《2.2.1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)》講義案

學(xué)而優(yōu)·教有方PAGE試卷第=1頁，共=sectionpages33頁P(yáng)AGE12.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)目標(biāo)導(dǎo)航目標(biāo)導(dǎo)航課程標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)解讀動(dòng)物細(xì)胞工程包括細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合和干細(xì)胞的應(yīng)用等技術(shù)。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞的過程。概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體的過程，認(rèn)同單克隆抗體在臨床上有重要的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程和該技術(shù)的應(yīng)用前景。課前預(yù)習(xí)課前預(yù)習(xí)一.動(dòng)物細(xì)胞工程段：包括、和等。2.基礎(chǔ)：是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。二.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物體中取出相關(guān)的，將它分散成，然后在適宜的下，讓這些細(xì)胞的技術(shù)。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件①營養(yǎng)：將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按和嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基，通常需加入等天然成分。培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為。②、的環(huán)境：培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具應(yīng)進(jìn)行處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。需要定期更換，以便清除代謝物。③溫度、pH和滲透壓：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多是℃；多數(shù)細(xì)胞適宜pH為；也是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的重要環(huán)境參數(shù)。④氣體環(huán)境：95%＋5%。O2是所必需，CO2的主要作用是。3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動(dòng)物組織塊→用的方法或用等處理的方法，將組織分散成→制成→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)代培養(yǎng)。（1）．懸浮生長：細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。密度過大時(shí)，由于積累和培養(yǎng)液中等因素而分裂受阻。（2）．細(xì)胞貼壁：多數(shù)細(xì)胞貼附在上生長。（3）．接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止的現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。（4）．原代培養(yǎng)：指動(dòng)物組織經(jīng)處理后的。（5）．傳代培養(yǎng)：分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮生長的細(xì)胞直接用法收集；貼壁生長的細(xì)胞要先用等處理，再用法收集。三.干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用（1）．干細(xì)胞功能：在一定條件下，可以分化成。（2）．干細(xì)胞的存在：、和等多種組織和器官中。（3）．干細(xì)胞的種類判斷對錯(cuò)：1．多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中其培養(yǎng)液所需的適宜pH為6.8～7.0。 ()2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液，其目的是便于清除代謝物，防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成傷害。 ()3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞的全能性。 ()4．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)用胃蛋白酶處理。 ()5．培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的第一代(即第一次細(xì)胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)。 ()6．培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞。 ()一.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)二.1.組織單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)條件生長和增殖2.①種類所需量血清培養(yǎng)液②無菌無毒滅菌培養(yǎng)液③36.50.57.2-7.4滲透壓④空氣CO2細(xì)胞代謝維持培養(yǎng)液的pH2.機(jī)械胰蛋白酶、膠原蛋白酶單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液原傳（1）有害代謝物營養(yǎng)物質(zhì)缺乏（2）培養(yǎng)瓶的瓶壁（3）相互接觸分裂增殖（4）初次培養(yǎng)（5）離心胰蛋白酶離心3.（1）其他類型的細(xì)胞（2）早期胚胎骨髓臍帶血（3）①早期胚胎所有組織器官個(gè)體②造血干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞精原干細(xì)胞特定的細(xì)胞或組織完整個(gè)體③免疫排斥反應(yīng)判斷對錯(cuò)：×√××××知識講解知識講解知識點(diǎn)一動(dòng)物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞核移植等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。(1)相關(guān)組織：一般是指動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物組織，因?yàn)檫@些組織細(xì)胞比老齡動(dòng)物的組織細(xì)胞生命力旺盛，易于培養(yǎng)，同時(shí)增殖能力也更強(qiáng)。(2)適宜的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞、組織適合生存的環(huán)境不同，需要配制不同的培養(yǎng)基。3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件(1)營養(yǎng)條件：細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)含有細(xì)胞所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)。將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基。由于人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚，因此在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需要加入血清等一些天然成分。培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。(2)無菌、無毒的環(huán)境：在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的，即需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。培養(yǎng)液還需要定期更換，以便清除代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害。