瘧疾血檢技術培訓2

全球瘧疾項目

鏡檢技術培訓（二）瘧原蟲檢驗技術

采集血樣血片制作血片染色瘧原蟲鏡檢采集血樣采血部位：耳垂或無名指，取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，右手持消毒針迅速刺入皮膚，不宜過深或過淺。然后用右手中指輕輕擠壓出血。厚血膜血量約一粒米大小,薄血膜血量為厚血膜的一半或1/3。厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（約4－4.5微升），置于平置的載玻片上，由里向外一個方向旋轉，涂成直徑0.8~1厘米大小圓形厚血膜。薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴，使血滴與載玻片接觸，血液沿推片邊緣向兩側展開，將推片與載玻片保持300-450，均勻而迅速適當地用力向前推成舌形薄血膜。血片制作（一）厚血膜薄血膜血片制作（二）標準的瘧疾厚薄血膜片：把載玻片分成六等份，把厚血膜涂在從右到左的第三格中央，薄血膜涂在第四格前緣至第六格中部，第一、二格備貼標簽編號用。厚、薄血膜間用蠟筆劃線分開厚血膜血量不宜過多或過少薄血膜平整,無皺折和空泡.顯微鏡下紅細胞單層排列血片制作（三）不同血片涂布法：標準血片門診發(fā)熱病人血片居民普查血片血片染色（一）染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法

WHO推薦使用吉氏染色法血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(純)

50ml甲醇

(純)

50ml把吉氏粉置于研缽中，加少量甘油充分研磨,

然后邊加邊磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在研缽中加入少許甲醇清洗研缽，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反復數次，直至甲醇用完。蓋好瓶蓋，充分搖勻，置于65℃溫箱中24小時，或室溫陰暗處1-2周后過濾，備用。整個染色液配制時間不能少于5個小時時間越長染色效果越好。血片染色（三）吉氏染液的配制：把吉氏原液用PH7.0±0.2緩沖液稀釋，比例約為1:15～20，稀釋后方可用于厚薄血片染色。吸取原液時，不要晃動瓶子,以免沉淀物泛起影響染色效果.血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸餾水進行溶血，到血膜呈灰白色時，將水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：①薄血膜固定時，甲醇不可觸碰未溶血的厚血膜。

②厚血膜溶血時，蒸餾水不可觸碰薄血膜。血片染色（五）血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定的厚、薄血膜上，室溫染色30分鐘，用緩沖液沖洗干凈。血片晾干后鏡檢。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加緩沖液5ml，混勻后，滴加于厚、薄血膜上染色5分鐘，用緩沖液沖洗，晾干后鏡檢。薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴，使血滴與載玻片接觸，血液沿推片邊緣向兩側展開，將推片與載玻片保持300-450，均勻而迅速適當地用力向前推成舌形薄血膜。America,AsiaandAfrica.薄血膜吉氏染液、甲醇、二甲苯、鏡油。---用心創(chuàng)造新未來標準的瘧疾厚薄血膜片：RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.整個染色液配制時間不能少于5個小時間日瘧和惡性瘧的鑒定要點瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.環(huán)狀體可貼在紅細胞邊緣厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（約4－4.讀片順序：顯微鏡鏡下按由上而下、之字形順序讀片甲醇(純)50ml如果血片偏紅,說明染液偏酸性熟悉瘧疾血片的制作，瘧原蟲的鏡下特征，能承擔瘧疾血檢工作。厚、薄血膜間用蠟筆劃線分開Presentedwithtemperature38.8~1厘米大小圓形厚血膜。falciparum）鑒定要點：編號：醫(yī)院名稱代碼＋序號。吉氏原液的配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甲醇(純)50ml聚光器未上升至最高位置即放血片（-2分），鏡臺上升或下降過快（-3分），壓破玻片（-10分）小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）纖細,常有多重感染，環(huán)狀體內可有2個核注：文本框可根據需求改變顏色、移動位置；采血部位：耳垂或無名指，對血檢對象進行認真登記，填寫《瘧原蟲鏡檢登記表》，按接樣順序編號。顯微鏡干凈，有綢布遮蓋，接物鏡不與聚光器對接血片染色（六）3.成批血片染色：將已固定的血片插入染色缸，加入吉氏染液浸沒血片，對厚、薄血膜同時染色30分鐘。注意：如果吉氏染液是從市場上購置的成品試劑，請嚴格按照說明書操作。血片染色（七）血片染色結果：染色質量好的血片：顯微鏡下核呈紅色，胞漿呈藍色，薄血膜平整，紅細胞單層排列。如果血片偏紅,說明染液偏酸性如果血片偏藍,說明染液偏堿性

