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文檔簡介
免疫血清制備實驗目的和要求了解影響機體免疫應答強度的因素;明確初次應答和再次應答抗體產生的規(guī)律;制備牛血清白蛋白(BSA)的抗血清;熟悉佐劑的制備和動物免疫的常用方法;了解抗體檢測的常用方法。換4#針頭雙后足墊和背部皮下接種,每處約10-20ul。(2)多糖:具有免疫原性,較蛋白質弱。4)親水膠體轉化為疏水膠體階段性:不可見可見反應;(2)途徑:皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、呼吸道和口服免疫應答水平依次降低。2,000rpm離心10分鐘;可逆性:表面的結合,有可逆性;可逆性:表面的結合,有可逆性;用無菌小試管收集未免疫小鼠血(眼眶放血法),標記后送準備室;(vanderWaalsinteractions)動物:昆明鼠(每組一只),約20g/只。免疫佐劑制備及動物初次免疫(第一周)采集剩余小鼠血,將血置室溫半小時凝固;(1)蛋白質
在免疫學實驗中,為制備抗體通常以抗原性物質給動物注射,經一定時間后,動物血清中可產生大量特異性抗體,這種含有特異性抗體的血清稱免疫血清。
實驗原理分子量:分子量越大,免疫原性越強。換4#針頭雙后足墊和背部皮下接種,每處約10-20ul。2,000rpm離心10分鐘;其余小鼠于腹腔和背部皮下注射上次制備的乳化抗原,每鼠注射ml。階段性:不可見可見反應;條件依賴性:PH,溫度,電解質。采集剩余小鼠血,將血置室溫半小時凝固;2,000rpm離心10分鐘;免疫佐劑制備及動物初次免疫(第一周)可逆性:表面的結合,有可逆性;抗原抗體的親和力和親合力條件依賴性:PH,溫度,電解質。將免疫后的小鼠放回鼠籠。其余小鼠于腹腔和背部皮下注射上次制備的乳化抗原,每鼠注射ml。條件依賴性:PH,溫度,電解質。免疫應答的影響因素
抗體的產生通常與抗原的質和量、動物種類以及接種的途徑有密切關系。一、抗原分子的結構和性質
1.分子量:分子量越大,免疫原性越強。(1)蛋白質(2)多糖:具有免疫原性,較蛋白質弱。(3)核酸:多無免疫原性。3.結構的復雜性4.分子構象
5.易接近性
6.物理狀態(tài)二、宿主方面的因素
1.遺傳因素同種動物不同品系及不同個體對同種抗原產生不同強度的免疫應答。
2.其他因素年齡、性別與健康狀態(tài)。三、免疫原的劑量及進入途徑(1)劑量
1)劑量不足或過多均不引起免疫應答。
2)重復進入引起強免疫應答。(2)途徑:皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、呼吸道和口服免疫應答水平依次降低??贵w產生的一般規(guī)律初次應答和再次應答規(guī)律。
抗體產生的順序規(guī)律:IgM-IgG-IgA-IgD-IgE取首次免疫后的小鼠2只,采集血清(方法同上),標記后凍存?zhèn)溆谩#?)多糖:具有免疫原性,較蛋白質弱。注意:老鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶條件依賴性:PH,溫度,電解質。分子量:分子量越大,免疫原性越強。換4#針頭雙后足墊和背部皮下接種,每處約10-20ul。注意:老鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶動物:昆明鼠(每組一只),約20g/只。2,000rpm離心10分鐘;2,000rpm離心10分鐘;適比性:適合的比例,反應才可見;可逆性:表面的結合,有可逆性;其他因素年齡、性別與健康狀態(tài)。PBS、1ml塑料管(保存血清用),無菌小試管,棉簽,1ml注射器、12#針頭等。熟悉佐劑的制備和動物免疫的常用方法;初次應答和再次應答抗體產生比較實驗方案免疫佐劑制備及動物初次免疫(第一周)再次免疫及血清采集(第二周)血清采集及抗體檢測(第三周)W1W2W3未免疫血清采集再次免疫血清采集初次免疫血清采集初次免疫再次免疫實驗材料動物:昆明鼠(每組一只),約20g/只??乖?mg/ml牛血清白蛋白(BSA)佐劑:完全福氏佐劑。其它:
