)分別對金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊和NC膜洗3次，37℃干燥備用。5.5.2將純化后的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白稀釋到1mg/mL,用噴膜儀按1μL/cm的噴涂量噴涂到5.5.3將羊抗兔(IgG)稀釋到1mg/mL,用噴膜儀按1μL/cm的噴涂量噴涂到NC膜的對照線(C-膠板上。將檢測卡平放在桌面上，將待檢血清樣品3滴～4滴(約80μL)加入加樣孔(S)內(nèi)，在室溫內(nèi)4DB37/T3113—20A.1牛血清白蛋白(BSA)(10牛血清白蛋白1滅菌超純水定容至(規(guī)范性附錄)試劑的配制%)氯金酸1g。滅菌超純水定容至100mL。磷酸二氫鉀(KH2P04):0.27g。磷酸氫二鈉(Na2HPO4):1.42g。氯化鈉(NaC1):8g。氯化鉀(KCl):0.2g。加滅菌超純水約800mL充分?jǐn)嚢枞芙?，然后加入濃鹽酸調(diào)pH值至7.4,最后定容到1L。A.40.1mol/LTris-