吉氏染色血片外觀血片染色（八）血片制作與染色注意事項：１、載玻片必須清潔無油污；２、固定薄血膜時，甲醇不要觸碰到厚血膜；３、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面進行溶血，以防厚血膜染色后顏色發(fā)黑，影響鏡檢；４、血片充分干燥后方可染色，防止沖洗染液時厚血膜脫落。5、未染色血膜的放置時間夏天不宜超過48小時，冬天不宜超過72小時，否則厚血膜會自然固定，影響鏡檢。瘧原蟲鏡檢（一）

厚血膜

薄血膜

優(yōu)點血量多，面積小，原蟲較為集中。原蟲檢出率高血量少，面積大，干燥快紅細胞完整，原蟲形態(tài)極少變形。用于觀察原蟲形態(tài)與鑒別蟲種。缺點原蟲在干燥過程中皺縮，紅細胞消失，原蟲變形較大，原蟲鑒定困難血量比厚血膜少許多，但面積是厚血膜的8-10倍。檢查費時，原蟲檢出率較低用途用于瘧疾病人檢查蟲種、蟲期鑒定及初學者教學標本瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點顯微鏡下厚血膜讀片順序瘧原蟲鏡檢（二）讀片順序：顯微鏡鏡下按由上而下、之字形順序讀片瘧原蟲鏡檢（三）鏡檢瘧原蟲結果判斷：陰性血片：①檢查全部厚血膜視野未查見瘧原蟲；②最少檢查100個厚血膜視野未查見瘧原蟲（臨床病人）。陽性血片：檢出各期瘧原蟲（環(huán)狀體、裂殖體、配子體）?；旌细腥荆涸谝粋€血膜上有2種以上瘧原蟲感染稱為混合感染，較常見的是間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲混合。鏡檢判斷P.v+P.f混合感染：必須是看到P.v各期原蟲和P.f的配子體。間日瘧和惡性瘧的鑒定要點瘧原蟲鏡檢（四）瘧原蟲鏡檢（五）瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.vivax）鑒定要點紅細胞通常漲大薛氏點明顯成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體胞漿有阿米巴樣偽足血片中可見各期的原蟲形態(tài)成熟裂殖體約含12-24個裂殖子

瘧原蟲鏡檢（六）瘧原蟲形態(tài)特征：惡性瘧（P.falciparum）鑒定要點：紅細胞不漲大小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）纖細,常有多重感染，環(huán)狀體內可有2個核

環(huán)狀體可貼在紅細胞邊緣

血片中沒有其他發(fā)育期的大滋養(yǎng)體配子體呈新月形或臘腸形成熟裂殖體約含16-32個裂殖子可出現茂氏點鏡檢示教以下血片采自現癥病例瘧原蟲鏡檢（七）間日瘧環(huán)狀體2.Intermittentfever;arrivedfromIndia2monthsago.間日瘧滋養(yǎng)體3.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.America,AsiaandAfrica.Generalmalaise.惡性瘧雄配子體4.Unspecifiedoverseastravel.Presentedwithtemperature38.4C三日瘧裂殖體5.MalerecentlyreturnedtoAustraliaafterbackpackingthroughAsia.Historyofflulikesymptoms.白細胞6."NewAustralian"previouslyfromMalaysia.Intermittenttemperaturesandheadaches.白細胞7.Achesandpains,withfever.?GlandularFever,?malaria.間日瘧裂殖體惡性瘧環(huán)狀體18.RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.間日瘧裂殖體19.PatienthasbeenholidayingintheDominicanRepublic,nowfeverish.惡性瘧雄配子體21.AmemberoftheUNforcesinEastTimor.Presentedwithhightemperature.惡性瘧雌雄配子體間日瘧裂殖體惡性瘧雌配子體間日瘧裂殖體血檢質量考核

