家畜傳染病學(xué)禽病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

家畜傳染病學(xué)、禽病學(xué)

實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

王川慶劉紅英陳陸

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院

二零零四年二月一日

目錄

第一部分基本技術(shù)

一、消毒

二、免疫接種

三、剖檢技術(shù)及病變檢查要點(diǎn)

四、細(xì)菌分離、培養(yǎng)技術(shù)

五、藥敏試驗(yàn)

六、病毒分離培養(yǎng)技術(shù)

七、雞胚接種技術(shù)

八、動物試驗(yàn)技術(shù)

九、病原體的鑒定方法

第二部分傳染病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

一、雞新城疫的診斷及免疫監(jiān)測技術(shù)

二、減蛋綜合征的診斷及抗體檢測

三、馬立克氏病瓊擴(kuò)試驗(yàn)

四、雞傳染性法氏囊病瓊擴(kuò)試驗(yàn)

五、雞傳染性喉氣管炎的診斷

六、傳染性支氣管炎的診斷及防制

七、包涵體肝炎的實(shí)驗(yàn)室診斷

八、禽腦脊髓炎的實(shí)驗(yàn)室診斷

九、雞傳染性貧血的實(shí)驗(yàn)室診斷

十、禽霍亂的診斷

H■"一、雞白痢的檢疫

十二、雞枝原體的檢疫

十三、大腸桿菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷

十四、禽流感的實(shí)驗(yàn)室診斷

十五、炭疽的診斷和防治

十六、布病的實(shí)驗(yàn)室診斷

十七、結(jié)核的實(shí)驗(yàn)室診斷

十八、巴氏桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷

十九、口蹄疫的實(shí)驗(yàn)室診斷

二十、兔瘟的診斷

二十一、乳膠凝集試驗(yàn)檢測豬細(xì)小病毒

二十二、犬細(xì)小病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷

二十三、間接血凝抑制試驗(yàn)測定豬瘟抗體

二十四、乳膠凝集試驗(yàn)檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體

二十五、乳膠凝集試驗(yàn)檢測豬偽狂犬病毒抗體

二十六、乳膠凝集試驗(yàn)測豬萎縮性鼻炎病毒抗體

二十七、豬圓環(huán)病毒的血清學(xué)診斷

第三部分疫苗制造技術(shù)

一、新城疫I系弱毒疫苗的制造

二、雞新城疫II系弱毒疫苗的制造

三、雞新城疫LaSota系弱毒疫苗的制造

四、雞痘鶴鶉化弱毒疫苗制造

五、氫氧化鋁膠苗的制造

六、動物臟器組織滅活疫苗的制造

七、油乳劑滅活疫苗的制造

八、豬瘟兔化弱毒苗的制備

第四部分抗體制備技術(shù)

一、傳染性法氏囊病高免卵黃抗體的制備

二、抗新城疫高免血清的制備

三、豬瘟高免血清的制備及應(yīng)用

四、抗體提純技術(shù)

第一部分基本技術(shù)

一、消毒

1.人員的消毒：所有進(jìn)入禽場生產(chǎn)區(qū)的人員，必須在更衣室內(nèi)更衣?lián)Q鞋，然后方可進(jìn)

入場區(qū)。要控制或謝絕參觀人員進(jìn)入禽舍內(nèi)。在場區(qū)（生產(chǎn)區(qū)）入口應(yīng)設(shè)有噴霧消毒裝置和消

毒池。噴霧消毒藥物可用0.1%新潔爾滅或3?5%來蘇兒，使用新潔爾滅時應(yīng)避免與肥皂或

堿類接觸，以防減弱其殺菌能力，消毒池要經(jīng)常更換消毒藥液。凡進(jìn)入場內(nèi)的人員及車輛都

必須經(jīng)過消毒。也可采用紫外線照射消毒。

2.禽舍消毒：禽舍在消毒前必須進(jìn)行徹底清掃與沖刷，以增強(qiáng)消毒效果，一般按以下

步驟進(jìn)行消毒：

向禽舍的空間噴灑霧狀消毒劑，使禽舍內(nèi)空中飄浮的塵埃沉落，常用藥為3?5%的來

蘇兒溶液。

將舍內(nèi)一切可移動的設(shè)備移出。進(jìn)行洗刷和消毒。夏季應(yīng)盡量利用陽光曝曬消毒；用1?

2%熱氫氧化鈉，20%草木灰，10?20%石灰乳洗刷墻壁和地面；金屬籠或用具沖洗晾干后，

用0.1%新潔爾滅溶液噴灑，或用火焰噴射消毒。

最后將禽舍密閉堵嚴(yán)，用甲醛熏蒸消毒。根據(jù)禽舍污染微生物種類和密閉程度，一般

每平方米空間用甲醛20?40毫升，高鎰酸鉀是甲醛的半量（即2毫升甲醛、1克高鎰酸鉀、

1毫升清水）放在大容量瓷器內(nèi)進(jìn)行熏蒸消毒。操作時先把盛有高鋅酸鉀的瓷器放在需要煙

熏消毒的地方，然后加入甲醛，決不可將高鋸酸鉀加到甲醛中去，這兩種藥物結(jié)合后生成大

量的熱，所以在操作完后應(yīng)立即離開現(xiàn)場，切忌使煙霧進(jìn)入眼內(nèi)。熏蒸時間最少2?4小時，

延長至8小時更好，消毒后，要打開窗戶，排除剩余的甲醛蒸氣，消毒后的禽舍應(yīng)閉置1?

2周后再使用。

3.用具的消毒：禽場的蛋箱、籠子、雛盒、工具等。應(yīng)先洗刷干凈，晾干或曬干，再

放到密閉的房間內(nèi)用甲醛熏蒸5?10小時，進(jìn)行嚴(yán)格消毒。

4.孵化消毒：種蛋的消毒方法很多，下面介紹幾種：（1）福爾馬林消毒法：將種蛋放入

孵化機(jī)內(nèi)，關(guān)閉進(jìn)、出氣孔和鼓風(fēng)機(jī)。每立方米用30毫升福爾馬林，另加15克高鎰酸鉀，

經(jīng)20?30分鐘后，打開門和進(jìn)出氣孔，開動鼓風(fēng)機(jī)。這種方法對病毒和霉形體的消毒效果

顯著。（2）新潔爾滅消毒法：新潔爾滅溶液呈堿性，忌與肥皂、碘、高鎰酸鉀配用。消毒種

蛋時配成千分之一濃度的溶液。噴于種蛋表面。有較強(qiáng)的除污和消毒作用。（3）氯消毒法：

將種蛋浸入含1.5%活性氯的漂白粉溶液中3分鐘，取出晾干。（4）高鎰酸鉀消毒法：用千分

之5的高缽酸鉀溶液泡種蛋1分鐘，取出晾干。注意高鎰酸鉀溶液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。（5）紅霉

素消毒法：將孵化前的種蛋先加溫至37.8℃,然后置于2?4℃紅霉素溶液中。浸泡15分鐘。

紅霉素溶液的濃度是每1000毫升含400?1000毫克。（6）氫氧化鈉消毒法:將種蛋浸泡在0.5%

的氫氧化鈉溶液中5分鐘。能有效地殺滅蛋殼表面的鼠傷寒沙門氏菌。（7）慶大霉素消毒：

用100毫升水含0.5克慶大霉素的溶液浸泡種蛋，能殺死種蛋中嚴(yán)重污染的沙門氏菌。孵化

室每天用3%來蘇兒噴泗消毒，蛋盤、出雛器用3%來蘇兒洗刷消毒后，再用清水沖洗干凈。

5.環(huán)境消毒：禽場周圍每季度噴灑消毒一次，運(yùn)動場每年更換一次表土或清掃干凈用

火焰徹底消毒。

6.糞便消毒：最常用生物熱消毒法。即用堆糞法進(jìn)行消毒。在距離場100米以外設(shè)一

糞場。堆糞的方法如下：在地面挖一淺溝，深紅約20厘米、寬約1.5?2米，長度不限，隨

糞便多少而定。先將非傳染性的糞便或秸、稈等堆至25厘米厚，其上堆入欲消毒的糞便、

墊草等，高達(dá)1?1.5米，然后在糞堆外面再鋪上10厘米厚的非傳染性的糞便或麥草，并覆

蓋10厘米厚的沙子或土，如此堆入三個星期到三個月，即可用以肥田，若糞便太干可加入

適量水，當(dāng)糞便較稀時應(yīng)加雜草，使其不稀不干，以促其迅速發(fā)酵。

7.帶動物消毒：常用藥物有過氧乙酸、新潔爾滅、抗毒威等，可按說明使用。

消毒藥種類很多，理想的消毒藥物應(yīng)具有下列特性：（1）價廉易得；（2）對人、畜安全；（3）易

溶于硬水：（4）對用具和紡織物不會損傷：（5）在空氣中較穩(wěn)定；（6）無惡臭味；（7）無殘余毒性;

