基因工程 專項(xiàng)訓(xùn)練（原卷版）-2025年高考生物一輪復(fù)習(xí)（新高考專用）

專題32基因工程

考點(diǎn)分布1重點(diǎn)難點(diǎn)備考指南

1.基因工程的誕生理解掌握質(zhì)粒的類型和特點(diǎn)。

1.基因工程的基本工具

2.基因工程的原理及技術(shù)(含理解并掌握基因工程用的兩種酶的作用。

2.基因工程的基本操作及

PCR技術(shù))理解掌握基因工程的操作步驟和注意事

其應(yīng)用

3.基因工程的應(yīng)用項(xiàng)。

3.蛋白質(zhì)工程及應(yīng)用

4.蛋白質(zhì)工程掌握蛋白質(zhì)工程的流程

考點(diǎn)一基因工程的操作工具

＜知識(shí)梳理

1.基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外和轉(zhuǎn)基因等技

術(shù)，賦予生物以新的特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生

物產(chǎn)品。由于基因工程是在水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做DNA重組

技術(shù)?；蚬こ痰淖儺愒硎莖

2.基因工程的基本工具

(1)限制性內(nèi)切核酸酶(簡(jiǎn)稱)o主要來自生物。具有

性，斷裂特定的兩個(gè)核甘酸之間的o產(chǎn)生末端或末端

①原核生物中存在限制酶的意義是什么？

②限制酶來源于原核生物，為什么不能切割自己的DNA分子?

(2)DNA連接酶

①作用：將限制酶切割下來的DNA片段拼接成新的DNA分子，恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)脫氧

核昔酸之間的o

②類型

常用類型E?coliDNA連接酶T4DNA連接酶

來源—口噬菌體

特點(diǎn)只縫合末端縫合_________

DNA連接酶和DNA聚合酶不是一回事。原因是：①DNA連接酶連接的是

而DNA聚合酶是把單個(gè)的連接到已有的DNA片段上。②起作

用時(shí)需要以一條DNA鏈為模板，而不需要模板。

(3)載體

①種類：、、等。

②質(zhì)粒的特點(diǎn)：有、能、有特殊的O

③運(yùn)載體的作用：攜帶外源DNA片段進(jìn)入受體細(xì)胞。

1.與DNA有關(guān)的酶的比較

名稱作用部位作用結(jié)果

限制酶磷酸二酯鍵將DNA切成兩個(gè)片段

DNA連接酶磷酸二酯鍵將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子

DNA聚合酶磷酸二酯鍵將單個(gè)脫氧核昔酸依次連接到單鏈末端

DNA(水解)酶磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核昔酸

解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈

2.圖解限制酶的選擇原則

PstlSmalPs，I標(biāo)記警l/N'I

11」J》EcoR]

甲乙

(1)不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇戶stI,而不選擇5勿al。

(2)保留標(biāo)記基因原則：質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因，所以所選擇的限制酶盡量不要破

壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選擇物al。

(3)確保出現(xiàn)相同黏性末端原則：通常選擇與切割目的基因相同的限制酶，如圖甲中尸s〃；

為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，

如圖甲也可選擇PstI和￡coRI兩種限制酶。

<歸納延伸:>

載體上標(biāo)記基因的作用

載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒有抵抗相關(guān)

抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá),

使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保

留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如下圖所示：

amp'/

進(jìn)入受」__________在含有氨―青霉素」

~|的培養(yǎng)基上培養(yǎng)1

只有含有載體,

含有抗氨節(jié)

并且載體上的

青U霉素基因大腸桿菌中有的

標(biāo)記基因能夠

的質(zhì)粒有載體進(jìn)入，有的

表達(dá)的大腸桿

沒有載體進(jìn)入

菌才能存活并

增殖

典例1.下列有關(guān)基因工程中載體的說法，正確的是(

A.在進(jìn)行基因工程操作中，被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒

B.所有的質(zhì)粒都可以作為基因工程中的載體

C.質(zhì)粒是一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的鏈狀DNA分子

D.作為載體的質(zhì)粒DNA分子上應(yīng)有對(duì)重組DNA進(jìn)行鑒定和選擇的標(biāo)記基因

典例2.如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過

程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內(nèi)