(3)溫度、pH和滲透壓：維持細(xì)胞生存必須有適宜的溫度。哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。此外，滲透壓也是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的一個(gè)重要環(huán)境參數(shù)。(4)氣體環(huán)境：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。知識點(diǎn)二動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程1．體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以分為兩大類：一類細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖；另一類則需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖，大多數(shù)細(xì)胞屬于這種類型，這類細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞貼壁。2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程(1)原理：細(xì)胞增殖(2)過程：3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中的相關(guān)概念(1)原代培養(yǎng)：動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。(2)接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制。(3)傳代培養(yǎng)：將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集：貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，然后再用離心法收集。之后，將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。知識點(diǎn)三干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用1．干細(xì)胞：動(dòng)物和人體內(nèi)保留的具有分裂和分化能力的細(xì)胞。干細(xì)胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中，包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。(1)胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，簡稱ES細(xì)胞)存在于早期胚胎中，具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能。(2)成體干細(xì)胞是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，包括骨髓中的造血干細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞等。造血干細(xì)胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應(yīng)用也最為成熟的一類成體干細(xì)胞。2．干細(xì)胞的主要用途(1)移植正常的造血干細(xì)胞可治療白血病及一些惡性腫瘤在放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病。(2)神經(jīng)干細(xì)胞在治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病(如帕金森病、阿爾茨海默病等)方面有重要的應(yīng)用價(jià)值。(3)科學(xué)家通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞，將它稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(簡稱iPS細(xì)胞)，并用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血?，F(xiàn)在iPS細(xì)胞在治療阿爾茨海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得了新進(jìn)展。因?yàn)檎T導(dǎo)過程無須破壞胚胎，而且iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，所以科學(xué)家普遍認(rèn)為iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞。課后拓展課后拓展拓展動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它用胰蛋白酶或膠原蛋白酶分散成單個(gè)細(xì)胞，再放在適宜的培養(yǎng)基中，讓細(xì)胞生長和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，所用的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基，還需要加入動(dòng)物血清、血漿等一些天然成分以提供一個(gè)類似生物體內(nèi)的環(huán)境。將處理后的細(xì)胞移入培養(yǎng)基中配成一定濃度的細(xì)胞懸浮液。所以，合成培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上看是液體培養(yǎng)基。懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到互相接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，出現(xiàn)接觸抑制。此時(shí)將出現(xiàn)接觸抑制的細(xì)胞重新使用胰蛋白酶處理，再配成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，將其稀釋分裝成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長，這一過程就叫傳代。從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。當(dāng)培養(yǎng)超過50代時(shí)，大多數(shù)的細(xì)胞已經(jīng)衰老死亡，但仍有部分細(xì)胞發(fā)生了遺傳物質(zhì)的改變出現(xiàn)了無限傳代的特性，即癌變。此時(shí)的細(xì)胞被稱為細(xì)胞系。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)相比：培養(yǎng)基不同：植物細(xì)胞培養(yǎng)（固體培養(yǎng)基），動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（液體培養(yǎng)基）。培養(yǎng)基的成分不同：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必須利用動(dòng)物血清，植物組織培養(yǎng)則不需要，而需要加入植物激素。產(chǎn)物不同：植物組織培養(yǎng)一般得到的是個(gè)體，而動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)得到的是細(xì)胞系（或者叫細(xì)胞群）。原理不同：植物組織培養(yǎng)的原理為植物細(xì)胞的全能性，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理為細(xì)胞增殖。過程不同：植物組織培養(yǎng)的過程為脫分化和再分化，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用干細(xì)胞是一種未充分分化的、不成熟的，是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞，醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞”。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。根據(jù)發(fā)育潛能分為全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞。干細(xì)胞研究受到科學(xué)家的廣泛關(guān)注，在細(xì)胞修復(fù)、發(fā)育生物學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域有著極為廣闊的應(yīng)用前景

