IHC產(chǎn)品培訓(xùn)材料-中文版

BioworldIHC產(chǎn)品培訓(xùn)IHC技術(shù)部目錄1,產(chǎn)品清單2,產(chǎn)品使用3,銷售技巧4,投訴處理1,產(chǎn)品清單BioworldIHC產(chǎn)品些列共有47個(gè)產(chǎn)品,包括試劑盒和相關(guān)輔助試劑。其中BD5001——BD5013是最常用的組化和熒光試劑盒。1,產(chǎn)品清單BD5001SuperSensitiveTM即用型超敏免疫組化二抗試劑盒（鼠/兔）BD5002羊抗鼠FITC熒光二抗試劑盒BD5003羊抗兔FITC熒光二抗試劑盒BD5004羊抗鼠TRITC熒光二抗試劑盒BD5005羊抗兔TRITC熒光二抗試劑盒BD5006鼠抗羊FITC熒光二抗試劑盒BD5007鼠抗羊TRITC熒光二抗試劑盒BD5008兔抗綿羊FITC熒光二抗試劑盒BD5009兔抗綿羊TRITC熒光二抗試劑盒BD5010DAPI試劑盒BD5011Hoechst33343試劑盒BD5012PI試劑盒BD5013Hoechst33343/PI試劑盒BD5014抗淬滅劑BD5015山羊封閉血清工作液BD5016兔血清原液BD5017小鼠血清BD5018山羊血清原液BD5019BSA溶液（PBS配制）BD5020BSA溶液（TBS配制）BD5021一抗稀釋液BD5022熒光二抗稀釋液BD50231%TritonX-100BD50243%雙氧水BD502530%雙氧水BD5026PBS溶液1,產(chǎn)品清單BD5027TBS溶液BD5028PBS干粉BD5029TBS干粉BD5030BSA固體BD5031DAB固體BD5032檸檬酸修復(fù)液BD5033EDTA修復(fù)液BD5034切片保護(hù)液BD5035蘇木精染液BD5036伊紅BD5037AEC液體kitBD5038DAB液體kitBD5039免疫組化濕盒10片BD5040載玻片盒100片BD5041載玻片操作板BD5042高清潔蓋玻片BD5043防脫載玻片BD5044中性樹(shù)膠BD5045APESBD5046HRP穩(wěn)定劑BD5047免疫組化濕盒20片2,產(chǎn)品使用BD5001用于檢測(cè)小鼠和兔來(lái)源的一抗，DAB顯色，兩步法。內(nèi)含:雙氧水，封閉液，一抗增強(qiáng)劑，HRP聚合物，DAB濃縮液和DAB底物稀釋液6個(gè)產(chǎn)品。完全滿足組化實(shí)驗(yàn)中從封閉到顯色的全部試劑需求。（如圖，棕色為陽(yáng)性，藍(lán)色為蘇木精復(fù)染）除HRP聚合物外，試劑盒中其余5種試劑均有相關(guān)配套/輔助試劑。2,產(chǎn)品使用與BD5001相關(guān)的配套/輔助試劑是:BD5015/BD5018:山羊血清工作液/原液，用于封閉可能與二抗結(jié)合的抗原位點(diǎn)。BD5024/BD5025:3%和30%雙氧水，用于封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。BD5037/BD5038/BD5031:AEC/DABkit/DAB固體，用于顯色，AEC為紅色，DAB為棕色；DAB最為常用，可脫水后永久保存，AEC不能與酒精接觸，所以保存時(shí)間較短。BD5019/BD5020/BD5030:BSA溶液/BSA固體，主要用于抗原位點(diǎn)封閉，有人喜歡用BSA代替羊血清。2,產(chǎn)品使用與BD5001相關(guān)的配套/輔助試劑是:BD5035:蘇木精染液，用于組化最后的細(xì)胞核復(fù)染，這一步80%的實(shí)驗(yàn)是需要的。BD5042/BD5044:高清潔蓋玻片/中性樹(shù)膠，蓋玻片是封片過(guò)程中必須的；但中性樹(shù)膠僅用于DAB顯色或脫水封片，可以永久保存。