第二章可見紫外分光光法(春)

第二章光譜分析法概論主講教師高金波當(dāng)前1頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。本章主要介紹:光學(xué)分析法定義光學(xué)分析的三個(gè)主要過(guò)程電磁輻射和電磁波譜電磁輻射與物質(zhì)的相互作用光學(xué)分析法的分類當(dāng)前2頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。

基于物質(zhì)發(fā)射的電磁輻射或物質(zhì)與電磁輻射相互作用后產(chǎn)生的輻射信號(hào)或發(fā)生的信號(hào)變化來(lái)測(cè)定物質(zhì)的性質(zhì)、含量和結(jié)構(gòu)的一類儀器分析法。一、定義（光學(xué)分析法）當(dāng)前3頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。1.

能源（光源）提供能量2.能量與物質(zhì)相互作用3.產(chǎn)生被檢測(cè)的信號(hào)二、光學(xué)分析的三個(gè)主要過(guò)程當(dāng)前4頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。1.電磁輻射—電磁波（光是其中的一部分）

它是一種以極高的速度傳播的光子流在傳播過(guò)程中不需要任何的物質(zhì)作為傳播媒介

它具有波動(dòng)性和粒子性。三、電磁輻射和電磁波譜當(dāng)前5頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。(1)波動(dòng)性表現(xiàn)在:

每種電磁輻射都有確定不變的頻率(2)粒子性表現(xiàn)在:

每個(gè)粒子都具有能量E當(dāng)前6頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。2.電磁波譜:電磁輻射按波長(zhǎng)順序排列而成γ射線→x射線→紫外光→可見光→紅外光→微波→無(wú)線電波

高能輻射區(qū)γ射線能量最高，可以引起核能級(jí)躍遷χ射線可以引起內(nèi)層電子能級(jí)的躍遷光學(xué)光譜區(qū)紫外光可以引起原子和分子外層可見光電子能級(jí)的躍遷紅外光可以引起分子振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷波譜區(qū)微波分子轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)及電子自旋能級(jí)躍遷無(wú)線電波以引起原子核自旋能級(jí)的躍遷五、光學(xué)分析法分類當(dāng)前7頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。四、電磁輻射與物質(zhì)的相互作用五、光學(xué)分析法分類當(dāng)前8頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光學(xué)分析法光譜分析法非光譜分析法原子光譜分析法分子光譜分析法原子吸收光譜原子發(fā)射光譜原子熒光光譜X射線熒光光譜折射法圓二色性法X射線衍射法干涉法旋光法紫外光譜法紅外光譜法分子熒光光譜法分子磷光光譜法核磁共振波譜法當(dāng)前9頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光譜分析法吸收光譜法發(fā)射光譜法原子光譜法分子光譜法原子發(fā)射原子吸收原子熒光X射線熒光原子吸收紫外可見紅外可見核磁共振紫外可見紅外可見分子熒光分子磷光核磁共振化學(xué)發(fā)光原子發(fā)射原子熒光分子熒光分子磷光X射線熒光化學(xué)發(fā)光當(dāng)前10頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第十章可見-紫外吸收光度法可見光區(qū)和紫外光區(qū)的劃分:200~400nm為紫外光區(qū)400~760nm為可見光區(qū)可見紫外分光光度法的定義根據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)200~760nm這一光區(qū)電磁輻射的吸收特性進(jìn)行的物質(zhì)成分分析與分子結(jié)構(gòu)分析的方法當(dāng)前11頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第一節(jié)紫外-可見分光光度法

的基本原理和概念轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)差0.005~0.05V振動(dòng)能級(jí)差0.05~1eV外層價(jià)電子能級(jí)差1~20eV電子光譜250~25m25000~1250nm1250~60nm吸收光譜分子光譜當(dāng)前12頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。一、電子躍遷類型預(yù)備知識(shí)：價(jià)電子：σ電子→飽和的化合物或基團(tuán)

π電子→不飽和的化合物或基團(tuán)n電子→含有雜質(zhì)原子的基團(tuán)軌道：電子圍繞原子或分子運(yùn)動(dòng)的幾率

軌道不同，電子所具有能量不同當(dāng)前13頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示b1SH1SH*