無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組

質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。

已知當(dāng)甲醇作為唯一碳源時(shí)，該酵母菌中A0X1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)［5‘A0X1和3,A0X1(TT)

分別是基因A0X1的啟動(dòng)子和終止子］。請(qǐng)分析回答下列問題：

SnaBIAvril乙肝患者

Sac]

陽性血清

乙肝露毒DNA

MA0XI卡拉霉|PCR技術(shù)

氨芳青AIB

素抗性

霉素抗碗

/n基因HBsAg基因

性基因pPIC9K質(zhì)粒

I圖1圖2［

IZ-HJg5AOX13^0X1母細(xì)胞養(yǎng)

重組質(zhì)粒大腸桿菌?重組DNA

(1)為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該選擇切割質(zhì)粒,

并在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上,這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)

是O

(2)酶切獲取HBsAg基因后，需用將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組

質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取。

(3)步驟3中應(yīng)選用限制酶來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA,然后再將其導(dǎo)入巴斯

德畢赤酵母菌細(xì)胞。

(4)為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入以便篩選；

若要檢測(cè)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，可以用方法進(jìn)行檢測(cè)。

(5)轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入以維持其生活,

同時(shí)誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。

考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序

＜知識(shí)梳理二＞

1.目的基因的獲取

(1)目的基因：主要指的基因，也可以是一些具有作用的因子。

(2)獲取目的基因的方法

利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增目的基因。

原理：0

過程

第一步：變性加熱至90。。以上，DNA解鏈為單鏈；

第二步：冷卻至50℃左右，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；

第三步：加熱至72℃左右,窗。酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。

如此重復(fù)循環(huán)多次。

2.---------------------基因工程的核心

①目的：使目的基因,并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因

能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

②基因表達(dá)載體的組成：目的基因、復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因。

啟動(dòng)子二起始密碼子，終止子W終止密碼子

(1)啟動(dòng)子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端。它是的部位,

驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。

(2)終止子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，位于基因的尾端。作用是=

(3)起始密碼子和終止密碼子位于上，分別控制翻譯過程的o

3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

生物種類植物動(dòng)物微生物

常用方法_______轉(zhuǎn)化法___________技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法

受體細(xì)胞——原核細(xì)胞

將目的基因插入到Ti將含有目的基因的表_______處理細(xì)胞一

質(zhì)粒的___________上達(dá)載體提純f取卵(受感受態(tài)細(xì)胞f重組表

轉(zhuǎn)化過程一農(nóng)桿菌一導(dǎo)入植物精卵)f顯微注射一受達(dá)載體DNA分子與感

細(xì)胞f整合到受體細(xì)精卵發(fā)育一獲得具有受態(tài)細(xì)胞混合一感受

胞染色體的DNA上一新性狀的動(dòng)物態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子

表達(dá)

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定

利用技術(shù)檢測(cè)染色體DNA上是否插入了目的基因和是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,

用，檢測(cè)目的基因是否翻譯成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

1.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代,

同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。一個(gè)基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動(dòng)子、