。如：作為細(xì)胞治療與組織器官替代治療的種子細(xì)胞、探討胚胎發(fā)育的調(diào)控機(jī)制、作為疾病基因治療的載體、體外整合外源基因，研究基因功能、藥物篩選平臺的建立，藥理研究與新藥開發(fā)等。背誦筆記背誦筆記筆記一：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件筆記二：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程筆記三：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)的比較課后自測課后自測1．2001年2月，一只背上長著“人耳”的老鼠在北京展覽館與觀眾見面，這只老鼠其實(shí)是一只切去脾臟的老鼠，它背上的“人耳”是一種高分子化學(xué)材料聚羥基乙酸作為模型支架用物理方法增植成的，增植的“人耳鼠”的生物工程技術(shù)是（

）A．細(xì)胞和組織培養(yǎng) B．細(xì)胞融合 C．動(dòng)物胚胎移植 D．細(xì)胞核移植2．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．用胰蛋白酶處理可使動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)C．貼附性細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通入5%的CO2可促進(jìn)細(xì)胞呼吸3．腫瘤中具有自我更新能力并能產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞稱為腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞對腫瘤的存活、增殖、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有著重要作用，為我們重新認(rèn)識腫瘤的起源和本質(zhì)，以及臨床腫瘤治療提供了新的方向和視覺角度。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．腫瘤干細(xì)胞增殖過程中既有同源染色體分離也有姐妹染色單體分離B．腫瘤干細(xì)胞產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的過程中存在著基因的選擇性表達(dá)C．腫瘤干細(xì)胞自我更新進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)是邊解旋邊復(fù)制D．診治腫瘤時(shí)可考慮如何識別并消滅腫瘤干細(xì)胞4．某興趣小組在進(jìn)行人體皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)過程中，將培養(yǎng)瓶瓶口密封后置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。下列敘述正確的是（

）A．瓶口密封可有效的防止污染 B．瓶口密封可有效的防止接觸抑制C．瓶口密封會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基呈弱酸性 D．瓶口密封會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)的原代細(xì)胞生長過快5．如圖為實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程，下列敘述正確的是（

）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的全能性B．乙過程對皮膚組織可用胃蛋白酶消化C．丙過程為原代培養(yǎng)，遺傳物質(zhì)一定不變D．丁過程中某些細(xì)胞可能會(huì)無限增殖6．實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚組織皮膚細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)1細(xì)胞培養(yǎng)2A．甲過程需要在無菌條件下進(jìn)行B．乙過程需要將獲得的皮膚細(xì)胞制成細(xì)胞懸液C．丙過程是原代培養(yǎng)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象D．丁過程是傳代培養(yǎng)，細(xì)胞增殖時(shí)一般不會(huì)貼附在瓶壁上7．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是（）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B．動(dòng)物細(xì)胞融合C．單克隆抗體 D．胚胎核移植8．絕大部分用以生產(chǎn)生物醫(yī)藥產(chǎn)品的哺乳動(dòng)物細(xì)胞均為貼壁生長細(xì)胞，這給大規(guī)模生物醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)帶來很大困難。微載體的出現(xiàn)，從根本上改變了傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)工藝以懸浮在培養(yǎng)液中的微珠作為細(xì)胞貼附的載體，可以在輕度攪拌下進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．輕度攪拌有利于細(xì)胞的氧氣供應(yīng)B．接觸抑制現(xiàn)象為傳統(tǒng)工藝中產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)帶來困難C．微珠為細(xì)胞的貼壁生長提供了足夠的表面積D．傳代培養(yǎng)時(shí)只需將附著有細(xì)胞的微珠分到更多的瓶中即可9．美國和日本的兩個(gè)研究小組分別宣布，其研究人員成功地將人體皮膚細(xì)胞改造成了幾乎可以和胚胎干細(xì)胞相媲美的多功能干細(xì)胞—“iPS細(xì)胞”，人類"iPS細(xì)胞"可以形成神經(jīng)元等人體多種組織細(xì)胞。以下有關(guān)“iPS細(xì)胞”的說法正確的是（

）A．iPS細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的過程體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性B．iPS細(xì)胞含有人體生長發(fā)育的完整基因組C．人體皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞的過程中，細(xì)胞分化程度逐漸增加D．iPS細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞過程中，染色體數(shù)量發(fā)生了變化10．如圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。在此過程中發(fā)生了（