成鍵軌道與反鍵軌道：當(dāng)前14頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。一、電子躍遷類型：1.σ→σ*躍遷：飽和烴（甲烷，乙烷）E很高，λ<150nm（遠(yuǎn)紫外區(qū)）2.π→π*躍遷：不飽和基團(tuán)（C＝C，C＝O）E較小，λ~200nm體系共軛，E更小，λ更大當(dāng)前15頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。一、電子躍遷類型：3.n→π*躍遷：含雜原子不飽和基團(tuán)（C≡NC＝O）E最小，λ200~400nm（近紫外區(qū)）4.n→σ*躍遷：含雜原子飽和基團(tuán)（—OH，—NH2，—X，—S）E較大，λ150~250nm按能量大?。害摇?>n→σ*>π→π*>n→π*當(dāng)前16頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前結(jié)論：紫外光譜電子躍遷類型：n→π*躍遷π→π*躍遷飽和化合物無(wú)紫外吸收電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系根據(jù)分子結(jié)構(gòu)→推測(cè)可能產(chǎn)生的電子躍遷類型；根據(jù)吸收譜帶波長(zhǎng)和電子躍遷類型→推測(cè)分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）當(dāng)前17頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。二、紫外-可見法相關(guān)的基本概念1．吸收光譜（吸收曲線）：不同波長(zhǎng)光對(duì)樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同

以波長(zhǎng)λ—吸光度A作圖，所描繪的曲線為~2．吸收光譜特征：定性依據(jù)吸收峰→λ最大吸收谷→λ最小肩峰→λsh末端吸收→靠近200nm的呈現(xiàn)當(dāng)前18頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。當(dāng)前7頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。C=1/2C0，T=T01/2=；C與T的關(guān)系(指數(shù)關(guān)系)選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下干擾組分具有等吸收點(diǎn)當(dāng)前59頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。3．在同一波長(zhǎng)下，各組分吸光度具有加和性光學(xué)分析的三個(gè)主要過(guò)程第七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。溶劑極性↑，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失第七十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第八十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。軌道不同，電子所具有能量不同非單色光是指含有二種或兩種以上波長(zhǎng)的光第七十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示當(dāng)前19頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。3．生色團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）：

能吸收紫外-可見光的基團(tuán)有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對(duì)電子的基團(tuán)具n電子和π電子的基團(tuán)產(chǎn)生n→π*躍遷和π→π*躍遷E較低例：C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N—，—NO2等當(dāng)前20頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前本身無(wú)紫外吸收，但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)，同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán)有機(jī)物：連有雜原子的飽和基團(tuán)例：—OH，—OR，—NH2，—SR，—X4．助色團(tuán)當(dāng)前21頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前5．紅移和藍(lán)移：

由于化合物結(jié)構(gòu)變化（共軛、引入助色團(tuán)取代基）或采用不同溶劑后吸收峰位置向長(zhǎng)波方向的移動(dòng)，叫紅移（長(zhǎng)移）吸收峰位置向短波方向移動(dòng)，叫藍(lán)移（紫移，短移）當(dāng)前22頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前6．增色效應(yīng)和減色效應(yīng)

結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時(shí)

增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度增強(qiáng)的效應(yīng)

減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)7．強(qiáng)帶和弱帶：

ε>104→強(qiáng)帶ε<102→弱帶當(dāng)前23頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。三、吸收帶類型和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系1．R帶：由含雜原子的不飽和基團(tuán)的

n→π*躍遷產(chǎn)生C＝O；C＝N；—N＝N—，—NO,—NO2特點(diǎn)：E小，λmax250~400nm，ε最大<100溶劑極性↑，λ最大↓→藍(lán)移（短移）吸收峰的位置當(dāng)前24頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。三、吸收帶類型和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系2．K帶：由共軛雙鍵的π→π*躍遷產(chǎn)生特點(diǎn)：λ最大>200nm，ε最大>104(—CH＝CH—)n，—CH＝C—CO—共軛體系增長(zhǎng)，λ最大↑→紅移，ε最大↑溶劑極性↑，λ最大↑→紅移當(dāng)前25頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前3．B帶：由π→π*躍遷產(chǎn)生芳香族化合物的主要特征吸收帶λ最大=254nm，寬帶，具有精細(xì)結(jié)構(gòu)；ε最大=200極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失三、吸收帶類型和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系精細(xì)結(jié)構(gòu)當(dāng)前26頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示當(dāng)前27頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前4．E帶：由苯環(huán)的環(huán)形共軛系統(tǒng)中的π→π*躍遷產(chǎn)生的芳香族化合物的特征吸收帶