終止子及標(biāo)記基因等。圖中抗生素抗性基因的作用是作為標(biāo)記基因，鑒別受體細(xì)胞中是否含

有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。

2.PCR技術(shù)相關(guān)分析

（1）關(guān)于引物的2點(diǎn)提醒：①引物是一小段單鏈的DNA或RNA,作為新子鏈的合成起點(diǎn)，只

能結(jié)合在母鏈的3,端；②只有通過引物，DNA才可以開始進(jìn)行復(fù)制。

（2）PCR技術(shù)和DNA復(fù)制的比較

怛C逮術(shù)］PDNAM^J；

體外（PCR擴(kuò)增儀中卜母產(chǎn)卜細(xì)胞內(nèi)（主要是細(xì)胞核內(nèi)）

解旋

DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化

方式

熱穩(wěn)定DNA聚合酶解旋酶、DNA聚合酶

車較高溫度下進(jìn)行，溫度條件卜細(xì)胞內(nèi)溫和條件

需控制溫度［1］

DNA片段一［合成］對(duì)象卜DNA分子

1相向點(diǎn)）

均需要模板（DNA雙鏈）、原料

（四種脫氧核昔酸）、能量

3.基因表達(dá)載體構(gòu)建過程

載體（質(zhì)粒）

夕卜源DNA

基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）

若考慮兩兩相連,則DNA連接酶連接DNA片段會(huì)出現(xiàn)三種情況：目的基因與目的基因的連接、

目的基因與質(zhì)粒的連接、質(zhì)粒與質(zhì)粒的連接，需篩選出重組質(zhì)粒。

1.目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因的

插入位點(diǎn)應(yīng)在啟動(dòng)子與終止子之間。

2.受體細(xì)胞選擇時(shí)需注意：要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素必須用真核生物酵母菌（需

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌）；一般不用支原體，因?yàn)樗鼱I寄生生活；一定不能用哺乳

動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)樗鼰o細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)。

典例1.土壤農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，Ti質(zhì)粒上的T—DNA片段轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的基因組中。利

用農(nóng)桿菌以Ti質(zhì)粒作為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因，下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.目的基因應(yīng)插入T—DNA片段外，以防止破壞T—DNA

B.用Ca"處理農(nóng)桿菌，以利于其侵染植物細(xì)胞

C.Ti質(zhì)粒是一種環(huán)狀DNA分子，屬于細(xì)菌的擬核DNA

D.T-DNA片段有利于介導(dǎo)外源DNA整合到植物細(xì)胞的染色體上

典例2.乙肝病毒是一種DNA病毒。中國的乙肝病毒攜帶者約占總?cè)丝诘?0%o我國科學(xué)家通

過基因工程生產(chǎn)出乙型肝炎病毒疫苗，為預(yù)防乙肝提供了有力的保障?；卮鹣铝袉栴}：

（1）乙肝病毒專一侵染肝細(xì)胞的原因是?

（2）乙肝病毒的基因組可編碼的蛋白質(zhì)及功能如下：Core蛋白是外殼蛋白；Pre—core與

抑制宿主的免疫反應(yīng)有關(guān)；X蛋白與病毒復(fù)制有關(guān)；S蛋白是病毒的包膜蛋白，與病毒進(jìn)入

細(xì)胞有關(guān)。通過基因工程生產(chǎn)的乙肝疫苗的有效成分是上述病毒蛋白中的

（3）通過基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗的過程如圖所示：

-①、②③

乙肝病毒分離■有關(guān)基因?qū)Т蠹?xì)菌發(fā)薛大量生產(chǎn)疫苗

a.若要獲得大量的目的基因，可采用PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，該技術(shù)中使用的引物有

種，其作用是o

b.在①②過程中需使用的工具酶是。②過程中常用的載體是。

C.為提高②過程的轉(zhuǎn)化效率，常采用的方法是。

(4)使用酵母菌作為受體菌生產(chǎn)乙肝疫苗的效果更好，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，原因是

考點(diǎn)三基因工程的應(yīng)用和蛋白質(zhì)工程

＜知識(shí)梳理:＞

1.基因工程的應(yīng)用

表現(xiàn)方面具體內(nèi)容

①轉(zhuǎn)基因抗蟲植物；

②轉(zhuǎn)基因抗病植物；

③轉(zhuǎn)基因抗除草劑植物；

農(nóng)牧業(yè)方面

④利用轉(zhuǎn)基因改良植物品質(zhì)

⑤提高動(dòng)物的生長速率

⑥改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)