BD5023:1%Triton也是組織組化和細(xì)胞組化常用的試劑，用于破膜，增加細(xì)胞膜和核膜的通透性。BD5021:一抗稀釋液，用于組化一抗的稀釋，可長(zhǎng)期保存。2,產(chǎn)品使用BD5002-5009:熒光二抗試劑盒FITC是綠色熒光，TRITC是紅色熒光。兩種可以組成紅綠雙標(biāo)。注意雙標(biāo)時(shí)一抗要不同來(lái)源，二抗與一抗不同來(lái)源。（如圖所示，綠色是FITC標(biāo)記二抗，紅色是TRITC標(biāo)記二抗）上述熒光試劑盒里含有封閉液、熒光二抗稀釋液、熒光二抗、防淬滅劑四種。滿足從封閉到封片的全部需要。試劑盒所有試劑均有單獨(dú)的配套試劑。2,產(chǎn)品使用與熒光二抗試劑盒配套/輔助試劑:BD5014:抗淬滅劑，用于熒光二抗的最后封片，可以減緩熒光的衰減和淬滅；至少保存一周。BD5022:熒光二抗稀釋液，用于稀釋熒光二抗，可以使熒光二抗長(zhǎng)期保持有效。BD5015——BD5020:封閉血清。用于抗原位點(diǎn)的封閉。二抗來(lái)源對(duì)應(yīng)血清，如羊抗鼠熒光二抗，用羊血清封閉；鼠抗羊熒光二抗，用鼠血清封閉。BD5023:1%Triton也是組織組化和細(xì)胞組化常用的試劑，用于破膜，增加細(xì)胞膜和核膜的通透性。2,產(chǎn)品使用與熒光二抗試劑盒配套/輔助試劑:BD5010:DAPI試劑盒，用于細(xì)胞核染色，最常用于熒光染色后細(xì)胞核著色和檢測(cè)細(xì)胞凋亡；細(xì)胞核為藍(lán)色，活細(xì)胞死細(xì)胞均能著色，與Hoechst33343同效，但是抗淬滅效果更好；與綠色和紅色熒光組成雙標(biāo)/三標(biāo)熒光；（如左下圖，藍(lán)色為Hoechst核染，綠色為FITC標(biāo)記熒光二抗，紅色為T(mén)RITC標(biāo)記熒光二抗）BD5011:Hoechst33343試劑盒，用于細(xì)胞核染色，最常用于熒光染色后細(xì)胞核著色和檢測(cè)細(xì)胞凋亡；細(xì)胞核為藍(lán)色，活細(xì)胞死細(xì)胞均能著色，與DAPI同效；與綠色和紅色熒光組成雙標(biāo)/三標(biāo)熒光。（如右下圖，藍(lán)色為Hoechst核染，綠色為FITC標(biāo)記熒光二抗）2,產(chǎn)品使用BD5010:DAPI試劑盒。用于細(xì)胞核染色，最常用于熒光染色后細(xì)胞核著色和檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)，主要是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，活細(xì)胞死細(xì)胞均能著色；活細(xì)胞為淡藍(lán)色，凋亡細(xì)胞為亮藍(lán)色。（如下圖）用免疫熒光前面已經(jīng)介紹。與綠色和紅色熒光組成雙標(biāo)或三標(biāo)熒光（不再贅述）。（與BD5011Hoechst同效）2,產(chǎn)品使用BD5011:Hoechst33343試劑盒用于細(xì)胞核染色，最常用于熒光染色后細(xì)胞核著色和檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)，主要是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，活細(xì)胞死細(xì)胞均能著色；活細(xì)胞為淡藍(lán)色，凋亡細(xì)胞為亮藍(lán)色。（如下圖）用免疫熒光前面已經(jīng)介紹。與綠色和紅色熒光組成雙標(biāo)或三標(biāo)熒光（不再贅述）。（與BD5010DAPI同效）2,產(chǎn)品使用BD5012:PI試劑盒。