見圖E1180nmε最大>104（常觀察不到）E2200nmε最大=7000強(qiáng)吸收苯環(huán)有發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)，E2帶與K帶合并一起紅移（長(zhǎng)移）。三、吸收帶類型和分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系當(dāng)前28頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示當(dāng)前29頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第二十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示當(dāng)前30頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。*下列化合物K帶的吸收波長(zhǎng)最大的是：A：H2C=CH-CH=CH2；B：H2C=CH2；C：H2C=CH-CH=CH-CH=CH2；D：H2C=CH-C=OR帶是由_________躍遷引起，其特征是波長(zhǎng)_______。K帶是由_________躍遷引起，其特征是波長(zhǎng)_______。*丙酮能吸收280nm，187nm和154nm的紫外光，其中最長(zhǎng)波長(zhǎng)的吸收所對(duì)應(yīng)的電子躍遷類型為___，該吸收帶為___帶。*符合比耳定律的有色溶液稀釋時(shí)，其吸收曲線的最大吸收峰A．上移；B．下移；C．左移；D．右移*在分光光度法中，吸收曲線指的是：A.A一c曲線；B.A一λ曲線；C.T一c曲線；D.A一T曲線練習(xí)：當(dāng)前31頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前1．溶劑效應(yīng)：對(duì)λ最大影響：

n-π*躍遷：溶劑極性↑，λ最大↓藍(lán)移π-π*躍遷：溶劑極性↑，λ最大↑紅移見圖解對(duì)吸收光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)影響

溶劑極性↑，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失溶劑的選擇——極性；純度高；截止波長(zhǎng)<λ最大2．pH值的影響：影響物質(zhì)存在型體，影響吸收波長(zhǎng)四、影響吸收帶位置的因素：當(dāng)前32頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。圖示躍遷類型 正己烷氯仿 甲醇 水

→

*230 238 237 243n→

* 329 315 309 305當(dāng)前33頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。五、郎伯比爾定律假設(shè)一束平行單色光通過(guò)一個(gè)吸光物體（一）lambert-beer當(dāng)前34頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。1．Lamber-beer定律的適用條件（前提）

入射光為單色光溶液是稀溶液2．該定律適用于固體、液體和氣體樣品3．在同一波長(zhǎng)下，各組分吸光度具有加和性

應(yīng)用：多組分測(cè)定討論：當(dāng)前35頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。討論:4.C與A的關(guān)系(成正比關(guān)系)

C=C0，A=A0；C=2C0，A=2A0；C=1/2C0，A=1/2A0；5.C與T的關(guān)系(指數(shù)關(guān)系)C=C0，T=T0；C=2C0，T=T02；C=1/2C0，T=T01/2=；當(dāng)前36頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。(二)吸光系數(shù)****1.物理意義：

λ一定，單位濃度、單位厚度的吸光度討論：1）E=f（組分性質(zhì)，溫度，溶劑，λ）當(dāng)組分性質(zhì),溫度和溶劑一定，E=f（λ）2）不同物質(zhì)在同一波長(zhǎng)下E可能不同（選擇性吸收-）同一物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下,E一定不同3）E↑，物質(zhì)對(duì)光吸收能力↑,測(cè)定靈敏度↑4）定性、定量依據(jù)當(dāng)前37頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．兩種表示法：

1）摩爾吸光系數(shù)ε：在一定λ下，C=1mol/L，L=1cm時(shí)的吸光度2）百分含量吸光系數(shù)/比吸光系數(shù)：在一定λ下，C=1g/100ml，L=1cm時(shí)的吸光度3）兩者關(guān)系3.吸光系數(shù)能否直接測(cè)得？不能？？當(dāng)前38頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。六、偏離比爾定律的因素（一）化學(xué)因素（二）光學(xué)因素

1.非單色光2.非平行光3.雜散光4.散射和反射的影響當(dāng)前39頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第三十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（一）化學(xué)因素Beer定律適用的另一個(gè)前提——稀溶液因濃度的改變使C與A關(guān)系偏離Beer定律離解、聚合（締合）、與溶劑作用當(dāng)前40頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（二）光學(xué)因素1．非單色光的影響非單色光是指含有二種或兩種以上波長(zhǎng)的光當(dāng)前41頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前當(dāng)前42頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前討論：