①生產(chǎn)藥物

醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域

②建立器官移植的工廠

利用基因工程菌生產(chǎn)食品工業(yè)用酶、氨基酸、維生素等；

食品工業(yè)方面

將牛凝乳酶的基因?qū)胛⑸?，生產(chǎn)凝乳酶；

2.蛋白質(zhì)工程

⑴概念

①基礎(chǔ)：蛋白質(zhì)分子的及其與的關(guān)系。

②手段：改造基因或基因合成。

③結(jié)果：對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行或制造出。

＜考點(diǎn)精洲二二＞

1.對(duì)天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，你認(rèn)為應(yīng)該直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作，還是通過對(duì)基因的操作

來實(shí)現(xiàn)？原因是什么？

應(yīng)該通過對(duì)基因的操作來實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的改造。主要原因有：①蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的

空間結(jié)構(gòu)，基因的結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，容易改造；②改造后的基因可以遺傳給下一代，被改造的

蛋白質(zhì)無法遺傳。

2.蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較

(1)區(qū)別

項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程

預(yù)期蛋白質(zhì)的功能一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白獲取目的基因f基因表達(dá)載體的

過程質(zhì)結(jié)構(gòu)f推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列一找構(gòu)建一將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

到相對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列一目的基因的檢測(cè)與鑒定

定向改造生物的遺傳特性，以獲得

實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)

人類所需的生物類型和生物產(chǎn)品

結(jié)果可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)

(2)聯(lián)系

①蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程。

②基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造。

(1)青霉素是青霉菌產(chǎn)生的，不是通過基因工程產(chǎn)生的。

(2)動(dòng)物基因工程主要是為了改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)，而不是為了產(chǎn)生體型巨大的個(gè)體。

(3)原核生物的基因(如抗蟲基因)可以作為真核生物(棉花)的目的基因。

(4)Bt毒蛋白基因產(chǎn)生的Bt毒蛋白只在某些昆蟲腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人

和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也無特異性受體，因此，Bt毒蛋白不會(huì)對(duì)人畜產(chǎn)生危害。

典例1.紅細(xì)胞生成素(EPO)是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種激素物質(zhì)，是當(dāng)今最成功的基因工

程藥物，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)

胞生成素主要來自基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)。其簡(jiǎn)要生產(chǎn)流程如圖,

下列相關(guān)敘述正確的是()

檢測(cè)、

②中國倉鼠篩選高效表達(dá)rhEPO基

^,or重組表一卵巢細(xì)胞一因的重組CHO細(xì)胞

培|分

系(CHO)養(yǎng)|離

載體達(dá)載體

rhEPO

A.過程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA連接酶

B.構(gòu)建的重組表達(dá)載體中終止子的作用是終止翻譯過程

C.檢測(cè)重組細(xì)胞是否表達(dá)出rhEPO常用抗原一抗體雜交技術(shù)

D.用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)EPO可將人EPO基因?qū)氩溉閯?dòng)物體細(xì)胞獲得

典例2.甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)。為了改善黃瓜的品質(zhì)，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，得到了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉栴}：

(1)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用黃瓜(填“受傷的”或“完好的”)葉片與

含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是

(2)若在轉(zhuǎn)基因黃瓜中檢測(cè)到這種甜蛋白，則表明該重組質(zhì)粒中的已轉(zhuǎn)移到植

物細(xì)胞中且能夠表達(dá)；用該轉(zhuǎn)基因黃瓜的某一植株與一株非轉(zhuǎn)基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含

甜蛋白個(gè)體數(shù)與不含甜蛋白個(gè)體數(shù)之比為1：1,則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到

(填“核基因組”“線粒體基因組”或“葉綠體基因組”)中。

(3)假設(shè)某種轉(zhuǎn)基因作物因?yàn)槭艿讲《靖腥径鴾p產(chǎn)，若要以該轉(zhuǎn)基因作物為材料獲得脫毒苗,

應(yīng)選用___________________________________________________________________________

