紫外分光光度法測(cè)定廣金錢(qián)草中總黃酮含量

紫外分光光度法測(cè)定廣金錢(qián)草中總黃酮含量摘要：目的：建立廣金錢(qián)草中總黃酮含量的測(cè)定方法。方法：以硝酸鋁、亞硝酸鈉及氫氧化鈉為顯色劑，以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法測(cè)定。結(jié)果：蘆丁在4.4μg/mL~53.1μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=09999（n=7），平均回收率為100.2％，RSD為1.5％。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便易行，有助于廣金錢(qián)草藥材的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：廣金錢(qián)草；蘆??；總黃酮；分光光度法廣金錢(qián)草（Desmodiumstyracifolium（Osbeck）Merr.）是豆科山螞蝗屬植物，是我國(guó)常用的傳統(tǒng)中藥，具有清熱、利尿、排石的功能，用于泌尿系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng)結(jié)石、膽石癥、急性黃疸型肝炎等［1］，含黃酮類(lèi)，生物堿類(lèi)，皂苷類(lèi)，酚類(lèi)等成分。藥理研究證明：廣金錢(qián)草中的三萜皂苷類(lèi)和黃酮苷類(lèi)化合物有預(yù)防乙二醇和維生素D造成的大鼠草酸鈣尿路結(jié)石形成的效果，廣金錢(qián)草總黃酮對(duì)心腦血管病理模型具有很好的改善作用。《中國(guó)藥典》對(duì)其含量測(cè)定尚無(wú)收載，本研究采用紫外分光光度法對(duì)廣金錢(qián)草中總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，旨在為廣金錢(qián)草藥材及制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。1儀器與試藥AA-200電子天平（美國(guó)丹法），DGB/20-002臺(tái)式干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠），KQ-100E超聲波清洗器（江蘇昆山），UV-2501PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）。廣金錢(qián)草全草分別購(gòu)于廣西南寧、廣西梧州、廣東廣州，經(jīng)南寧食品藥品檢驗(yàn)所鑒定為正品廣金錢(qián)草，蘆丁對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)0080-9705），試劑均為AR級(jí)。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在120℃下干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品2.2供試品溶液的制備精密稱(chēng)取廣金錢(qián)草4g，加60%乙醇70mL回流3小時(shí)，放冷，濾過(guò)，殘?jiān)?0％乙醇20mL超聲30min，濾過(guò)，合并濾液，置100mL量瓶中，濾渣用60％乙醇洗滌，洗液置同一量瓶中，用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取25mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。2.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇精密量取對(duì)照品溶液3mL，置25mL量瓶中，加30％乙醇至6.0mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，再加10％硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min。加氫氧化鈉試液10mL，再加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，測(cè)定吸收光譜，在509nm處有最大吸收。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分置于25mL容量瓶中，各加30％乙醇至6.0mL，按2.3項(xiàng)下，自“加5%亞硝酸鈉溶液1mL”起依法操作，在509nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度（C）為縱坐標(biāo)，吸光度（A）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：C=8.8471E-05A-1.7453E-07，r=0.9999（n=7），結(jié)果表明，蘆丁濃度在4.4μg/mL~53.1μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液3mL，按2.3項(xiàng)方法操作，于509nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度5次。結(jié)果顯示平均吸光度為0.398，RSD為0.45％。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取供試品溶液3mL，按2.3項(xiàng)方法操作，于0、10、30、45、60、90min時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果表明，蘆丁與鋁離子形成的紅色絡(luò)合物在45min內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.21％。2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取藥材樣品4.0g，共5份，按2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)方法操作，于509nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按回歸方程計(jì)算，測(cè)得其總黃酮含量為1.21%，RSD為0.9％。2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知總黃酮含量（1.21%）的樣品各6份，每份精密稱(chēng)取2g，按2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液3mL，置25mL容量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液15mL，加30％乙醇至6.0mL，按2.3項(xiàng)，自“加亞硝酸鈉溶液1mL”起依法操作，按回歸方程進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.9樣品的測(cè)定精密稱(chēng)取藥材樣品4.0g，按2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.3項(xiàng)方法操作，于509nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按回歸方程計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。表2不同產(chǎn)地廣金錢(qián)草的總黃酮含量3討論3.1提取溶劑的考察比較了甲醇、三氯甲烷、60%乙醇［2］3種溶劑的提取效果，以60%乙醇回流提取時(shí)的總黃酮含量高于其它溶劑提取，故選用60%乙醇為提取溶劑。3.2提取方法的考察比較了超聲、回流、索式提取3種方法，以回流3h后，超聲0.5h提取所得總黃酮含量較高，故選用該法提取。3.3測(cè)定方法的選擇以蘆丁為對(duì)照品，以硝酸鋁、亞硝酸鈉及氫氧化鈉為顯色劑，利用紫外分光光度計(jì)對(duì)廣金錢(qián)草中總黃酮的含量進(jìn)行測(cè)定的方法，具有簡(jiǎn)便易行及結(jié)果穩(wěn)定可靠等優(yōu)點(diǎn)。故選用該法測(cè)定。參考文獻(xiàn)：［1］趙學(xué)敏