用于細(xì)胞核染色，最常用檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)，主要是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，只有凋亡晚期或死細(xì)胞能著色；活細(xì)胞不著色，凋亡細(xì)胞為紅色。（如左下圖）有時(shí)也有客戶喜歡用于細(xì)胞免疫熒光的細(xì)胞核標(biāo)記。（如右下圖，紅色為PI染色細(xì)胞核，綠色為目的蛋白）2,產(chǎn)品使用BD5013:Hoechst33343/PI試劑盒用于細(xì)胞核染色，最常用檢測(cè)細(xì)胞凋亡。PI只有對(duì)凋亡晚期或死細(xì)胞能著色；活細(xì)胞不著色，凋亡細(xì)胞為紅色。Hoechst33343對(duì)活細(xì)胞死細(xì)胞均能著色；活細(xì)胞為淡藍(lán)色，凋亡細(xì)胞為亮藍(lán)色。（如圖）2,產(chǎn)品使用兩種產(chǎn)品既可以用于IHC封閉,也可以用于WB封閉。BD5019BSA溶液（PBS配制）BD5020BSA溶液（TBS配制）2,產(chǎn)品使用BD5032/BD5033:檸檬酸修復(fù)液/EDTA修復(fù)液:主要用于石蠟切片的抗原修復(fù)。檸檬酸修復(fù)液又叫枸櫞酸修復(fù)液，是傳統(tǒng)的修復(fù)液；EDTA是新興修復(fù)液，不同客戶選擇不同?，F(xiàn)在病理科逐漸用EDTA替代檸檬酸。BD5034:切片保護(hù)液主要用于冰凍切片的-20℃保存。BD5032檸檬酸修復(fù)液BD5033EDTA修復(fù)液BD5034切片保護(hù)液2,產(chǎn)品使用上述四種緩沖液濃縮液或干粉是IHC\IF\ICC\WB最常用的緩沖試劑。非常方便客戶使用。BD5026PBS溶液BD5027TBS溶液BD5028PBS干粉BD5029TBS干粉2,產(chǎn)品使用上述兩種產(chǎn)品用途比較特殊。APES主要用于處理載玻片防脫功能,主要替代品是多聚賴氨酸（太貴）。HRP穩(wěn)定劑主用用于HRP標(biāo)記的二抗、抗原的保護(hù)。BD5045APESBD5046HRP穩(wěn)定劑2,產(chǎn)品使用上述6款產(chǎn)品是組化實(shí)驗(yàn)中必須用到的操作器材。10片裝濕盒是耐高溫的(100℃可用)。BD5039免疫組化濕盒10片BD5040載玻片盒100片BD5041載玻片操作板BD5042高清潔蓋玻片BD5043防脫載玻片BD5047免疫組化濕盒20片2,產(chǎn)品使用上述兩種產(chǎn)品是用于HE染色的染料,其中蘇木精將細(xì)胞核染成藍(lán)色；伊紅將細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色,在病理觀察中最常用,也是最古老的染料,至今一直不可替代。其中蘇木精是DAB組化中用于染核的必備染料。BD5035蘇木精染液BD5036伊紅2,產(chǎn)品使用IHC技術(shù)服務(wù):我把IHC技術(shù)服務(wù)也列為產(chǎn)品使用行列；具體在年中會(huì)的PPT已經(jīng)有所介紹，在此不贅述。收費(fèi)細(xì)節(jié)，將在后面推出。3,銷售技巧在銷售過(guò)程中肯定會(huì)遇到很多的同行競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品,特別是價(jià)格戰(zhàn)。遇到此類問(wèn)題時(shí),要跟客戶強(qiáng)調(diào)我們產(chǎn)品的優(yōu)點(diǎn)。