（8）在肉或蛋中不會有積存；（9）對殺滅大多數(shù)病原微生物有效。

目前尚無一種消毒藥能全部符合上述要求，因此選用消毒藥時應(yīng)根據(jù)具體情況而定，

常用化學(xué)消毒劑見表1。

表1常用化學(xué)消毒劑

消毒劑使用濃度使用對象注意事項

名稱

苛性鈉1?3%熱禽舍、車船、用對病毒性傳染病消毒效果很好。但對皮膚有腐蝕作

（火堿）溶液具等用禽舍消毒后數(shù)小時用清水沖洗后才能放入家禽。

生石灰10?20%同上必須新鮮配制。如用1?2%堿水和5?10%石灰乳

乳劑混合液消毒效果更好。

草木灰10?20%同上用10公斤水和2公斤草木灰煮沸2小時，過濾后

熱溶液備用，用時再加2?4倍熱水稀釋。

漂白粉0.5%?飲水、污水、禽含氯量應(yīng)在25%以上，新鮮配制，用其澄清液，對

20%一般舍、用具、車船、金屬用具和衣物有腐蝕作用。禽舍消毒后應(yīng)徹底通

常用為土壤和排泄物風(fēng)以防中毒。

2?5%

來蘇兒2?5%器械、用具和洗用于含大量蛋白質(zhì)的分泌物或排泄物消毒時，效果

（石炭酸）手等不夠好。

臭藥水5-10%禽舍、土壤和用即來蘇兒粗制品，注意點(diǎn)同上

具等

福爾馬5-10%孵化器、蛋殼、空氣消毒時可用福爾馬林熏蒸法，每立方米空間用

林（甲醛蛋盤等福爾馬林20毫升，加10克高鎰酸鉀和10毫升水

溶液）在瓷器內(nèi)，室內(nèi)密閉消毒至少半小時后徹底通風(fēng)

新潔爾0.1%蛋殼消毒，洗手且市售5%新潔爾滅20毫升，加25%亞硝酸鈉20

滅毫升，清水加至1000毫升即成。使用時不能接觸

肥皂或洗衣粉。

過氧乙0.2禽舍、除金屬制對各種病原微生物殺滅效果都很好，價格低廉，無

酸0.5%品外，可用于各公害，禽舍消毒時可噴霧，用具可浸泡

種對象

二、免疫接種

免疫接種是預(yù)防和控制傳染病的一項極為重要的措施。免疫接種就是用人工的方法，把

有效疫苗或菌苗引入動物體內(nèi)，從而激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抵抗力，使易感動物轉(zhuǎn)化為有抵抗

力的動物，以免傳染病的發(fā)生和流行。免疫接種的目的，就是提高動物對傳染病的抵抗力，

預(yù)防傳染，保證動物健康。

（一）免疫程序的制訂

免疫程序就是預(yù)防計劃，它包括預(yù)防疾病的種類、疫苗的選擇、免疫次數(shù)、免疫時間、

免疫方法、聯(lián)合用苗等內(nèi)容。沒有任何一個免疫程序能適用所有地區(qū)或不同類型的養(yǎng)殖場。

因此，每一個養(yǎng)殖場都應(yīng)按照自己的實(shí)際情況制訂適合本場特點(diǎn)的免疫程序。只有這樣才能

有效地預(yù)防傳染病的發(fā)生。

免疫程序的制訂，至少考慮以下8個方面的因素：（1）當(dāng)?shù)丶膊〉牧餍星闆r及嚴(yán)重程度；

（2）母源抗體的水平；（3）匕?次免疫接種引起的殘余抗體水平；（4）家禽的免疫應(yīng)答能力；⑸

疫苗的種類；（6）免疫接種方法；（7）各種疫苗接種的配合；（8）對動物全身健康及生產(chǎn)能力的

影響。這8個因素是互相聯(lián)系，互相制約的，必須統(tǒng)籌考慮。一般來說，免疫程序的制訂首

先要考慮當(dāng)?shù)丶膊〉牧餍星闆r及嚴(yán)重程度。據(jù)此才能決定需要接種什么種類的疫苗，達(dá)到什

么樣的免疫水平。首次免疫接種時間的確定，除了考慮疾病的流行情況外，主要取決于母源

抗體的水平。如新城疫母源抗體滴度低的要早接種；母源抗體滴度高的推遲接種效果更好。

（二）疫苗的種類

預(yù)防動物傳染病的疫苗可分為兩大類:一類是滅活疫苗,是把病毒或細(xì)菌滅活后制成的；

類是活毒疫苗或弱毒疫苗，一般是用毒力較弱，不會引起動物發(fā)病的活病毒或細(xì)菌制成的。

弱毒疫苗按生產(chǎn)過程不同，又分為濕苗及凍干苗兩種。一般來說濕苗使用方便，免疫效果好,

但不能長期保存，而凍干苗保存期長。

下面是幾種常用的家禽疫苗。

1.目前我國已生產(chǎn)的新城疫疫苗有I、n、HI、iv等四個品系，它是把新城疫疫苗病

毒接種于雞胚經(jīng)一定時間培養(yǎng)后制成的活毒疫苗。I系疫苗（又稱為印度系）毒力較強(qiáng)，其次

是W系疫苗（Lasota）,II系（B1系）苗毒力較弱，HI系（F系）苗最弱。II、III、IV系苗適用于雛

雞和成雞，一般接種后不會引起嚴(yán)重反應(yīng)，只出現(xiàn)輕微呼吸道癥狀或完全沒有癥狀。但I(xiàn)系

苗毒力比較強(qiáng)，只供2個月以上雞使用，接種后引起的反應(yīng)比較重，然而免疫效力最強(qiáng)。適

合疾病嚴(yán)重流行的地區(qū)使用。一般來說，為了安全起見，在使用I系苗之前，要先用n系或

w系苗進(jìn)行基礎(chǔ)免疫。另外，目前還用iv系弱毒苗滅活后制成的新城疫油乳劑滅活疫苗，效

果優(yōu)于各種弱毒疫苗，大小雞均可用，不但安全，而且免疫期長。

2.雞痘疫苗

目前預(yù)防雞痘的疫苗有兩類：一類是由鴿痘病毒制成的，另一類是由雞痘弱毒病毒制成

的。

鴿痘弱毒苗適用于各種年齡的雞，對一日齡雛雞也沒有不良反應(yīng)，但免疫力差些，一般

免疫期為3?4個月。

雞痘弱毒苗適用于20日齡的雞，用于雛雞接種可能會引起嚴(yán)重的反應(yīng)，個別甚至?xí)?/p>

亡，免疫期五個月左右。

上述兩種疫苗在接種后均應(yīng)出現(xiàn)局部反應(yīng)，如局部紅腫增厚、毛囊腫脹或局部皮膚出現(xiàn)