入射光的譜帶寬度嚴(yán)重影響吸光系數(shù)和吸收光譜形狀為什么測(cè)定波長(zhǎng)常選擇在吸收峰處？E1>E2，A值減少，產(chǎn)生負(fù)誤差;E2>E1，A值增大，產(chǎn)生誤差當(dāng)前43頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．雜散光的影響：雜散光是指從單色器分出的光不在入射光譜帶寬度范圍內(nèi)，與所選波長(zhǎng)相距較遠(yuǎn)雜散光來(lái)源：儀器本身缺陷；光學(xué)元件污染造成雜散光可使吸收光譜變形，吸光度變值3．反射光和散色光的影響：一般可用空白對(duì)比校正消除4．非平行光的影響：比色池要垂直放置，不同儀器測(cè)定A值不同。當(dāng)前44頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。四、透光率的測(cè)量誤差——ΔT影響測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差兩個(gè)因素：T和ΔTΔT影響因素：儀器噪音

1）暗噪音2）訊號(hào)噪音當(dāng)前45頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前1）暗噪音——與檢測(cè)器和放大電路不確切性有關(guān)與光訊號(hào)無(wú)關(guān)當(dāng)前46頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2）訊號(hào)噪音——與光訊號(hào)有關(guān)表明測(cè)量誤差較小的范圍一直可延至較高吸光度區(qū)，對(duì)測(cè)定有利當(dāng)前47頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第二節(jié)可見-紫外分光光度計(jì)分光光度計(jì)構(gòu)成的主要部件分光光度計(jì)的類型：當(dāng)前48頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第二節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)光路示意圖0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器放大顯示器當(dāng)前49頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第四十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第二節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)一、主要部件1.光源：用于提供足夠強(qiáng)度和穩(wěn)定的連續(xù)光譜。分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源(鎢燈)和氣體放電光源(氫燈)兩類。。（1）鎢燈或鹵鎢燈

在350nm~2500nm連續(xù)用于可見光區(qū)（2）氫燈或氘燈

在150nm~400nm連續(xù)用于紫外光區(qū)配穩(wěn)壓器配穩(wěn)流器當(dāng)前50頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第二節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)2.單色器：?jiǎn)紊魇前褟?fù)合光分散后，能獲得單色光的裝置。

五個(gè)部分作用：將光源發(fā)出的復(fù)色光按波長(zhǎng)順序分離成單色光。組成：狹縫2、準(zhǔn)直鏡2、色散元件(棱鏡、光柵)。當(dāng)前51頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。單色器光路示意圖入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400單色器的核心部分是色散元件，起分光的作用。當(dāng)前52頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。單色器光路示意圖當(dāng)前53頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。3．吸收池：玻璃——能吸收紫外線光，僅適用于可見光區(qū)石英——不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）當(dāng)前54頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。4．檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置光電池光電管光電倍增管二極管陣列檢測(cè)器5．記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng)當(dāng)前55頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。

1、光電池：用半導(dǎo)體材料制成的，用得最多的是硒光電池。其結(jié)構(gòu)和作用原理為：硒光電池當(dāng)前56頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光電管：它是在抽成真空或充有惰性氣體的玻璃或石英泡內(nèi)裝上2個(gè)電極構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)如圖：2.光電管1234當(dāng)前57頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。紅敏管625-1000nm藍(lán)敏管200-625nm光電管當(dāng)前58頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光電倍增管：它是一個(gè)非常靈敏的光電器件，可以把微弱的光轉(zhuǎn)換成電流其靈敏度比前2種都要高得多。它是利用九次電子發(fā)射以放大光電流，3.光電倍增管：當(dāng)前59頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第五十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光電倍增管1個(gè)光電子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子當(dāng)前60頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。訊號(hào)處理及顯示系統(tǒng)放大器表頭顯示熒屏顯示數(shù)字顯示當(dāng)前61頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。二、分光光度計(jì)的類型：當(dāng)前62頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。二、分光光度計(jì)的類型：（一）單光束分光光度計(jì)：0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示當(dāng)前63頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。特點(diǎn)：使用時(shí)來(lái)回拉動(dòng)吸收池