）A．僅細(xì)胞分裂 B．僅有基因選擇性表達(dá)C．僅細(xì)胞分化 D．細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化11．測定藥物對體外培養(yǎng)的某種動(dòng)物肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）細(xì)胞的毒性。下列敘述正確的是（

）A．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理肝組織塊B．本實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，以檢測藥物對甲、乙的毒性大小C．為了保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的無毒環(huán)境，需大量添加各種抗生素D．恒溫培養(yǎng)箱中的CO2濃度維持在左右，以促進(jìn)細(xì)胞呼吸12．胚胎干細(xì)胞研究在醫(yī)學(xué)上有重大應(yīng)用價(jià)值。通過移植胚胎干細(xì)胞期望可以治療的疾病是①糖尿病

②高血壓

③唐氏綜合征（21三體綜合征）④老年癡呆癥

⑤白化病

⑥肝衰竭A．①②⑤ B．②③⑥ C．①④⑥ D．③④⑤13．某生物興趣小組在體外培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞。下列說法正確的是（

）A．將肝組織剪碎后用胃蛋白酶處理可得到肝細(xì)胞懸液B．在持續(xù)的培養(yǎng)過程中，肝細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象C．在培養(yǎng)過程中通常要通入5%的以刺激細(xì)胞呼吸D．該試驗(yàn)中用到的培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒14．下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的敘述中，不正確的是（

）A．用胰蛋白酶處理可使組織分散成單個(gè)細(xì)胞B．原代培養(yǎng)指從供體獲取細(xì)胞的初次培養(yǎng)C．原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會(huì)出現(xiàn)生長停滯D．動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)的過程中，大部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)會(huì)發(fā)生改變15．如圖為腎臟上皮細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖，已知腎臟上皮細(xì)胞屬于需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖的細(xì)胞，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．甲→乙過程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理B．丙過程指細(xì)胞在添加血清的合成培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的氣體環(huán)境是95%O2和5%CO2D．丙過程會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象16．如果誘導(dǎo)iPS細(xì)胞定向分化為生殖細(xì)胞的技術(shù)發(fā)展成熟，該技術(shù)可能會(huì)有哪些應(yīng)用？。17．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用處理分散成→制成→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。18．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵操作：和。19．一般來說，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足的條件有：，，以及，由于，因此，在使用時(shí)，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。20．營養(yǎng)物質(zhì)主要包括：、、、等。未知營養(yǎng)條件：使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入等一些天然成分。其作用為：。動(dòng)物細(xì)胞利用的營養(yǎng)物質(zhì)包括蔗糖和淀粉嗎？。