作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。

(4)通常，基因工程操作主要有4個(gè)步驟，即目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目

的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為

1.限制酶是一類酶，而不是一種酶。

2.將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來，需要切兩處，同時(shí)產(chǎn)生四個(gè)黏性末端或平末端。

3.不同DNA分子用同一種限制酶切割，產(chǎn)生的末端都相同，同一個(gè)DNA分子用不同的限制

酶切割，產(chǎn)生的末端一般不相同。

4.限制酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能破壞標(biāo)記基因，以便進(jìn)行檢測(cè)。

1.(2023?浙江?統(tǒng)考高考真題)紫外線引發(fā)的DNA損傷，可通過“核昔酸切除修復(fù)(NER)”

方式修復(fù)，機(jī)制如圖所示。著色性干皮癥(XP)患者的NER酶系統(tǒng)存在缺陷，受陽光照射后,

皮膚出現(xiàn)炎癥等癥狀?；颊哂啄臧l(fā)病，20歲后開始發(fā)展成皮膚癌。下列敘述鎮(zhèn)誤的是()

紫外線

二.............

51~~|~|-I-|~|-"T1~1...|"..I.I..I..I..I.3

二IIII........................................

.............?。簱p傷|…

5|III|IIIIIII3

a................................IIIIII"

⑥/?切口Qi切口0)

5，TTIlliIlliT13,

31II??????????15'

I

5，TT缺口TT3,

3”IIIII??????5,

修復(fù)完成.........

5”IIIITTTIIIII13,

.....................IIIIIII-5,

A.修復(fù)過程需要限制酶和DNA聚合酶

B.填補(bǔ)缺口時(shí)，新鏈合成以5'到3'的方向進(jìn)行

C.DNA有害損傷發(fā)生后，在細(xì)胞增殖后進(jìn)行修復(fù)，對(duì)細(xì)胞最有利

D.隨年齡增長，XP患者幾乎都會(huì)發(fā)生皮膚癌的原因，可用突變累積解釋

2.（2023?湖南?統(tǒng)考高考真題）鹽堿脅迫下植物應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的上。2對(duì)細(xì)胞有毒害作用。

禾本科農(nóng)作物ATI蛋白通過調(diào)節(jié)細(xì)胞膜上PIP2s蛋白磷酸化水平，影響山。2的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，如

圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

PIP2s蛋白人量鬣PIP2s蛋白鑼

?—H2O2

AH缺陷

抗氧化脅迫能力弱，細(xì)胞死亡抗氧化脅迫，高成活率

注：。磷酸化

A.細(xì)胞膜上PIP2s蛋白高磷酸化水平是其提高H2O2外排能力所必需的

B.PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進(jìn)壓Oz外排，從而減輕其對(duì)細(xì)胞的毒害

C.敲除ATI基因或降低其表達(dá)可提高禾本科農(nóng)作物的耐鹽堿能力

D.從特殊物種中發(fā)掘逆境脅迫相關(guān)基因是改良農(nóng)作物抗逆性的有效途徑

3.（2023?湖北?統(tǒng)考高考真題）用氨革青霉素抗性基因（Amp，、四環(huán)素抗性基因（TetR）

作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)

粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

HindHI

A.若用Hindlll酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同

B.若用Pvul酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有目的基因

C.若用SphI酶切，可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否

D.若用SphI酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芳青霉素）和Tet的培養(yǎng)基中能形

成菌落

4.（2023?浙江?統(tǒng)考高考真題）某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）

整合到野生型小鼠Ga33基因一端，如圖甲所示。實(shí)驗(yàn)得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子

雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3-W?基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生

小鼠的基因型，設(shè)計(jì)了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。

Gata3

u啟動(dòng)子區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)

插入前三--------------i一

Gata3己?物〔GFP

啟動(dòng)子區(qū)1編碼區(qū)碼編碼區(qū)I非編碼區(qū)

插入后3.?二「二?_5-

'弓就I

圖甲

下列敘述正確的是（）

A.Gata3基因的啟動(dòng)子無法控制游基因的表達(dá)