豆大的小皰等，如果接種部位不見反應(yīng)，應(yīng)重新接種一次。

3.馬立克氏病疫苗

目前世界上已有三類疫苗：（1）強(qiáng)毒化疫苗：（2）自然弱毒疫苗；（3）火雞皰疹病毒FC126

株疫苗，對1日齡雛雞作肌肉或皮下接種0.2毫升，只能防止腫瘤的發(fā)生，但不能防止馬立

克氏病強(qiáng)毒的感染。因此，接種越晚，雛雞感染馬立克氏病毒的危險性越大。近來已有由上

述兩種以上毒株組成的多價疫苗，免疫效果更好。

4.禽霍亂菌苗

目前生產(chǎn)的禽霍亂菌苗有滅活菌苗和弱毒菌苗兩類,弱毒菌苗在國內(nèi)外育成的菌株有很

多個。但弱毒苗的各個菌株，其免疫效果均不理想，一般免疫期僅三個月，有時會更短。不

同菌株所引起的接種反應(yīng)不同，但有時同一菌株甚至是同?批菌苗，在不同情況下反應(yīng)也不

相同。國內(nèi)現(xiàn)已研制出油佐劑滅活菌苗，安全，免疫期較長。

禽霍亂弱毒菌苗和滅活苗還有許多不足之處。國內(nèi)外都開始了亞單位疫苗的研制工作，

并得了初步效果。

5.傳染性支氣管炎疫苗

目前使用最廣的弱毒株是H52和H.,兩者均為馬薩諸型。此外，還有別的血清型，如

康涅狄格，也有滅活苗。曰20毒力比較溫和，適用于幼齡雛雞。H52毒力稍強(qiáng)，一般用于1

月齡以上的雞或加強(qiáng)免疫。弱毒苗免疫有效期不長，每隔2?3個月重復(fù)接種一次，可獲得

堅強(qiáng)保護(hù)力，如果接種某一血清型的疫苗后仍不能防止疾病的發(fā)生，應(yīng)該選用別的血清型的

疫苗或多價苗。

6.傳染性法氏囊病疫苗

目前有兩種疫苗：一種是滅活苗，須加佐劑，否則無效。另一種是弱毒苗，不H和型和

中等毒力型等，其應(yīng)用對象及劑量等有所不同。國內(nèi)已試制出PBC98弱毒疫苗，是一種溫

和型弱毒苗。對1日齡雛雞進(jìn)行肌肉注射，28日齡時進(jìn)行飲水免疫，實(shí)踐證明安全有效。

7.傳染性喉氣管炎疫苗

目前有兩種疫苗：一種是弱毒疫苗，可用于滴眼，滴鼻或毛囊接種；另一種是強(qiáng)毒疫苗，

只能用于擦肛或滴肛，如經(jīng)呼吸道接種則會引起嚴(yán)重發(fā)病。

8.鴨瘟疫苗

現(xiàn)在普遍使用的是鴨胚培養(yǎng)、雞胚培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)的弱毒疫苗。我國有好幾個單位培育

的鴨瘟疫苗弱毒株，安全有效，--般無不良反應(yīng)。

9.減蛋綜合征疫苗

目前使用的主要是用鴨胚生產(chǎn)的、加有油佐劑的滅活疫苗，效果良好。

（三）疫苗的選擇和使用

疫苗的種類很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍，不可亂用，否則不但不能起到預(yù)防疾病的作