先將幾款產(chǎn)品的有點(diǎn)和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手產(chǎn)品的缺點(diǎn)對(duì)比列出來(lái),希望對(duì)銷售有所幫助。3,銷售技巧BD5001:SuperSensitiveTM即用型超敏免疫組化二抗試劑盒（鼠/兔）優(yōu)點(diǎn):1，試劑齊全，內(nèi)含6種試劑，同時(shí)抗鼠/抗兔，節(jié)約成本；2，操作時(shí)間短，只需10分鐘；3，靈敏度非常高，非特異性非常低；4，品質(zhì)目前最優(yōu)，非生物素依賴。對(duì)手缺點(diǎn):1，試劑盒不全，需要購(gòu)買其他輔助試劑；2，操作時(shí)間長(zhǎng)；3，生物素標(biāo)記的二抗會(huì)有背景；靈敏度低；4，抗鼠與兔分開(kāi)，需重復(fù)購(gòu)買。3,銷售技巧BD5001-BD5009:熒光二抗試劑盒系列優(yōu)點(diǎn):1，內(nèi)含封閉液，稀釋液，抗淬滅劑等配套試劑，一次購(gòu)買完成，無(wú)需另行購(gòu)買；2，質(zhì)量可靠穩(wěn)定，1:200稀釋可用，質(zhì)檢效果非常好；競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手缺點(diǎn):1，都是單獨(dú)的熒光二抗，沒(méi)有相關(guān)配套試劑，需另行購(gòu)買；2，部分國(guó)產(chǎn)試劑質(zhì)量不可靠；3,銷售技巧BD5010-BD5013:熒光核染色試劑盒系列優(yōu)點(diǎn):1，為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無(wú)需另行配置；2，目前國(guó)內(nèi)性價(jià)比最高；按需購(gòu)買，不會(huì)造成浪費(fèi)；3，原料來(lái)源于sigma；4，Hoechst和PI試劑盒只需購(gòu)買一次，無(wú)需購(gòu)買兩次；客戶也可以根據(jù)自己需要隨意搭配，如DAPI與PI聯(lián)合使用。對(duì)手缺點(diǎn):1，固體分裝，需自己配置；2，液體價(jià)格太高，沒(méi)有稀釋液；3,銷售技巧由于很多IHC試劑盒和IF用的二抗都沒(méi)有像我們這樣配套齊全，所以即使遇到客戶以及買了二抗試劑盒或者熒光二抗，仍然可以向客戶推薦相應(yīng)配套試劑:如一抗稀釋液，山羊血清工作液，DABkit/AECkit，DAPIkit/Hoechstkit，熒光二抗稀釋液，抗淬滅劑，切片保護(hù)液，中性樹(shù)膠，1%TritonX-100，蘇木精染液，載玻片，蓋玻片，濕盒，載玻片操作板，載玻片盒等除二抗試劑盒和熒光二抗之外的所有配套試劑。百思必有一疏，總有一種產(chǎn)品是客戶沒(méi)有想到的。當(dāng)然，我們也是不是100%齊全，但是99%齊全。3,銷售技巧與組化相關(guān)但是我們沒(méi)有是試劑:1，多聚賴氨酸，用于處理細(xì)胞培養(yǎng)用蓋玻片。因?yàn)閮r(jià)格太高，沒(méi)有進(jìn)貨，建議sigma（sigma,NO:P7280）購(gòu)買，或者建議可以直接購(gòu)買已經(jīng)處理好的蓋玻片（Nunc,NO:150067,174969,174977,174950,174985,174934）。2，胰酶，在WB實(shí)驗(yàn)中用到的最多；此處ICC用到的較少，最好分類于細(xì)胞培養(yǎng)類，invtrogen有；3，MMT檢測(cè)細(xì)胞活力試劑；MMT最好現(xiàn)用現(xiàn)配，不好長(zhǎng)期保存，且價(jià)格低廉，很容易從sigma買到現(xiàn)貨。