→移動(dòng)誤差對(duì)光源要求高比色池配對(duì)單光束分光光度計(jì)（751）：當(dāng)前64頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（二）單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器當(dāng)前65頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。雙光束分光光度計(jì)：特點(diǎn)：不用拉動(dòng)吸收池，可以減小移動(dòng)誤差對(duì)光源要求不高可以自動(dòng)掃描吸收光譜當(dāng)前66頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。光源單色器單色器檢測(cè)器切光器狹縫吸收池（三）雙光束雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)：當(dāng)前67頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。3．雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)特點(diǎn)：利用吸光度差值定量消除干擾和吸收池不匹配引起的誤差當(dāng)前68頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第三節(jié)紫外-可見分光光度分析方法一、定性分析二、純度檢測(cè)三、單組份的定量分析****四、多組分的定量分析-同時(shí)測(cè)定法*五、結(jié)構(gòu)分析六、比色分析法*當(dāng)前69頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第六十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。一、定性分析定性鑒別的依據(jù)→吸收光譜吸收光譜的形狀吸收峰的數(shù)目吸收峰的位置（波長(zhǎng)）吸收峰的強(qiáng)度（相應(yīng)的吸光系數(shù)）當(dāng)前70頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前1．對(duì)比吸收光譜的特征值當(dāng)前71頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．對(duì)比吸光度或吸光系數(shù)的比值例：當(dāng)前72頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前3．對(duì)比吸收光譜的一致性同一測(cè)定條件下，與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照比較當(dāng)前73頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測(cè)定1．純度檢查（雜質(zhì)檢查）1）峰位不重疊：找λ→使主成分無(wú)吸收，雜質(zhì)有吸收→直接考察雜質(zhì)含量2）峰位重疊：主成分強(qiáng)吸收，雜質(zhì)無(wú)吸收測(cè)定結(jié)果顯示為弱吸收→與純品比較，E↓雜質(zhì)強(qiáng)吸收>>主成分吸收→與純品比較，E↑，光譜變形當(dāng)前74頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．雜質(zhì)限量的測(cè)定：例：腎上腺素中微量雜質(zhì)——腎上腺酮含量計(jì)算2mg/mL-0.05mol/L的HCL溶液，λ310nm下測(cè)定規(guī)定A310≤0.05即符合要求的雜質(zhì)限量≤0.06%當(dāng)前75頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。二、吸收度的測(cè)量（補(bǔ)充內(nèi)容）1.比色皿的選擇:1.玻璃;1)石英2.溶劑的選擇:極限波長(zhǎng)3.波長(zhǎng)的選擇:4.空白對(duì)比5.測(cè)定步驟1)本身調(diào)零;2)空白調(diào)零;3)測(cè)量樣品溶液的濃度

A=0.2~0.8當(dāng)前76頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。1．吸光系數(shù)法2．標(biāo)準(zhǔn)曲線法3．對(duì)照法：外標(biāo)一點(diǎn)法4．增量法三、單組分的定量方法當(dāng)前77頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前1．吸光系數(shù)法（絕對(duì)法）當(dāng)前78頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。例：維生素B12的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)為207，用1cm比色池測(cè)得某維生素B12溶液的吸光度是0.414，求該溶液的濃度解：當(dāng)前79頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第七十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。練習(xí)例：精密稱取B12樣品25.0mg，用水溶液配成100ml，精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm處測(cè)定吸光度為0.507，求B12的百分含量？。解：補(bǔ)充系數(shù)法求含量當(dāng)前80頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．標(biāo)準(zhǔn)曲線法過(guò)程：配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收度繪制工作曲線C~A曲線求出方程樣品溶液測(cè)定A值由方程求出濃度當(dāng)前81頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。

A200240280320360400440nm2.

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

max當(dāng)前82頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。CxAxA0Concentration要求