用，反而會影響動物的健康，甚至?xí)驯緛頉]有的疾病帶入養(yǎng)殖場。因此，必須根據(jù)不同情

況，慎重使用。

一般來說，需要接種哪些種類的疫苗，主要取決于當(dāng)?shù)亓餍械幕蚩赡芰餍械募膊》N類，

經(jīng)過調(diào)杳和了解，當(dāng)?shù)赜性摲N疾病的流行或可能受到威脅時，才進(jìn)行該種疫苗的接種，尤其

是該疫苗是毒力強(qiáng)的活毒苗或活菌苗，更不應(yīng)當(dāng)輕率地引入從沒有該病發(fā)生的地區(qū)進(jìn)行接

種。

對于已有該病流行或威脅的地區(qū)，選用什么類型的疫苗，主要是根據(jù)疾病流行的嚴(yán)重程

度。?般流行較輕的，可選用比較溫和的疫苗。例如新城疫可用n系、in系等緩發(fā)性疫苗。

而疾病嚴(yán)重流行的地區(qū)，則要選用效力較強(qiáng)的疫苗，如新城疫I系等中發(fā)性疫苗?？傊?，要

使疫苗接種后產(chǎn)生的抵抗力與疾病流行的情況相適應(yīng)，使動物有足夠堅強(qiáng)的免疫力。

有些疫苗往往有幾個品系，一般來說，初次接種應(yīng)該選擇毒力弱的品系，而重復(fù)接種（又

稱強(qiáng)化接種）則應(yīng)選用毒力較強(qiáng)的品系，例如新城疫疫苗。目前我國已有4個品系，作為初

次接種，可選用n系、m系，而重復(fù)接種，可選用w系或I系苗。

在選用疫苗時，還應(yīng)考慮該疫苗對動物接種后是否會引起不良反應(yīng)。例如禽霍亂弱毒菌

苗如果用于產(chǎn)卵雞，會引起產(chǎn)卵量短期下降。如果有其它病并發(fā)，也會引起死亡。此外，新

城疫疫苗、傳染性支氣管炎疫苗等接種，可能造成使本來不明顯的敗血霉形體病嚴(yán)重暴發(fā)，

因此當(dāng)雞群中有敗血霉形體病潛伏存在的情況下，又要進(jìn)行上述疫苗接種時，應(yīng)該考慮提前

一、二天給要免疫接種的雞連續(xù)服用藥物，以便減輕或防止疾病的暴發(fā)。

在選擇疫苗時，必須注意疫苗的質(zhì)量，質(zhì)量的好壞直接影響免疫效果。疫苗的質(zhì)量除與

制造廠生產(chǎn)過程有關(guān)外，與貯存、運(yùn)輸及使用過程是否妥當(dāng)也關(guān)系極大。以下是貯存、運(yùn)輸

及使用過程中影響疫苗的質(zhì)量的一些因素：

i.保存條件：不同類型的疫苗，要求的保存條件是不一樣的。必須按說明書規(guī)定的條

件保存，才能保證疫苗質(zhì)量不會顯著下降，一般來說，滅活苗要保存于2?15℃的陰喑環(huán)境

中，活菌苗應(yīng)保存于4?8℃的冰箱中，這兩種疫苗都不應(yīng)凍結(jié)保存。但對于凍干的弱毒活

毒（菌）苗，除了個別的有不同要求之外，一般都要求低溫保存。保存溫度要穩(wěn)定，尤其不能

反復(fù)凍融。

2.保存期：使用前檢查瓶簽上的截止有效期，離截止有效期越近，疫苗病毒（或細(xì)菌）

死亡越多。因?yàn)榧词乖谧钸m宜的保存條件下，疫苗病毒（或細(xì)菌）也會緩慢死亡。

3.運(yùn)輸過程：疫苗運(yùn)輸時，通常達(dá)不到低溫的要求，因此運(yùn)輸時間越長，疫苗中的病

毒（或細(xì)菌）死亡越多，如果中途轉(zhuǎn)運(yùn)多次，影響就更大。

4.疫苗的稀釋：各種疫苗所用的稀釋劑、稀釋倍數(shù)及稀釋方法，都有一定的規(guī)定，必

須嚴(yán)格按使用說明書進(jìn)行。否則，疫苗的滴度會下降，影響免疫效果。例如，用于飲水的疫

苗稀釋劑，最好是用蒸儲水或去離子水，但不能用自來水，因?yàn)樽詠硭械南緞岩呙?/p>

毒殺死。又如用于氣霧的疫苗稀釋劑，應(yīng)該是用蒸儲水或去離子水，如果稀釋水中含有鹽，

霧滴噴出后，由于水分蒸發(fā)，鹽類濃度提高，會引起疫苗病毒死亡。如果能在飲水或氣霧的

稀釋劑中加入0.1%的脫脂奶粉，會有助于對疫苗病毒的保護(hù)。在稀釋疫苗時，應(yīng)使用注射

器先吸入少量稀釋液注入疫苗瓶中，充分振搖溶解后，再加入其余的稀釋液，如果疫苗瓶太

小，不能裝入全量的稀釋液，需要把疫苗吸出入在另一容器內(nèi)，再用稀釋液把原疫苗瓶沖洗

幾次，使全部疫苗病毒（或細(xì)菌）都被沖洗下來。

5.疫苗的使用：疫苗在臨用前由冰箱取出稀釋后應(yīng)盡快使用，活毒疫苗一般應(yīng)在4小

時內(nèi)用完?馬立克氏病疫苗應(yīng)在兩小時內(nèi)用完。當(dāng)天未用完的疫苗，應(yīng)廢棄，不要隔天再用。

疫苗無論在稀釋前后都不應(yīng)受熱或曬太陽，更不許接觸消毒藥，稀釋疫苗的一切用具，必須

洗滌干凈，煮沸消毒。飲苗的容器也要洗干凈，無消毒藥殘留。

（四）免疫接種的途徑和方法

對家禽進(jìn)行免疫接種的常用方法有：滴眼、滴鼻、翼下刺種、羽毛囊涂擦、滴肛或擦肛、

皮下或肌肉內(nèi)注射、飲水法及氣霧法等。采用哪利方法，應(yīng)根據(jù)具體情況決定，既要考慮

工作方便及經(jīng)濟(jì)核算，更要考慮疫苗的特性及免疫效果。

1.滴眼、滴鼻：這種方法適用于新城疫口系、in系及w系疫苗，法氏囊弱毒疫苗，傳

染性支氣管炎疫苗及傳染性喉氣管炎弱毒型疫苗等的接種，對幼雛應(yīng)用這種方法，可以避免

疫苗病毒被母源抗體中利，并能誘導(dǎo)粘膜免疫，從而有比較良好的免疫效果。滴眼、滴鼻法

是逐只進(jìn)行接種，能保證每只禽都得到免疫，并且劑量一致，免疫效果確實(shí)。因此，一般認(rèn)

為，滴眼、滴鼻法是疫苗接種的最佳方法，尤其是對新城疫接種更是如此。

進(jìn)行滴眼、滴鼻法接種時，可把1000羽份的疫苗稀釋于50毫升的生理鹽水中，充

分搖勻，然后于每只禽的眼結(jié)膜或鼻孔上滴一滴（0.05毫升）。也可把1000只份的疫苗

稀釋于100毫升的生理鹽水中，然后于每只禽的眼結(jié)膜及鼻孔上各滴兩滴。

2.翼下刺種：此法適用于雞痘疫苗、新城疫I系疫苗等的接種。進(jìn)行接種時，將10

00羽份的疫苗稀釋于25毫升的生理鹽水中，充分搖勻，然后用接種針或蘸水筆尖蘸取疫

苗，刺種于雞翅膀內(nèi)側(cè)無血管處，小雞刺種1針即可，較大的雞可刺種2針。

3.羽毛囊涂擦：此法可用于雞痘疫苗的接種，但已少用。

4.滴肛或擦肛：此法僅用于傳染性喉氣管炎的強(qiáng)毒型疫苗。方法是把1000只份的疫

苗稀釋于30毫升的生理鹽水中，然后把雞的肛門向上，將肛門粘膜翻出，滴上疫苗1滴。

5.皮下注射：現(xiàn)在廣泛使用的馬立克氏病疫苗是火雞皰疹病毒，宜用頸背皮下注射接

種。通常是把1000只份的疫苗稀釋于木200毫升稀釋溶液中，然后每只雛注射0.2毫升。

另外，各種油乳劑滅活疫苗也適用于皮下注射法。

6.肌肉注射：此法是把疫苗直接注射于肌肉內(nèi)，禽霍亂弱毒菌苗或滅活菌苗以肌肉內(nèi)