以上廠家僅僅是推薦，具體銷售根據(jù)自己掌握的情況跟客戶推薦。4,投訴與建議遇到產(chǎn)品投訴時(shí),不必驚慌,任何產(chǎn)品都會(huì)遇到產(chǎn)品投訴,即使是最好的蘋(píng)果手機(jī)和電腦?？蛻舻耐对V有助于我們產(chǎn)品質(zhì)量的提升,所以投訴有時(shí)候是有益的。遇到投訴最主要的是耐心和傾聽(tīng),即使記錄客戶遇到的問(wèn)題。投訴很多時(shí)候是因?yàn)榭蛻粼谑褂卯a(chǎn)品時(shí)沒(méi)有仔細(xì)看說(shuō)明書(shū)造成的。還有產(chǎn)品失效是客戶沒(méi)有按照說(shuō)明書(shū)要求保存造成的。4,投訴與建議可能會(huì)投訴的幾款產(chǎn)品常見(jiàn)問(wèn)題:1，BD5001常見(jiàn)問(wèn)題:1，有背景；2，無(wú)顯色；3，配套試劑不夠解決方案:1，銷售首先清楚:有背景的原因肯定不是二抗試劑盒本身造成的，此產(chǎn)品質(zhì)量相當(dāng)可靠（不可以這樣跟客戶說(shuō)，但心里要清楚）；造成背景的原因有很多，比如石蠟切片脫蠟不徹底；冰凍切片H2O2封閉不徹底；一抗非特異性；二抗與組織反應(yīng)。逐一突破:如果是石蠟切片脫蠟不徹底，一般跟DAB也會(huì)直接有顏色反應(yīng)，建議客戶用載玻片與DAB顯色液直接反應(yīng)觀察；冰凍切片類似，建議與DAB顯色液直接反應(yīng)即可知道；對(duì)于一抗非特異性，建議客戶增加一抗來(lái)的陰性IgG（我們公司有貨）做對(duì)照或一抗來(lái)源血清做對(duì)照，觀察是否有顏色反應(yīng)，如果有，說(shuō)明組織本身與一抗來(lái)源的IgG結(jié)合，必須更換一抗；對(duì)于二抗非特異性反應(yīng)，本試劑盒極少出現(xiàn)，但也不排除此類情況，也不是組織本身還有大量小鼠IgG或兔IgG的時(shí)候，客戶可以直接取組織與二抗反應(yīng)，觀察；可以用二抗來(lái)源的血清封閉，如果封閉后仍有反應(yīng)，建議客戶更換二抗試劑盒。4,投訴與建議2，無(wú)顯色無(wú)顯色的原因:1，二抗與一抗不匹配，本試劑盒只用于小鼠和兔來(lái)源一抗，且能夠用于IHC的一抗；2，DAB顯色液失效；直接取試劑盒中的HRP聚合物與DAB顯色液反應(yīng)，觀察是否有顏色反應(yīng)，沒(méi)有反應(yīng)，證明DAB可能失效；3，一抗與抗原不結(jié)合；更換一抗。4，HRP聚合物失效，取新鮮配制的DAB顯色液與HRP反應(yīng)，觀察顏色反應(yīng)；5，用熒光二抗檢測(cè)一抗，看是一抗還是二抗造成的不顯色。6，脫蠟是否徹底，如果脫蠟不徹底，一抗不與抗原結(jié)合，二抗孵育后也可能不顯色；7，抗原修復(fù)方法不對(duì)或者不到位，或者修復(fù)過(guò)度。不同一抗對(duì)抗原修復(fù)的要求有所不同，有的抗體對(duì)于不修復(fù)組織更靈敏。8，IHC是一個(gè)步驟簡(jiǎn)單但是問(wèn)題復(fù)雜的技術(shù)，沒(méi)有任何實(shí)驗(yàn)一次就成功的，總要有個(gè)熟悉過(guò)程。掌握技術(shù)是次要的，解決問(wèn)題才是學(xué)習(xí)的關(guān)鍵。4,投訴與建議3,配套試劑不夠BD5001中的DAB濃縮液可能會(huì)不夠用,可以用BD5031（DAB固體）或BD5038（DAB液體kit）替代；我們的滴瓶每滴是40ul的量,假設(shè)每張組織片用80ul,可以做60多張載玻片,如果客戶很節(jié)約,只用1滴,則可以做120多張；4,投訴與建議BD5002-BD5009:熒光二抗系列。熒光抗體在使用時(shí)遇到的問(wèn)題跟組化的類似。特