B.翻譯時(shí)先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白

C.2號(hào)條帶的小鼠是野生型，4號(hào)條帶的小鼠是曲加3-謖基因純合子

D.若用引物1和引物3進(jìn)行PCR,能更好地區(qū)分雜合子和純合子

5.（2023?湖南?統(tǒng)考高考真題）基因檢測(cè)是診斷和預(yù)防遺傳病的有效手段。研究人員采集

到一遺傳病家系樣本，測(cè)序后發(fā)現(xiàn)此家系甲和乙兩個(gè)基因存在突變：甲突變可致先天性耳聾;

乙基因位于常染色體上，編碼產(chǎn)物可將葉酸轉(zhuǎn)化為沖-甲基四氫葉酸，乙突變與胎兒神經(jīng)管

缺陷（NTDs）相關(guān)；甲和乙位于非同源染色體上。家系患病情況及基因檢測(cè)結(jié)果如圖所示。

不考慮染色體互換，回答下列問題：

IO

2

甲+/-+/-

乙+/-+/一

nO-￡~o

1234

甲+/一-/-+/+

乙+/-+/--/-+/-

X入+未突變-突變

Yy國男性耳聾□正常男性

甲三女性耳聾O正常女性

乙+/-。性別未知

⑴此家系先天性耳聾的遺傳方式是o1-1和1-2生育育一個(gè)甲和乙突變基因雙純

合體女兒的概率是O

（2）此家系中甲基因突變?nèi)缦聢D所示：

正常基因單鏈片段5'-ATTCCAGATC...（293個(gè)堿基）...CCATGCCCAG-3'

突變基因單鏈片段5'-ATTCCATATC...（293個(gè)堿基）...CCATGCCCAG-3，

研究人員擬用PCR擴(kuò)增目的基因片段，再用某限制酶（識(shí)別序列及切割位點(diǎn)為

,,

5-GATC-3）酶切檢測(cè)甲基因突變情況，設(shè)計(jì)了一條引物為5,-GGCATG-3',另一條引

3'-CTAG-5'

T

物為（寫出6個(gè)堿基即可）。用上述引物擴(kuò)增出家系成員II-1的目的基因片段后,

其酶切產(chǎn)物長度應(yīng)為bp（注：該酶切位點(diǎn)在目的基因片段中唯一）。

（3）女性的乙基因純合突變會(huì)增加胎兒NTDs風(fēng)險(xiǎn)。葉酸在人體內(nèi)不能合成，孕婦服用葉酸補(bǔ)

充劑可降低NTDs的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。建議從可能妊娠或孕前至少1個(gè)月開始補(bǔ)充葉酸，一般人群

補(bǔ)充有效且安全劑量為0.4~1.0mg.d\NTDs生育史女性補(bǔ)充4mg.cT。經(jīng)基因檢測(cè)胎兒（III

-2）的乙基因型為據(jù)此推薦該孕婦（II-1）葉酸補(bǔ)充劑量為mg.dL

6.（2023?山東?高考真題）科研人員構(gòu)建了可表達(dá)J-V5融合蛋白的重組質(zhì)粒并進(jìn)行了檢

測(cè)，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示，其中V5編碼序列表達(dá)標(biāo)簽短肽V5。

啟動(dòng)子J基因V5編碼序列終止子

條帶1-■條帶1

條帶2-

注：Fl、F2、RI、R2表示引物抗J蛋白抗體抗V5抗體

圖甲圖乙

（1）與圖甲中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，作為載體，質(zhì)粒還

需具備的結(jié)構(gòu)有（答出2個(gè)結(jié)構(gòu)即可）。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒后，為了確定J基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確，需進(jìn)行PCR檢測(cè)，若

僅用一對(duì)引物，應(yīng)選擇圖甲中的引物-已知J基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈，由

此可知引物F1與圖甲中J基因的（填“a鏈”或“b鏈”）相應(yīng)部分的序列

相同。

（3）重組質(zhì)粒