注射較好。此法作用迅速，劑量準(zhǔn)確，效果確實(shí)。新城疫I系苗肌肉注射免疫效果比滴眼、

滴鼻好，滅活苗必須用注射法，不能口服，也不能用于滴眼、滴鼻。

肌肉內(nèi)注射，一般按疫苗使用說明書稀釋后，較小的禽只注射0.5毫升，成禽則每只注射1

毫升。肌肉注射以胸部肌肉為好，應(yīng)斜向前入針，以防刺入肝臟、心臟或胸腔內(nèi)造成死亡，

對較小禽只尤其要注意。

7.飲水法：對于大群禽只(例如一群超過10000只)逐只進(jìn)行免疫接種費(fèi)時費(fèi)力，且

不能于短時間內(nèi)達(dá)到全群免疫。對于產(chǎn)卵期和產(chǎn)卵盛期的雞群，為避免騷擾禽群，常采用群

體免疫法。群體免疫法中最常用，最易做的，就是飲水法。目前采用飲水法較廣泛，效果又

較好的疫苗有新城疫H系及IV系苗、傳染性支氣管炎H52及H3疫苗.傳染性法氏囊病弱毒

疫苗等。飲水法免疫雖然省時省力，但由于種種原因會造成每只禽飲水的疫苗量不一，免疫

效果參差不齊。而且，很多研究者證實(shí)，飲水法引起的免疫反應(yīng)最小，往往不能產(chǎn)生足夠的

免疫力，不能抵抗較強(qiáng)毒力的毒株引起的疾病流行，尤其是對速發(fā)嗜內(nèi)臟型(亞洲型)的新

城疫是如此。

為使飲水法免疫達(dá)到一定效果，必須注意以下幾個問題：

(1)用于飲水法的疫苗必須是高效價的，且疫苗劑量加大2?3倍。

(2)稀釋疫苗的飲水必須不含有任何使疫苗滅活的物質(zhì)，例如：氯、鋅、鐵等離子，

必要時要用蒸儲水。

(3)飲水器具要充足，以保證所有禽只能在短時間內(nèi)飲到足夠的免疫量，飲水器具要

干凈，飲水前必須徹底清除鐵銹、臟物等，以免降低疫苗效價。

(4)飲疫苗前停止飲水2?4小時(視天氣及飼料等情況而定)，以便使禽只能盡快

而又一致地飲用疫苗。第二天再以同樣劑量和方法重復(fù)飲水免疫一次。

(5)飲水中最好能加入0.1%的脫脂奶粉。

(6)稀釋疫苗的用水量要適當(dāng)。正常情況下，可參考下表稀釋：

雞齡每500只

4天~2周10公斤水

2周?4周14公斤水

4周?8周20公斤水

8周以上40公斤水

(7)飲水法免疫接種間隔時間不要太長，一般2?3個月進(jìn)行一次。

8.氣霧法：此法是用壓縮空氣通過氣霧發(fā)生器，使稀釋疫苗形成直徑1?10微米的

霧化粒子，均勻地浮游于空氣之中，隨呼吸而進(jìn)入禽體內(nèi)，以達(dá)到免疫。

氣霧免疫不但省時省力，而且對某些呼吸道有親嗜性的疫苗效果最好，例如新城疫各系

疫苗，傳染性支氣管炎弱毒疫苗等。但是氣霧法免疫對禽群的干擾大，尤其會加重敗血霉形

體及大腸桿菌引起的氣囊炎。必要時可在氣霧免疫前后在飼料中加入抗菌藥物。

氣霧免疫就應(yīng)注意的問題是：

(1)疫苗必須是高效價的，而且通常應(yīng)使用加倍的劑量。

(2)稀釋疫苗應(yīng)該用去離子水或蒸儲水，最好加入0.1%的脫脂奶料或明膠。

(3)霧粒大小要適中，一般以噴出的霧粒中直徑在1?10微米占70%以上為最好，霧粒

過大，停留于空氣中的時間短，也易被粘膜阻止，不能吸入呼吸道；霧粒過小，則吸入后易

被呼氣時又排出。

(4)氣霧免疫房舍應(yīng)密閉，減少空氣流動，并應(yīng)無直射陽光，保證舍內(nèi)有適宜的溫度與

濕度。夜間氣霧免疫最好，此時雞群密集而安靜，噴霧20分鐘后打開門窗即可。

(五)緊急接種

當(dāng)一個養(yǎng)禽場已經(jīng)發(fā)生疫病，威脅到禽舍或禽場時，為了迅速控制和撲來疫病的流行，

一個重要的措施就是疫區(qū)及受威脅的禽群進(jìn)行緊急接種。緊急接種可以用免疫血清或疫苗。

實(shí)踐證明，在疫區(qū)內(nèi)使用疫苗進(jìn)行緊急接種，不但可以防止疫病向周圍地區(qū)蔓延，而且對某

些疫病，如新城疫及鴨瘟，還可以減少已發(fā)病禽群的死亡損失。這主要是利用疫苗產(chǎn)生免疫

力快的特點(diǎn)，使未受感染的家禽獲得抵抗力，但是對正處在潛伏期或尚未明顯發(fā)病的家禽，

有可能促使發(fā)病和死亡，經(jīng)過段時間后，發(fā)病及死亡數(shù)就會迅速下降，使疫病得到控制。

緊急接種應(yīng)該包括養(yǎng)禽場內(nèi)所有禽只，以使禽群一致地獲得免疫力，而不留下易感禽。

這樣強(qiáng)毒病原體就不會一代一代傳下去。例如發(fā)生新城疫時，對2個月齡以上的雞可用I系

苗，幼齡雞可用n系進(jìn)行緊急接種。為了保證接種效果，疫苗劑量可加倍，但必須注意不是

所有疫苗均可用于緊急接種，只有被證明緊急接種確實(shí)有效的疫苗（新城疫I系、n系、鴨

溫弱毒疫苗）才能使用。另外，一般先接種健康的或無明顯癥狀者，然后再接種可疑感染者

或發(fā)病者，以防人為地將病原體由病禽傳給健康禽只，擴(kuò)大疫情。

（六）免疫接種的一般注意事項

i.接種前應(yīng)對禽群進(jìn)行詳細(xì)了解和檢查，注意營養(yǎng)狀況和有無疫病。一般雞群健康，

可保證接種安全，相反，可能出現(xiàn)明顯的接種反應(yīng)，甚至發(fā)病，產(chǎn)生免疫力差。因此免疫接

種應(yīng)于禽群健康狀況良好時進(jìn)行為宜。

2.接種前應(yīng)考慮雛禽母源抗體水平，決定首次免疫接種時間。雛雞的母源抗體，一方

面可以抵抗病原的傳染，另一方面又能妨礙疫苗接種后的免疫反應(yīng)。一般來說傳染性支氣管

炎的母源抗體可維持2周左右，新城疫的母源抗體3周后完全消失，但傳染性法氏囊病的母

源抗體可持續(xù)4?5周齡。雛雞的母源抗體受母禽抗體的影響。由于母禽免疫接種時間的不

同，或者孵化的種蛋來源不同，因此后代雛雞的母源抗體水平就會有較大的差異。所以就很

難規(guī)定一個統(tǒng)一免疫程序而適用于各養(yǎng)禽場。如新城疫，根據(jù)母源抗體的檢測結(jié)果，對于母

源抗體水平低而個體差異又較小的雛雞，首次接種應(yīng)在早齡進(jìn)行；相反，母源抗體水平高的

雛雞，應(yīng)推遲疫苗接種時間。對于母源抗體水平參差不齊，差別很大，而該地區(qū)又存在有新

城疫威脅時，應(yīng)早用苗，以提高母源抗體水平低的雛雞的免疫力，然后再接種?次，使本來

母源抗體水平較高的雛雞，也能對疫苗接種有良好的反應(yīng)，重復(fù)接種可根據(jù)監(jiān)測血凝抑制抗

體的情況，如果多數(shù)雞只血凝抑制抗體下降到1:16以下時，就應(yīng)進(jìn)行強(qiáng)化免疫。

3.接種弱毒活菌苗前后各5天，禽群應(yīng)停止使用對疫苗菌株敏感的藥物，以免影響免

疫效果。此外，抗病毒性疾病的疫苗的常加入某些抗菌藥物，如青霉素、鏈霉素等。如果與

弱毒活菌苗混合使用，則會降低疫苗的活菌數(shù)，從而也會影響免疫效果。

4.?個養(yǎng)禽場往往都不只進(jìn)行一各種疫苗的接種。因此必須考慮到各種疫苗的互相配

合，以減少相互之間的干擾作用，保證免疫的效果。例如一日齡雛雞同時進(jìn)行馬立克氏病疫

苗和新城疫疫苗接種時，新城疫疫苗的免疫效果受到抑制，新城疫疫苗與傳染性支氣管炎疫

苗同時接種時，一般無不良影響，但如果分別接種，則認(rèn)為支氣管炎疫苗接種14天內(nèi)不應(yīng)

接種新城疫疫苗，否則新城疫疫苗的免疫效果顯著下降。為了保證免疫效果，對當(dāng)?shù)亓餍凶?/p>

嚴(yán)重的傳染病，最好能單獨(dú)進(jìn)行接種，以便產(chǎn)生堅強(qiáng)的免疫力。從免疫學(xué)的角度考慮，任何

疫苗都以單使用時效果最好，并已被實(shí)踐證明。

5.使用各種疫苗，一定要按說明書的要求做，才能確保免疫效果。要做好免疫接種的

詳細(xì)記錄。記錄內(nèi)容至少應(yīng)包括：接種日期、禽群的品種、日齡、數(shù)量、使用疫苗的名稱、

廠名、批號、生產(chǎn)日期及有效期、稀釋劑及稀釋倍數(shù)、疫苗接種方法、操作人員等。

6.免疫接種后，要注意觀察禽群接種疫苗后正常的異常的反應(yīng)，如有不良反應(yīng)或發(fā)病

等情況，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)拇胧⑾蛴嘘P(guān)部門報告。疫苗接種經(jīng)過一定時間（10?20天）后，應(yīng)

檢查免疫效果。尤其是改用新的免疫程序及疫苗種類時更應(yīng)檢查。

（七）免疫接種失敗的原因分析

禽群經(jīng)免疫接種后，抵擋不住特定疫病的流行（例如：接種雞新城疫疫苗后仍發(fā)生雞新

城疫），或者效力檢查不合格（例如雞新城疫疫苗接種后，血凝抑抗體滴度不能達(dá)到應(yīng)有的水

平或抽檢攻毒保護(hù)率低于標(biāo)準(zhǔn)要求）o均認(rèn)為免疫接種失敗。

分析免疫接種失敗原因，必須從客觀實(shí)際出發(fā)，周密地考慮各方面的因素，切忌主觀武

斷。事實(shí)上，每次免疫接種失敗，都有其特殊的原因，但為了便于分析，開闊思路，把一些

可能的原因歸納如下，以供參考。

1.雛禽在免疫接種時，存在有母源抗體。

2.疫苗選擇不當(dāng)，在疫病嚴(yán)重流行的地區(qū)，僅選用安全性好，但免疫效果較低的疫苗

品系，例如，在有速發(fā)嗜內(nèi)臟型新城疫流行的地區(qū)選用ni系苗。

3.免疫接種途徑錯誤，例如，1周齡內(nèi)的雛雞，采用飲水法接種新城疫疫苗；強(qiáng)化免

疫時，把新城疫I系疫苗用于點(diǎn)眼、滴鼻。把滅活苗用于飲水等。

4.疫苗質(zhì)量差。

5.疫苗運(yùn)輸、保管不當(dāng)，造成疫苗失效或減效。

6.使用超過有效期的疫苗。

7.免疫接種工作不認(rèn)真，例如采用飲水法免疫時飲水器不足，進(jìn)行疫苗稀釋時計算錯

誤或稀釋不均勻，沒有把應(yīng)該接種的禽只全部接種等。

8.雞群中有免疫抑制性疾病存在，如法氏囊病、馬立克氏病等。

9.不同種類疫苗之間的干擾作用。

10.服用抗菌藥物或免疫抑制性藥物。

11.接種時禽群內(nèi)已潛伏有強(qiáng)毒病原微生物，或由接種人員及接種工具帶入強(qiáng)毒病原微

生物。

三、剖檢技術(shù)及病變檢查要點(diǎn)

