免疫分析中的干擾與消除

免疫分析中的干擾與消除概述基礎(chǔ)、前沿得話題普遍、常見得現(xiàn)象復(fù)雜、多樣得本質(zhì)深刻、直接得影響長遠、艱巨得任務(wù)定義IFCC:樣本中被分析物質(zhì)外存在得因素,產(chǎn)生得檢測信號,表現(xiàn)在檢測結(jié)果上得系統(tǒng)性錯誤。分析物不相關(guān)得因素溶血、脂血、抗凝樣本、樣本保存等分析物相關(guān)得因素

類風濕因子,異嗜性抗體,自身抗體等免疫分析中干擾得分析不同次檢驗結(jié)果得對比得不一致性檢驗結(jié)果與臨床癥狀不符系列檢驗結(jié)果得矛盾極度偏離,難以置信得檢驗結(jié)果稀釋回收高度偏離預(yù)期與其她檢驗試劑或方法相背離得結(jié)果常見“干擾”因素溶血高膽紅素脂血(對脂溶性物質(zhì)得干擾,NEFA)抗凝樣本(添加劑,分離膠)樣本得穩(wěn)定性與保存條件內(nèi)源性激素結(jié)合蛋白白蛋白TBG,SHBG,CBGFDH(家族性異常白蛋白高甲狀腺素血癥)游離激素得測定(標記抗原,標記抗原類似物,標記抗體)內(nèi)源性抗體等干擾因素類風濕因子、補體、溶菌酶、異嗜性抗體,HAAA等10%以上(30-40%)得病人體內(nèi)存在內(nèi)源性異嗜性抗體(CAP)10%-40%得人群存在HAMA干擾,取決于檢測試劑(LarryKricka,President,AACC)我國臨床醫(yī)療總誤診率為27、8%,比國際平均臨床醫(yī)療總誤診率25%高2、8個百分點,其中惡性腫瘤誤診率為40%(2008),抗體干擾就是其中原因之一。異嗜性抗體產(chǎn)生得途徑類風濕性關(guān)節(jié)炎流行性感冒過敏輸血自身免疫疾病免疫抑制藥物心肌病變注射疫苗動物接觸(飼養(yǎng)寵物)特定食物(奶酪)動物輔助治療(胸腺細胞,胚胎細胞,羊細胞)血液透析母嬰傳遞腸胃炎(E、coli)類風濕因子(Rheumatoidfactors,RF)自身抗體,體內(nèi)產(chǎn)生得以變性IgG(一種抗體)為抗原得一種抗體,通常為IgM,結(jié)合IgG得FC片段。約90%類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者得RF呈陽性,在其她自身免疫疾病中也有一定得陽性率。正常人有5%左右得陽性率類風濕因子(Rheumatoidfactors,RF)去除Fc片段,用F(ab)2替代完整得IgG熱變性IgG處理檢驗抗原時,加入2-巰基乙醇使RF降解。11大家應(yīng)該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流類風濕因子(Rheumatoidfactors,RF)IgM測定方法:捕獲包被和中和IgG補體(plement)存在于正常人和動物血清與組織液中得一組經(jīng)活化后具有酶活性得蛋白質(zhì)。約占血清球蛋白總量得10％。極不穩(wěn)定,大部分對熱敏感,56℃30分鐘即失去活性。結(jié)合IgG得Fc片段,封閉結(jié)合位點。新鮮血清中得補體對試劑反應(yīng)干擾較大除熱滅活外,可用EDTA稀釋標本緩解補體得影響。亦有推薦在試劑中加入雞IgG得,以抑制補體激活溶菌酶(Lysozyme)一種能水解致病菌中黏多糖得堿性酶,廣泛存在于人體多種組織中,鳥類和家禽得蛋清、哺乳動物得淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中強烈結(jié)合低等電點蛋白,可橋接固相和標記抗體導(dǎo)致假陽性?？杉尤脬~離子,形成絡(luò)合物可在試劑中加入卵清蛋白(pI=4、9)鳥蛋白(beckman)異嗜性抗體(Heterophilicantibodies,HA)HA就是存在于人類血清中,由已知或未知得抗原物質(zhì)刺激人體產(chǎn)生得,與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合得一類抗體。通常就是由于直接接觸動物,污染得食品,接種動物血清或疫苗而產(chǎn)生。可分為天然抗體和自身免疫抗體,親和力低,結(jié)合力弱,具有廣泛得特異性,普遍存在于人體中,多為IgG。HA可與試劑中抗體得Fc或者F(ab)區(qū)域得決定簇結(jié)合,從而干擾免疫反應(yīng)。人抗動物抗體(HAAA)與HA具有一定得同源性,均能發(fā)生交叉反應(yīng),造成干擾免疫途徑較為明確,動物免疫球蛋白治療或接觸史具有高親和力,可定向結(jié)合到動物得抗原表位上HAAA有IgA,IgG,IgM等多種類型,又可分為抗同種型,抗獨特型,抗抗獨特型等三類物種廣泛,目前已報道抗鼠,牛,山羊,綿羊,馬等多種抗體不同種動物Ig分子間蛋白質(zhì)序列有大量同源性,因此抗動物抗體可與多種動物免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)接觸動物蛋白兩周后可產(chǎn)生抗體,存在時間可長達30個月人抗鼠抗體(HAMA)由于鼠抗在單克隆抗體影像,抗體治療以及診斷試劑中得廣泛應(yīng)用,使得HAMA尤其受關(guān)注抗同種型,抗獨特型,抗抗獨特型HAMA干擾機制HAMA干擾機制HAMA得鑒別稀釋樣本測定得值不成比例用參考試劑盒測定進行對比其她試劑盒驗證加入清潔抗體進行對比HAMA測定試劑盒(6HAMA試劑盒)包被鼠抗,標記鼠抗得夾心法包被鼠抗,標記抗人IgG/IgM得間接法內(nèi)源性抗體干擾得消除試劑盒得設(shè)計原材料得選擇去除Fc片段嵌合抗體(RocheTSH/CEA)雞抗體樣本得預(yù)先處理固相血清吸附蛋白A之類得固相吸附劑

PEG6000處理樣本樣本酸和熱聯(lián)合處理加入阻斷劑清潔抗體

商品化得異嗜性抗體阻斷劑HBR:單克隆鼠抗人IgMIIR:由異嗜性抗體和人抗動物抗體為免疫原產(chǎn)生得混合得鼠單抗。簡單了解ROCHE(IEP)簡單了解ROCHE(IEP)簡單了解ROCHE(IEP)自身抗體(Autoanalyteantibodies)嗜靶抗原得自身抗體,與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,可對靶抗原得測定結(jié)果造成干擾。目前已知存在得自身抗體:THAAB、Anti-Tg、IAA,Anti-PRL等干擾舉例:高泌乳素血癥(巨泌乳素)有生物和免疫活性得23kD泌乳素單體;缺乏生物活性約50-60kD得大泌乳素;無或不發(fā)揮任何生物活性但有免疫反應(yīng)性150-170kD得巨泌乳素。巨泌乳素:PRL與其IgG型抗體結(jié)合形成得免疫復(fù)合物,因其分子量大而不能通過毛細血管壁,無法與受體結(jié)合而不能發(fā)揮生物活性,在體內(nèi)得半衰期較長,在循環(huán)中累積,被視作PRL檢測從而造成PRL濃度