2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)目標(biāo)導(dǎo)航目標(biāo)導(dǎo)航課程標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)解讀動(dòng)物細(xì)胞工程包括細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合和干細(xì)胞的應(yīng)用等技術(shù)。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞的過程。概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過程。簡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體的過程，認(rèn)同單克隆抗體在臨床上有重要的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過程和該技術(shù)的應(yīng)用前景。課前預(yù)習(xí)課前預(yù)習(xí)一.動(dòng)物細(xì)胞工程段：包括、和等。2.基礎(chǔ)：是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。二.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物體中取出相關(guān)的，將它分散成，然后在適宜的下，讓這些細(xì)胞的技術(shù)。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件①營養(yǎng)：將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按和嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基，通常需加入等天然成分。培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為。②、的環(huán)境：培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具應(yīng)進(jìn)行處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。需要定期更換，以便清除代謝物。③溫度、pH和滲透壓：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多是℃；多數(shù)細(xì)胞適宜pH為；也是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的重要環(huán)境參數(shù)。④氣體環(huán)境：95%＋5%。O2是所必需，CO2的主要作用是。3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動(dòng)物組織塊→用的方法或用等處理的方法，將組織分散成→制成→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)代培養(yǎng)。（1）．懸浮生長：細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖。密度過大時(shí)，由于積累和培養(yǎng)液中等因素而分裂受阻。（2）．細(xì)胞貼壁：多數(shù)細(xì)胞貼附在上生長。（3）．接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止的現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。（4）．原代培養(yǎng)：指動(dòng)物組織經(jīng)處理后的。（5）．傳代培養(yǎng)：分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮生長的細(xì)胞直接用法收集；貼壁生長的細(xì)胞要先用等處理，再用法收集。三.干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用（1）．干細(xì)胞功能：在一定條件下，可以分化成。（2）．干細(xì)胞的存在：、和等多種組織和器官中。（3）．干細(xì)胞的種類判斷對錯(cuò)：1．多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中其培養(yǎng)液所需的適宜pH為6.8～7.0。 ()2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液，其目的是便于清除代謝物，防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成傷害。 ()3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞的全能性。 ()4．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)用胃蛋白酶處理。 ()5．培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的第一代(即第一次細(xì)胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)。 ()6．培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞。 ()一.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)二.1.組織單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)條件生長和增殖2.①種類所需量血清培養(yǎng)液②無菌無毒滅菌培養(yǎng)液③36.50.57.2-7.4滲透壓④空氣CO2細(xì)胞代謝維持培養(yǎng)液的pH2.機(jī)械胰蛋白酶、膠原蛋白酶單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液原傳（1）有害代謝物營養(yǎng)物質(zhì)缺乏（2）培養(yǎng)瓶的瓶壁（3）相互接觸分裂增殖（4）初次培養(yǎng)（5）離心胰蛋白酶離心3.（1）其他類型的細(xì)胞（2）早期胚胎骨髓臍帶血（3）①早期胚胎所有組織器官個(gè)體②造血干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞精原干細(xì)胞特定的細(xì)胞或組織完整個(gè)體③免疫排斥反應(yīng)判斷對錯(cuò)：×√××××知識講解知識講解知識點(diǎn)一動(dòng)物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞核移植等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。(1)相關(guān)組織：一般是指動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物組織，因?yàn)檫@些組織細(xì)胞比老齡動(dòng)物的組織細(xì)胞生命力旺盛，易于培養(yǎng)，同時(shí)增殖能力也更強(qiáng)。(2)適宜的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞、組織適合生存的環(huán)境不同，需要配制不同的培養(yǎng)基。3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件(1)營養(yǎng)條件：細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)含有細(xì)胞所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)。將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基。由于人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚，因此在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需要加入血清等一些天然成分。培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液。(2)無菌、無毒的環(huán)境：在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保證環(huán)境是無菌、無毒的，即需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。培養(yǎng)液還需要定期更換，以便清除代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害。(3)溫度、pH和滲透壓：維持細(xì)胞生存必須有適宜的溫度。哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。此外，滲透壓也是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的一個(gè)重要環(huán)境參數(shù)。(4)氣體環(huán)境：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，并將它們置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。知識點(diǎn)二動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程1．體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以分為兩大類：一類細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖；另一類則需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖，大多數(shù)細(xì)胞屬于這種類型，這類細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞貼壁。2．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程(1)原理：細(xì)胞增殖(2)過程：3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中的相關(guān)概念(1)原代培養(yǎng)：動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。(2)接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制。(3)傳代培養(yǎng)：將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集：貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，然后再用離心法收集。之后，將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。知識點(diǎn)三干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用1．干細(xì)胞：動(dòng)物和人體內(nèi)保留的具有分裂和分化能力的細(xì)胞。干細(xì)胞存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中，包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。(1)胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，簡稱ES細(xì)胞)存在于早期胚胎中，具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能。(2)成體干細(xì)胞是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，包括骨髓中的造血干細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞等。造血干細(xì)胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應(yīng)用也最為成熟的一類成體干細(xì)胞。2．干細(xì)胞的主要用途(1)移植正常的造血干細(xì)胞可治療白血病及一些惡性腫瘤在放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病。(2)神經(jīng)干細(xì)胞在治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病(如帕金森病、阿爾茨海默病等)方面有重要的應(yīng)用價(jià)值。(3)科學(xué)家通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞，將它稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(簡稱iPS細(xì)胞)，并用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血。現(xiàn)在iPS細(xì)胞在治療阿爾茨海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得了新進(jìn)展。因?yàn)檎T導(dǎo)過程無須破壞胚胎，而且iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，所以科學(xué)家普遍認(rèn)為iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞。課后拓展課后拓展拓展動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它用胰蛋白酶或膠原蛋白酶分散成單個(gè)細(xì)胞，再放在適宜的培養(yǎng)基中，讓細(xì)胞生長和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，所用的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基，還需要加入動(dòng)物血清、血漿等一些天然成分以提供一個(gè)類似生物體內(nèi)的環(huán)境。將處理后的細(xì)胞移入培養(yǎng)基中配成一定濃度的細(xì)胞懸浮液。所以，合成培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上看是液體培養(yǎng)基。懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到互相接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，出現(xiàn)接觸抑制。此時(shí)將出現(xiàn)接觸抑制的細(xì)胞重新使用胰蛋白酶處理，再配成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，將其稀釋分裝成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長，這一過程就叫傳代。從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。當(dāng)培養(yǎng)超過50代時(shí)，大多數(shù)的細(xì)胞已經(jīng)衰老死亡，但仍有部分細(xì)胞發(fā)生了遺傳物質(zhì)的改變出現(xiàn)了無限傳代的特性，即癌變。此時(shí)的細(xì)胞被稱為細(xì)胞系。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)相比：培養(yǎng)基不同：植物細(xì)胞培養(yǎng)（固體培養(yǎng)基），動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（液體培養(yǎng)基）。培養(yǎng)基的成分不同：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必須利用動(dòng)物血清，植物組織培養(yǎng)則不需要，而需要加入植物激素。產(chǎn)物不同：植物組織培養(yǎng)一般得到的是個(gè)體，而動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)得到的是細(xì)胞系（或者叫細(xì)胞群）。原理不同：植物組織培養(yǎng)的原理為植物細(xì)胞的全能性，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理為細(xì)胞增殖。過程不同：植物組織培養(yǎng)的過程為脫分化和再分化，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用干細(xì)胞是一種未充分分化的、不成熟的，是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞，醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞”。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。根據(jù)發(fā)育潛能分為全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞。背誦筆記干細(xì)胞研究受到科學(xué)家的廣泛關(guān)注，在細(xì)胞修復(fù)、發(fā)育生物學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域有著極為廣闊的應(yīng)用前景