實驗室條件血檢工作要求考核標準實驗室條件人員：各單位至少有1名專職或的經過瘧原蟲檢驗技術培訓的人員。熟悉瘧疾血片的制作，瘧原蟲的鏡下特征，能承擔瘧疾血檢工作。環(huán)境：實驗室相對獨立，可做瘧疾血檢。設備：顯微鏡、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。試劑：吉氏染液、甲醇、二甲苯、鏡油。血檢工作要求制定《瘧原蟲鏡檢實驗室管理制度》、《瘧原蟲鏡檢操作規(guī)程》對血檢對象進行認真登記，填寫《瘧原蟲鏡檢登記表》，按接樣順序編號。編號：醫(yī)院名稱代碼＋序號。保留鏡檢過的所有血片，以備上級抽樣復查，經上一級機構同意后方可清洗。陽性血片須專人管理。血液標本有潛在生物危害，在實驗室血檢工作、標本保存中應嚴格遵守《實驗室生物安全通用要求》。

縣（市/區(qū)）全球基金瘧疾項目發(fā)熱病人瘧原蟲血檢登記表

血檢單位：、

序號姓名年齡性別居住地址外出史及地點職業(yè)發(fā)病日期體溫（oC)臨床初診血檢日期血檢方法血檢結果檢驗人簽名血樣編號鏡檢RDT陰性PfPvPmPo混合1234合計瘧原蟲血檢考核標準(1)項目檢查內容質量標準考核分值好分值中分值差分值血片制作厚血膜(25分）血量（5分）4～5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）玻片右1/35稍偏右4偏右過多3直徑（5分）0.8～1.0cm50.7～0.8或1.0～1.2cm3<0.7或>1.2cm1外觀(10分)圓形厚膜均勻,邊緣整齊10圓形稍不均不整齊8厚薄不勻影響著色5薄血膜(25分）血量（5分）1～1.5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）直徑（5分）外觀(10分）玻片1/2～1/3處5稍偏右或偏左4偏右或偏左過多32.5～2.0cm5稍大或稍小3過多或過少1舌狀厚薄均勻10舌狀稍不均5厚薄不勻呈波浪型3考核標準瘧原蟲血檢考核標準（2）項目檢查內容質量標準考核分值好分值中分值差分值血片染色質量(15分)外觀（5分）藍紫色5深藍色3紅色或灰白色2鏡下(10分)白細胞、瘧原蟲胞漿藍色，核紅色10染色過深，原蟲胞漿與核均呈深藍色8染色過淺，胞漿藍色不易顯見，核淡紅5血片清潔度(10分)外觀（5分）光潔無油灰5稍有油污2油灰粘連2鏡下（5分）無沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有雜菌2瘧原蟲血檢考核標準（3）項目檢查內容使用標準扣分標準考核分值顯微鏡使用（25分）使用前（10分）顯微鏡干凈，有綢布遮蓋，接物鏡不與聚光器對接顯微鏡稍有灰（-2分），無綢布遮蓋（-4分），接物鏡與聚光器對接（-4分）鏡檢時（10分）打開光源，調節(jié)亮度，聚光器上升至最高位置，油鏡與聚光器對接，放入待檢血片，鏡臺上升直至油鏡與血膜接觸，然后鏡臺徐徐下降，出現視野用微調調節(jié)聚光器未上升至最高位置即放血片（-2分），鏡臺上升或下降過快（-3分），壓破玻片（-10分）使用后（5分）擦拭干凈油鏡，物鏡轉離聚光器，綢布遮蓋未擦拭油鏡（-1分），物鏡未轉離聚光器（-2分），未用綢布遮蓋（-2分）合計100分謝謝大家注：文本框可根據需求改變顏色、移動位置；文字可編輯POWERPOINT模板適用于簡約清新及相關類別演示1234點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本目錄點擊添加標題點擊添加標題點擊添加標題點擊添加標題點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本01020304添加標題點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本會議基調年會視頻：會議主題1、攜手超越，馭領未來2、你在我心里面

---用心創(chuàng)造新未來會議主體環(huán)節(jié)—年度總結：由公司各職能部門、高層做09年總結報告，傳遞10年度公司戰(zhàn)略發(fā)展規(guī)劃以及嘉許09年度優(yōu)秀員工—感謝晚宴：讓員工在享受晚宴的同時，感受公司對他們一年來付出的感謝；讓嘉賓感受耀光紡織的關注和企業(yè)文化—員工才藝秀：加強員工互動，展現員工風采血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(純)

50ml甲醇

(純)

50ml把吉氏粉置于研缽中，加少量甘油充分研磨,

然后邊加邊磨，直至50m