病理剖檢和病變檢查是診斷傳染病的重要方法之一。它既可驗(yàn)證臨床診斷結(jié)果的正確與

否，又可為實(shí)驗(yàn)室診斷方法和內(nèi)容的選擇提供進(jìn)一步的參考依據(jù)。

對家禽的基本剖技術(shù)可參考下述方法：

1.將病、死禽只羽毛、皮膚用水浸濕，以減少空氣染污。用力壓迫，使借關(guān)節(jié)斷襲，

兩腿叉開。

2.在靠近胸骨柄處剪開腹肌，沿兩側(cè)脅骨緣向前剪開胸肌，用力將胸骨向上折斷、掀

起，充分暴露胸腔和腹腔。

3.先檢查胸腔臟器，如心、肺、氣囊等；再檢查腹腔臟器，如肝、脾、腎、法氏囊、

卵巢、睪丸、氣囊、輸卵管、輸尿管及胃、腸漿膜，觀察有無變性、壞死、腫瘤等明顯異常

變化。需要做細(xì)菌或病毒分離培養(yǎng)時，則應(yīng)按照無菌手續(xù)采取所需病料。最后剖開口腔、氣

管、食道、胃及腸管檢查有無典型病理變化。

四、細(xì)菌分離、培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)菌分離培養(yǎng)不僅是確診傳染病的重要和可靠手段，而且也是進(jìn)上步研究病原特性，如

耐藥性、致病性和生化特性等必不可少的步驟。病原細(xì)菌分離培養(yǎng)的一般方法如下：

1.采取接種材料：分離細(xì)菌般多采取心血、淋巴結(jié)、肝臟或脾臟，雛雞白痢可取膽

汁或未吸收完的卵黃。所選病料應(yīng)在病雞自然殘廢后立即采取，并嚴(yán)格按照無菌要求操作。

病料取好后應(yīng)盡快接種到培養(yǎng)基上，不應(yīng)久放，以免被雜菌污染或病料中細(xì)菌死亡而得出錯

誤培養(yǎng)結(jié)果。

2.制備培養(yǎng)基：一般大多數(shù)細(xì)菌在普通營養(yǎng)瓊脂平板或肉湯中均能良好生長，因此最

常用的培養(yǎng)基主要是普通瓊脂或肉湯。為了特殊目的，有時需用特殊培養(yǎng)基，例如禽霍亂巴

氏桿菌，為檢查其熒光性菌落，要用血清瓊脂平板（普通瓊脂中加入10%的雞或綿羊血清）;

為讓其生長更旺盛并檢查有無溶血性，要用血液瓊脂平板（普通瓊脂中加入10%的新鮮綿

羊血）。另外，對霉形體、孤菌、霉菌及傳染性鼻炎等病原體的分離培養(yǎng)，也需要較特殊的

培養(yǎng)基。

普通瓊脂的制備方法：取牛肉湯100毫升，加蛋白腺1克，氯化鈉0.8克，瓊脂粉2克，加

熱使其充分溶化，用NaHO溶液調(diào)PH7.8,15磅高壓滅菌30分鐘，冷至45℃左右時傾注于

干烤消毒過的平皿中，每個平皿約20毫升，冷卻凝固后用消毒紙包好放4℃冰箱備用，可

保存11?2周。

若上述培養(yǎng)基中不加瓊脂粉便叫普通肉湯。將普通肉湯裝入10毫升的試管中，每管2?

3毫升，高壓滅菌30分鐘后放4℃冰箱備用，可保存數(shù)月。

3.細(xì)菌的接種：將選好的病料放于滅菌容器內(nèi)，在無菌室或無菌罩或酒精燈下，以燒

熱的鐵片或剪刀在病料表面燒烙消毒，然后在燒烙處剪一小口，用接種棒插入小口，勾取少

量組織接入肉湯內(nèi)，或在普通瓊脂平板上劃線接種，然后將接種過的肉湯或平皿放入37℃

溫箱培養(yǎng)18?24小時，觀察細(xì)菌生長情況，并將培養(yǎng)物涂片染色鏡檢，或進(jìn)一步純培養(yǎng)后

作生化試驗(yàn)，動物接種試驗(yàn)或藥敏試驗(yàn)。根據(jù)以上培養(yǎng)特性，染色鏡檢特性、生化試驗(yàn)結(jié)果

以及動物接種結(jié)果對疫病做出最后診斷。不同細(xì)菌的各種特性可參考后面有關(guān)內(nèi)容或微生物

學(xué)教材。

所有過程都應(yīng)嚴(yán)格無菌操作。

五、病原菌藥敏試驗(yàn)

抗菌藥物（中草藥、抗菌素、磺胺類等）是獸醫(yī)臨床常用的藥物，但是各種病原體對抗

菌藥物的敏感性各不相同，同時，由于抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，以及廣譜抗菌素的不斷增加，

它們雖然對病原體有一定的作用，但在使用不當(dāng)時常導(dǎo)致抗藥性的形成，甚至干擾機(jī)體內(nèi)的

正常微生物群的作用，反而對機(jī)體帶來不良影響。因此，測定病原菌對抗菌藥物的敏感性，

正確使用抗菌藥物，對于臨床治療工作具有重要的意義，藥敏試驗(yàn)有以下幾種方法。

（-）紙片法

紙片法操作簡單，應(yīng)用也最普遍。

抗菌素紙片的制備

1.將質(zhì)量較好的濾紙用打孔機(jī)打成直徑6毫米的圓片，每100片放入一小瓶中，160℃

干熱滅菌1?2小時，或用高壓滅菌（15磅30分鐘）后在60℃條件下烘干。

2.抗菌藥物的濃度（用蒸儲水或生理鹽水稀釋）

青霉素200單位/毫升

其他抗菌素1000微克/亳升

磺胺類藥物10毫克/毫升

中草藥制劑1克/毫升

3.用無菌操作法將欲測的抗菌藥物溶液1毫升，加入100片紙片中，置冰箱內(nèi)浸泡1?

2小時，如立即試驗(yàn)可不烘干，若保存?zhèn)溆每捎孟路ê娓桑ǜ稍锏目咕丶埰杀４媪鶄€月）。

（D培養(yǎng)皿烘干法：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37C溫箱內(nèi)保持2?3

小時即可干燥，或放在無菌室內(nèi)過夜干燥。

（2）真空抽干法：將放有抗菌藥物紙片的試管，放在干燥器內(nèi)，用真空抽氣機(jī)抽干，

一般需要18?24小時。

4.將制好的各種藥物紙片裝入無菌小瓶中，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?，并用?biāo)準(zhǔn)敏感菌株作

敏感性試驗(yàn)，記錄抑制圈的直徑，若抑菌圈比原來的縮小，則表明該抗菌藥物已失效，不能

再用。

培養(yǎng)基：一般細(xì)菌如腸道桿菌及葡萄球菌等可用普通瓊脂平板；鏈球菌、巴氏桿菌或肺

炎球菌等可用血液瓊脂平板；測定對磺胺類藥物的敏感試驗(yàn)時，應(yīng)使用無蛋白陳瓊脂平板。

菌液：為培養(yǎng)10?13小時的幼齡菌液（抑菌圈的大小受菌液濃度的影響較大，因而菌液培

養(yǎng)的時間一般不宜超過17小時）。

試驗(yàn)方法：用白金耳取培養(yǎng)10?18小時的幼齡菌，均勻涂抹于瓊脂平板上，待干燥后，

用鏡子夾取各種抗菌素紙片，平均分布于瓊脂表面（每個平板放置4?5片，在37℃溫箱

內(nèi)培養(yǎng)18小時后觀察結(jié)果。

結(jié)果測定：根據(jù)抗菌紙片周圍無菌區(qū)（抑菌區(qū)）的大小，測定其抗藥程度。因此，必須

測量抑菌圈的直徑（包括紙片），按其大小，報告該菌株對某種藥物敏感與否。

1.青霉素抑菌圈的標(biāo)準(zhǔn):

