TCAICC 05-2023 中藥材中甲拌磷的快速檢測 膠體金免疫層析法

全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會發(fā)布備案號：送審稿2023-12-31發(fā)布I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑與材料 6儀器與設備 7分析步驟 8結(jié)果判定 9結(jié)果確認 10性能指標 附錄A（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標計算 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會提出。本文件起草單位：全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會、北京勤邦科技股份有限公司、西北農(nóng)林科技大學、寶雞市婦幼保健院本文件主要起草人：郭樹、王兆芹、萬宇平、朱亮亮、呂欣、王欣、趙帆、魏力杰、劉飄雪、杜玲本文件為首次發(fā)布。1中藥材中甲拌磷的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了中藥材中甲拌磷的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于黨參、黃芪、麥芽、薏苡仁等中藥材中甲拌磷的快速定性測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！吨袊幍洹?020年版第四部0211藥材和飲片取樣法GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法國市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號市場監(jiān)管總局關于規(guī)范食品快速檢測使用的意見3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的甲拌磷經(jīng)提取后與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中甲拌磷進行定性判定。5試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）。5.1.2稀釋液：由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說明書配制。5.1.3參考物質(zhì)：甲拌磷參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。表1甲拌磷參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量C7H17O2PS325.2溶液配制5.2.1甲拌磷標準儲備液（100μg/mL）：準確稱取甲拌磷參考物質(zhì)（5.1.3）1mg（精確至0.01mg），置于小燒杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為100μg/mL的甲拌磷標準儲備液。-20℃避光保存，有效期6個月。5.2.2甲拌磷標準工作液（1μg/mL精密移取甲拌磷標準儲備液（100μg/mL5.2.1）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，搖勻，配制成濃度為1μg/mL的甲拌磷標準工作液。臨用新配。5.3材料甲拌磷膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為中藥材。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。6儀器與設備6.1電子天平：感量為0.01g和0.01mg。6.2均質(zhì)器。6.3離心機。6.4氮吹儀。6.5渦旋儀。6.6移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。6.7迷你金屬浴。6.8膠體金讀數(shù)儀（可選）。7分析步驟7.1試樣制備取適量有代表性樣品，充分均質(zhì)混勻。7.2試樣提取稱取1g試樣（精確至0.01g）放入離心管中，加入3mL甲醇（5.1.1），上下振蕩30s，3000r/min以上離心3min；取1.0mL上清液至離心管中，50~60℃水浴氮氣流下吹干；加入0.5mL稀釋液（5.1.2），渦動20s后即為待測液。7.3測定步驟測試前，將未開封的試紙條恢復至室溫。吸取100μL樣品待測液于試紙條的加樣孔中，室溫反應10min后，直接進行結(jié)果判定。7.4質(zhì)控試驗3通過對比質(zhì)控線(C線)和檢測線(T線)的顏色深淺進行結(jié)果判定。目視判定示質(zhì)控線(C線)顯色，檢測線(T線)顏色深于質(zhì)控線(C線)或與質(zhì)控線(C線)顏色質(zhì)控線(C線)顯色，檢測線(T線)顏色淺于質(zhì)控線(C線)或不顯色，表明樣品中甲無效陰性陽性4空白試驗測定結(jié)果應為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結(jié)果應為陽性。9結(jié)果確認當檢測結(jié)果為陽性時，采用參比方法進行確證。10性能指標10.1檢出限：0.02mg/kg。10.2靈敏度：≥95%。10.3特異性：≥90%。10.4假陰性率：≤5%。10.5假陽性率：≤10%。10.6交叉反應率：與甲拌磷砜和甲拌磷亞砜交叉反應率為100%，與三唑磷交叉反應率≤本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者應使用經(jīng)過驗證的滿足本方法規(guī)定的各項性能指標的試劑、試紙條。本方法參比方法為《中國藥典》2020年版第四部2341農(nóng)藥殘留量測定法。5（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標計算快速檢測方法各個性能指標計算方法見表A.1。表A.1快速檢測方法性能指標計算方法N11N12N1.＝N11＋N12N21N22N2.＝N21＋N22N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2＋＝pfN12/N1.×100＝100－靈敏度pf