1.r>0.9992.n=5-73.待測(cè)濃度盡量在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間位置標(biāo)準(zhǔn)曲線(A=aC+b,r)當(dāng)前83頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前3．對(duì)照法(外標(biāo)一點(diǎn)法)注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋倍數(shù)相同時(shí)當(dāng)前84頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。(三)對(duì)照法待測(cè)樣品(Unknownsample)標(biāo)準(zhǔn)樣品(Referencesample)當(dāng)前85頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。要求-標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度應(yīng)盡量接近樣品濃度=A標(biāo)A樣C標(biāo)C樣C樣=C標(biāo)·A樣A標(biāo)當(dāng)前86頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。第二節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)當(dāng)前68頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。π電子→不飽和的化合物或基團(tuán)另一類是氧化還原反應(yīng)。特點(diǎn)：λ最大>200nm，ε最大>104C=1/2C0，A=1/2A0；1．Lamber-beer定律的適用條件（前提）有些有色配合物易溶于有機(jī)溶劑，可進(jìn)行萃取光度分析，提高了測(cè)定的靈敏度和選擇性。當(dāng)前61頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。分光光度計(jì)構(gòu)成的主要部件四、電磁輻射與物質(zhì)的相互作用4．非平行光的影響：比色池要垂直放置，不同儀器測(cè)定A值不同。第三十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。D：H2C=CH-C=O練習(xí)例：維生素B12的含量測(cè)定精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀釋至10.00mL；另配制對(duì)照液，精密稱定對(duì)照品25.00mg，加水稀釋至1000毫升在361nm處，用1cm吸收池，分別測(cè)定吸光度為0.508和0.518，求B12注射液的濃度以及標(biāo)示量的百分含量（該B12注射液的標(biāo)示量為100μg/毫升）。當(dāng)前87頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。解：

1）對(duì)照法當(dāng)前88頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。練習(xí)2）吸光系數(shù)法當(dāng)前89頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第八十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前四、多組分的定量方法三種情況：1．兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）兩組分在各自λ最大下不重疊→分別按單組分定量當(dāng)前90頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前2．兩組分吸收光譜部分重疊λ1→測(cè)A1→b組分不干擾→可按單組分定量測(cè)Caλ2→測(cè)A2→組分干擾→不能按單組分定量測(cè)Ca當(dāng)前91頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前3．兩組分吸收光譜完全重疊——混合樣品測(cè)定（1）解線性方程組法（2）等吸收點(diǎn)法（3）等吸收雙波長(zhǎng)消去法（4）系數(shù)倍率法當(dāng)前92頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十二頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（1）解線性方程組法步驟：當(dāng)前93頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。2.等吸收點(diǎn)法等吸收點(diǎn)：兩物質(zhì)在某波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)相等，該波長(zhǎng)為~Ca=Cb當(dāng)前94頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十四頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。3．等吸收雙波長(zhǎng)法步驟：消除a的影響后測(cè)bab當(dāng)前95頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十五頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。續(xù)前消去b的影響，測(cè)定a組分注：須滿足兩個(gè)基本條件選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下干擾組分具有等吸收點(diǎn)選定的兩個(gè)波長(zhǎng)下待測(cè)物的吸光度差值應(yīng)足夠大ab當(dāng)前96頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十六頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。五、有色化合物的測(cè)定方法

——光電比色法（一）顯色反應(yīng)和顯色劑：1.顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。當(dāng)前97頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十七頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。顯色反應(yīng)一般分為兩大類：一類是配位反應(yīng)；另一類是氧化還原反應(yīng)。Fe3＋＋SCN－=FeSCN2+；Mn2＋－5e＋4H2O=MnO4－＋8H＋在這兩類反應(yīng)中，用得較多的是配位反應(yīng)。當(dāng)前98頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十八頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（2）有機(jī)顯色劑：1）有機(jī)顯色劑的優(yōu)點(diǎn)：A.具有鮮明的顏色，ε都很大（一般可達(dá)到104以上），所以測(cè)定的靈敏度很高；B.生成的一般為螯合物，穩(wěn)定性很好，一般離解常數(shù)都很??；2.顯色劑：

（1）無(wú)機(jī)顯色劑：當(dāng)前99頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第九十九頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。C.選擇性好D.有些有色配合物易溶于有機(jī)溶劑，可進(jìn)行萃取光度分析，提高了測(cè)定的靈敏度和選擇性。當(dāng)前100頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第一百頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。（3）常見的有機(jī)顯色劑：1）磺基水楊酸：其結(jié)構(gòu)式如下：它可用于測(cè)定三價(jià)鐵離子。當(dāng)前101頁(yè)，共111頁(yè)，星期日。第一百零一頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。作用：將光源發(fā)出的復(fù)色光按波長(zhǎng)順序分離成單色光。雜散光可使吸收光譜變形，吸光度變值第二十三頁(yè)，共一百一十一頁(yè)。分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源(鎢燈)和氣體放電光源(氫燈)兩類。第五十