抑菌圈直徑敏感性

V10毫米抗藥

10?20毫米中度敏感

>20毫米極度敏感

2.其他抗菌素及磺胺類藥物的敏感標(biāo)準(zhǔn):

抑菌圈直徑敏感性

<10毫米抗藥

11?15毫米中度敏感

>15毫米極度敏感

3.中藥抑菌素的標(biāo)準(zhǔn):

抑菌圈直徑敏感性

<15毫米抗藥

15毫米中度敏感

15,?20毫米極度敏感

（二）快速敏感試驗(yàn)一一葡萄糖指示法

許多細(xì)菌能分解葡萄糖而產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基PH值發(fā)生改變，若在培養(yǎng)基中加入抗菌藥物,

接種的細(xì)菌對抗菌藥物敏感時，培養(yǎng)基中的葡萄糖就不被細(xì)菌分解利用，不會形成酸性物質(zhì),

PH值不發(fā)生變化，因而指示劑也不變色，相反，細(xì)菌對抗菌藥物不敏感時，抗菌藥物抑制

不了該菌的生長繁殖，因而分解葡萄糖并產(chǎn)酸，使加入其中的澳甲酚紫由紫變黃，以此來測

定細(xì)菌對藥物的敏感性。具體操作方法如下：

1.抗菌素紙片及菌液的準(zhǔn)備，同紙片法。

2.配制指示培養(yǎng)基：取普通瓊脂15毫升，加入1%葡萄糖及0.6%嗅甲酚紫指示劑0.7

毫升。

3.滅菌后，待培養(yǎng)基涼至50℃左右時，加入菌液0.5毫升，充分混勻后（防止氣泡）

作傾注培養(yǎng)。

4.待凝固后，用鎰子將抗菌素紙片分別貼于表面，于37℃條件下培養(yǎng)24小時后觀察。

5.結(jié)果判定：紙片周圍有細(xì)菌生長者呈現(xiàn)黃色，不生長時仍為紫色，并側(cè)量抑菌圈的

直徑，判定其敏感方法，方法同紙片法。

（三）試管法

試管法是將藥物作倍比稀釋，觀察不同含量對細(xì)菌的抑制能力，以判定細(xì)菌對藥物的敏

感度，常用于測定抗菌素及中草藥對細(xì)菌的抑制能力。

試驗(yàn)方法：取無菌試管10支，排列于試管架上，于第一管中加入肉湯1.9毫升，其余9

管各加入1毫升，吸取配制好的抗菌素原液、磺胺類原液或中藥原液01毫升，加入第一管

中，充分混合后吸出1毫升吸入第二管中，混合后，再從第二管移1毫升到第三管，依此移

到第九管中，吸出I毫升棄去。第十管不加藥液作對■照。然后向各管中加入幼齡菌液稀釋液

0.05毫升（培養(yǎng)17小時的菌液作1:1000稀釋，培養(yǎng)6小時作1:10稀釋），于37℃溫箱中培

養(yǎng)18?24小時后觀察結(jié)果。

結(jié)果測定：培養(yǎng)18小時后，凡無細(xì)菌生長的藥物最高稀釋管中即為該菌對藥物的敏感

度。若由于加入藥物（如中藥）而使培養(yǎng)基變?yōu)榛鞚幔塾^不易判斷時，可進(jìn)行接種或涂片

染色鏡檢判定結(jié)果。

藥物名稱敏感（微克/毫克）中度敏感（微克/毫抗藥（微克/毫克）

克）

磺胺類藥<5050?1000>1000

鏈霉素<55?20>20

青霉素<0.10.1?0.2>2

多粘菌素、慶大霉素<11-10>10

金霉素、土霉素、<22?6>6

四環(huán)素、紅霉素

新霉素、氯霉素

合霉素

影響抗菌藥物敏感試驗(yàn)的因素

1.器材：抗菌藥物敏感性試驗(yàn)是利用微生物學(xué)方法進(jìn)行的，其用量極微，實(shí)驗(yàn)儀器的

規(guī)格和精確度會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此必須嚴(yán)格要求。試管、吸管、培養(yǎng)皿和其它器皿，

尤其是定量用的吸管，均須選用中性，硬質(zhì)一級品，并且必須經(jīng)過徹底滅菌。

2.培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分不但影響敏感菌株的生長繁殖，并可影響到抑菌圈的直徑。

不同批號的蛋白陳，所含的氨基氮的總量不同，因而抑菌圈大小有一定差別。氯化鈉、瓊脂

中的鈣、鎂離子影響鏈霉素、新霉素的擴(kuò)散，尤其是氯化鈉對鏈霉素影響大，含量越高，抑

菌圈越小，甚至不出現(xiàn)反應(yīng)，但氯化鈉對多粘菌素反而有助于擴(kuò)散。瓊脂含量和平板厚度也

影響抑菌圈的大小，含量大，影響抗菌素的擴(kuò)散，一般以1.3?1.6%的濃度較合適，瓊脂層

過厚抑菌圈也較小，以2?4厘米為最適宜?；前奉愃幱铆傊桨宸ㄔ囼?yàn)時，不能含蛋白豚,

因陳會使磺胺失去作用。血清成分的吸附或結(jié)合作用，會使金霉素、中藥提取物抗菌作用減

弱。

表4抗菌素的溶解度、穩(wěn)定性及保存有效期

抗菌素溶解度及穩(wěn)定性保存期

青霉素：易溶于水，在中性水溶液中較4℃2?3周，-10℃可延長1

穩(wěn)定，尢在PH6?6.5的磷酸倍

鹽緩沖液中最穩(wěn)定

鏈霉素易溶于水，水溶液中較穩(wěn)定4℃保存2周

鹽酸四環(huán)素溶于水，溶解度為132毫克/4℃有效期2周

毫升，PH6.3緩沖液中溶解

1000微克/量升

鹽酸金霉素易溶于水，溶解度0.5?0.64℃有效期60天

毫克/毫升，PH2?5之間較穩(wěn)

定，高濃度PH2?2.9范圍更

穩(wěn)定

氯化四環(huán)素和氧化四環(huán)素溶于水，酸性溶液較穩(wěn)定4℃有效期6周

新霉素易溶于水4℃,1年

紫霉素硫酸鹽易溶于水，溶解度500毫克/4℃,1年

七升

卡那霉素硫酸鹽溶于水，250毫克/毫升，4℃,有效期半年

PH2-9范圍穩(wěn)定

多粘菌素PH3?5的溶液中最穩(wěn)定4℃,1周

桿菌肽易溶于甲醇、乙醇，也能溶于4℃,1周

水，在酸性環(huán)境中穩(wěn)定

氯霉素微溶于水，易溶于甲醇、乙醇、4?20℃有效期1年

丁醇、丙酮及醋酸中

紅霉素易溶于有機(jī)溶媒中，水中溶解4℃,二個月

度僅為2毫克/毫升，PH7最

柜定

黃霉素易溶于N/10氫氧化鈉溶液，

乙醇、乙醛，溶解度1%,耐

熱，蛋白陳、血清成分可阻止

其抑菌作用

3.敏感菌株：菌種的敏感度差別較大，如金黃色葡萄球菌對青霉素最敏感。四聯(lián)球菌

對四環(huán)素族最敏感。大腸桿菌對鏈霉素、多粘菌素敏感。因此，接種量要適宜，接種量多，

即使最敏感的菌株也不能抑制其發(fā)育，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4.標(biāo)準(zhǔn)液和被檢液：要用同一方法和在同一條件下配制，避免因操作方法不一致而造