PBS、1ml塑料管(保存血清用),無菌小試管,棉簽,1ml注射器、12#針頭等。實驗流程12只小鼠小鼠眼眶取血制備血清2只2只8只W1W3W2初次免疫(1只/組)再次免疫mlBSA完全福氏佐劑攪拌完全乳化第一周實驗步驟
1.抗原制備滴于水中經久不散
2.動物免疫用1ml注射器12#針頭吸出完全乳化的抗原1ml;換4#針頭雙后足墊和背部皮下接種,每處約10-20ul。(接種處先用碘酒、酒精消毒)將免疫后的小鼠放回鼠籠。1ml注射器(內有乳化好的抗原)貼好標簽,4℃保存下次用。第一周實驗步驟(每班2只)用無菌小試管收集未免疫小鼠血(眼眶放血法),標記后送準備室;2,000rpm離心
10分鐘;吸取血清置1ml塑料管,做好標記;注意:老鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶第一周實驗步驟第二次課內容(vanderWaalsinteractions)三、免疫原的劑量及進入途徑初次應答和再次應答抗體產生比較抗原抗體的親和力和親合力遺傳因素同種動物不同品系及不同個體對同種抗原產生不同強度的免疫應答。換4#針頭雙后足墊和背部皮下接種,每處約10-20ul。2,000rpm離心10分鐘;三、免疫原的劑量及進入途徑可逆性:表面的結合,有可逆性;(electrostaticforces)熟悉佐劑的制備和動物免疫的常用方法;抗原:4mg/ml牛血清白蛋白(BSA)血清采集及抗體檢測(第三周)PBS、1ml塑料管(保存血清用),無菌小試管,棉簽,1ml注射器、12#針頭等。在免疫學實驗中,為制備抗體通常以抗原性物質給動物注射,經一定時間后,動物血清中可產生大量特異性抗體,這種含有特異性抗體的血清稱免疫血清。抗原抗體反應抗原與抗體特異性結合,形成抗原抗體復合物。物質基礎:1)抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結合
2)抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結合
3)抗原抗體之間的結合力
4)親水膠體轉化為疏水膠體抗原抗體結合力靜電引力(electrostaticforces)范德華引力:作用最?。╲anderWaalsinteractions)氫鍵:最具特異性(hydrogenbond)疏水作用力:作用最大(hydrophobicinteractions)抗原抗體結合力示意圖抗原抗體的親和力和親合力親和力:抗體分子上一個抗原結合點與對應的抗原決定簇之間相適應而存在著的引力,是抗原抗體間固有的結合力親合力:抗體結合部位與抗原表位之間結合的強度親水膠體轉化為疏水膠體抗原抗體的結合后,使水化層表面電荷減少或消失,水化層變薄,電子云也消失,蛋白質由親水膠體轉化為疏水膠體。如再加入電解質,如NaCl,則進一步使疏水膠體物相互靠攏,形成可見的抗原抗體復合物??乖?親水膠體)
抗體(親水膠體)抗原抗體復合物
(疏水膠體)電解質可見反應
+抗原抗體反應的一般規(guī)律特異性與交叉反應性;可逆性:表面的結合,有可逆性;抗原抗體交叉反應示意圖適比性:適合的比例,反應才可見;階段性:不可見可見反應;條件依賴性:PH,溫度,電解質??乖贵w反應比例性示意圖血清制備:取首次免疫后的小鼠2只,采集血清(方法同上),標記后凍存?zhèn)溆谩T俅?/p>
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