成誤差。

5.培養(yǎng)時間：細(xì)菌在發(fā)育過程中，對數(shù)期繁殖最快，以后處于穩(wěn)定和衰落期，必須掌

握這規(guī)律和特性，以便達(dá)到預(yù)期試驗(yàn)?zāi)康摹r間過短則細(xì)菌不繁殖，過長則敏感性降低，

抑菌圈不清楚。一般以37℃16?18小時為適宜。

6.PH值：對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著的影響，新霉素、鏈霉素在堿性環(huán)境中活性最大，而在酸

性時抑菌圈縮小。四環(huán)素族以酸性為佳。青霉素、氯霉素以中性為宜。

六、病毒分離培養(yǎng)技術(shù)

病毒分離培養(yǎng)是確診病毒性傳染病的最可靠方法之一，其分離培養(yǎng)技術(shù)包括雞胚接種、

動物接種和細(xì)胞接種分離培養(yǎng)。其中最簡便、適用因而也最常用的是用雞胚分離培養(yǎng)病毒。

1.接種材料的制備

分離、培養(yǎng)病毒用的材料除了應(yīng)新鮮、無菌外，還要做一些特殊處理。首先應(yīng)將所選取

的病料在無菌容器中剪碎、研磨，并根據(jù)所培養(yǎng)病毒特性用肉湯、生物鹽水或特定稀釋液將

病料作1:5?10稀釋。然后按稀釋后的病料懸液量計算并加入雙抗（青、鏈霉素），使兩者

最終濃度達(dá)每毫升1000單位或微克，并在4七環(huán)境下作用1?2小時，離心沉淀后取上清液

作為分離培養(yǎng)病毒的接種材料。

2.病料接種

若用雞胚分離、培養(yǎng)病毒，則多選9?12日齡之間的發(fā)育雞胚。許多病毒、特別是大多

數(shù)禽病毒都能在雞胚或鴨胚中生長繁殖。接種時應(yīng)先在照蛋器下檢查雞胚是否健康、活潑，

并劃出氣室和接種部位。然后嚴(yán)格消毒接種部位和氣室，用打孔器打孔后，每胚接種處理好

的病料0.1?0.2毫升。接種后要用石蠟將孔口封死，放37℃環(huán)境中繼續(xù)孵育48?96小時。

不同病毒其接種部位、方法和培養(yǎng)時間不盡一樣?？蓞⒖己竺娓饔嘘P(guān)內(nèi)容。

若用動物分離、培養(yǎng)病毒，則最好選用本種動物或自然易感動物。除此之外，常用于分

離病毒的實(shí)驗(yàn)動物有小白鼠、豚鼠、家兔、大白鼠等。兔子的接種常采用肌肉注射、耳靜脈

注射，劑量一般是1毫升。小白鼠、大白鼠、豚鼠常采用腹腔注射，劑量一般為0.2?0.5

毫升。接種動物所用病料的處理與雞胚接種法相同。動物接種后要單獨(dú)飼養(yǎng)，不斷觀察，按

照規(guī)定時間收獲病毒并進(jìn)行鑒定o

根據(jù)病毒種類的不同，雞胚接種后病毒可在不同部位生長、繁殖，例如新城疫病毒在尿

囊液和羊水中、喉氣管炎病毒和痘病毒在絨毛膜上含量最高。其它試驗(yàn)動物接種后亦是如此，

即不同種類的病毒存在于不同的部位，如豬瘟病毒接種家兔后主要存在于血液、脾臟和淋巴

結(jié)，而狂犬病毒主要存在于接種動物的腦和神經(jīng)組織中。因此收獲病毒時應(yīng)根據(jù)其生長、存

在部位來選取不同的組織器官。

除了雞胚和動物外，細(xì)胞體外培養(yǎng)也是分離病毒的常用方法，但由于所需物品，試劑和

條件要求較嚴(yán)格，有些病初次分離不易在人工培養(yǎng)細(xì)胞上生長，而且技術(shù)難度較大，因此在

一般基層單位難以開展推廣應(yīng)用，故不作介紹。

七、雞胚接種技術(shù)

雞胚接種技術(shù)用途廣泛，除了可以分離培養(yǎng)病毒、枝原體及衣原體等病原以確診傳染病

外，還可用于病毒的鑒定，效價測定，致病力測定及制造疫苗、抗原等。因此掌握雞胚接種

技術(shù)對進(jìn)行傳染病的研究和防制工作非常有用。下面介紹雞胚接種的基本技術(shù)。

1.選胚

根據(jù)需要選用合適日齡的雞胚，大多數(shù)病毒適于9?12日齡的雞胚。雞胚應(yīng)以白色蛋殼

者為好，便于照蛋觀察。雞胚應(yīng)發(fā)育正常，健康活潑，不要過大、過小或畸形蛋孵化的胚。

雞胚應(yīng)來自健康無病的雞群，而且不能含有可抑制所接種病毒的母源抗體，最好選用SPF

雞胚或非免疫雞胚。

2.照蛋定位

接種前應(yīng)在照蛋器下檢查雞胚，挑出死胚和弱胚。對所有健康胚應(yīng)先用紅鉛筆畫出氣室

位置，再于胚胎側(cè)畫出接種位點(diǎn)（進(jìn)針點(diǎn)），接種點(diǎn)應(yīng)避開大血管，靠近氣室邊緣處，離胚

頭約1cm左右。

3.接種

照蛋定位完畢后，即可開始接種。先用碘酊將接種位點(diǎn)和氣室消毒，再用70%酒精脫

碘，然后根據(jù)需要用三棱針或20號針頭在蛋殼上打孔。根據(jù)部位，雞胚接種有以下幾種方

法（可參照圖1）

（1）尿囊腔接種

這是最常用的接種方法，雞新城疫、減蛋綜合癥病毒、傳染性支氣管炎病毒、法氏囊病

毒等均可采用這種方法。蛋殼消毒后，先在氣室上打一小孔，再于胚胎一側(cè)近氣室處所畫位

點(diǎn)打一小孔，用帶5?7號針頭的注射器插入孔內(nèi)約1.5厘米，接種接種材料0.1?0.2毫升。

進(jìn)針時針頭與蛋殼應(yīng)保持30℃角，不應(yīng)垂直進(jìn)針，注射完畢，立即用溶化的熱石蠟將注射

口和氣室上小孔密封、然后放回37℃孵化箱孵化72?120小時。

(2)絨毛尿囊膜接種

該方法主要用于痘病毒、喉氣管炎病毒和馬立克氏病毒等的分離培養(yǎng)。將卵殼消毒后，

先在氣室上打-小孔，再于胚胎側(cè)靠近氣室處避開大血管用電烙鐵或鋼鋸條將蛋殼打開一個

4毫米見方的小口，用刀尖小心撬開蛋殼，不能損傷卵殼膜，形成卵窗。用針尖輕輕挑破卵

窗中心的卵殼膜，但不能損傷卵殼膜下的絨毛尿囊膜。在針尖挑破處滴一滴滅菌生理鹽水或

甘油，然后用吸頭在氣室小孔上吸氣，使胚內(nèi)造成負(fù)壓，這時卵窗處絨毛尿囊膜下陷而形成

人工氣室，此時可見生理鹽水或甘油迅速滲入。用注射器滴加2?3滴接種物于卵窗的絨毛

尿囊膜上，以透明膠紙封住卵窗。氣室小孔用石臘密封，接種后的雞胚平放在孵化箱中，卵

窗向上，不要轉(zhuǎn)運(yùn)。

(3)卵黃囊接種

此法適用于馬立克氏病毒、披膜病毒、衣原體及立克次氏體的分離、培養(yǎng)。接種方法：

氣室端蛋殼消毒后，在氣室中央打一小孔，用帶7號針頭的注射器垂直刺入約3厘米，注射

接種物0」?0.2毫升。石蠟封口，繼續(xù)在370c孵化，每天翻蛋2次。

4.接種后的孵化和觀察

接種后繼