。如：作為細(xì)胞治療與組織器官替代治療的種子細(xì)胞、探討胚胎發(fā)育的調(diào)控機(jī)制、作為疾病基因治療的載體、體外整合外源基因，研究基因功能、藥物篩選平臺的建立，藥理研究與新藥開發(fā)等。背誦筆記筆記一：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件筆記二：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程筆記三：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)的比較課后自測課后自測1．2001年2月，一只背上長著“人耳”的老鼠在北京展覽館與觀眾見面，這只老鼠其實(shí)是一只切去脾臟的老鼠，它背上的“人耳”是一種高分子化學(xué)材料聚羥基乙酸作為模型支架用物理方法增植成的，增植的“人耳鼠”的生物工程技術(shù)是（

）A．細(xì)胞和組織培養(yǎng) B．細(xì)胞融合 C．動(dòng)物胚胎移植 D．細(xì)胞核移植【答案】A【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌②添加一定量的抗生素③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。【詳解】試題分析：人耳鼠的做法是搭一個(gè)人耳形狀的支架，然后讓細(xì)胞生長在這個(gè)支架上，最終覆蓋滿整個(gè)支架，形成一個(gè)“人耳”，再把這個(gè)支架整體移到小鼠后背上，用切去脾臟的裸鼠，就是防止免疫排斥反應(yīng)。所以，這個(gè)過程不涉及細(xì)胞融合、胚胎移植和核移植技術(shù)，只涉及動(dòng)物細(xì)胞這組織培養(yǎng)技術(shù)，A正確。故選A。2．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．用胰蛋白酶處理可使動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)C．貼附性細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通入5%的CO2可促進(jìn)細(xì)胞呼吸【答案】D【分析】一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：1、定義：就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。2、重要概念：①細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。產(chǎn)生原因：培養(yǎng)貼附性細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞要能夠貼附于底物上才能生長增殖。培養(yǎng)要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)表面光滑、無毒，易于貼附。②細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。2、動(dòng)物培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH）。【詳解】A、用胰蛋白酶處理可使動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞，從而制成細(xì)胞懸液，A正確；B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是制備單克隆抗體、動(dòng)物細(xì)胞核移植、胚胎工程等動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)，B正確；C、貼附性細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制現(xiàn)象，因此培養(yǎng)貼附性細(xì)胞時(shí)要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附，C正確；D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%CO2以維持培養(yǎng)液的pH，D錯(cuò)誤。故選D。3．腫瘤中具有自我更新能力并能產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞稱為腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞對腫瘤的存活、增殖、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有著重要作用，為我們重新認(rèn)識腫瘤的起源和本質(zhì)，以及臨床腫瘤治療提供了新的方向和視覺角度。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．腫瘤干細(xì)胞增殖過程中既有同源染色體分離也有姐妹染色單體分離B．腫瘤干細(xì)胞產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的過程中存在著基因的選擇性表達(dá)C．腫瘤干細(xì)胞自我更新進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)是邊解旋邊復(fù)制D．診治腫瘤時(shí)可考慮如何識別并消滅腫瘤干細(xì)胞【答案】A【分析】DNA復(fù)制是指DNA雙鏈在細(xì)胞分裂以前進(jìn)行的復(fù)制過程，從一個(gè)原始DNA分子產(chǎn)生兩個(gè)相同DNA分子的生物學(xué)過程。DNA復(fù)制是通過名為半保留復(fù)制的機(jī)制來得以順利完成的。【詳解】A、腫瘤干細(xì)胞增殖過程為有絲分裂，沒有同源染色體分離，A錯(cuò)誤；B、腫瘤干細(xì)胞產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的過程中存在著基因的選擇性表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能發(fā)生改變，B正確；C、腫瘤干細(xì)胞自我更新進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)是邊解旋邊復(fù)制，且為半保留復(fù)制，C正確；D、診治腫瘤時(shí)可考慮如何識別并消滅腫瘤干細(xì)胞，從腫瘤的起源和本質(zhì)入手，D正確。故選A。4．某興趣小組在進(jìn)行人體皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)過程中，將培養(yǎng)瓶瓶口密封后置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。下列敘述正確的是（

）A．瓶口密封可有效的防止污染 B．瓶口密封可有效的防止接觸抑制C．瓶口密封會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基呈弱酸性 D．瓶口密封會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)的原代細(xì)胞生長過快【答案】C【分析】人體皮膚細(xì)胞培養(yǎng)屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，需要在無菌無毒和培養(yǎng)液提供類似內(nèi)環(huán)境的條件下進(jìn)行?！驹斀狻緼、為防止細(xì)菌污染，可往培養(yǎng)液中加入一定的抗生素，瓶口密封不可有效的防止污染，A錯(cuò)誤；B、瓶口密封不會(huì)影響細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象，B錯(cuò)誤；CD、培養(yǎng)瓶瓶口密封會(huì)使培養(yǎng)液中缺氧，皮膚細(xì)胞無氧呼吸產(chǎn)生乳酸增多，使培養(yǎng)基呈弱酸性，使細(xì)胞生存環(huán)境惡劣且能量供應(yīng)不足等，可能使細(xì)胞生長緩慢，C正確，D錯(cuò)誤。故選C。5．如圖為實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程，下列敘述正確的是（

）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞的全能性B．乙過程對皮膚組織可用胃蛋白酶消化C．丙過程為原代培養(yǎng)，遺傳物質(zhì)一定不變D．丁過程中某些細(xì)胞可能會(huì)無限增殖【答案】D【分析】分析題圖：圖示表示小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)（非克隆培養(yǎng)）的基本過程，甲表示從實(shí)驗(yàn)小鼠獲取皮膚組織，該過程需要對小鼠進(jìn)行消毒；乙表示用胰蛋白酶將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞；丙表示原代培養(yǎng)過程；丁表示傳代培養(yǎng)?！驹斀狻緼、全能性是指已分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)沒有體現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞的全能性，A錯(cuò)誤；B、乙過程對皮膚組織可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，B錯(cuò)誤；C、丙過程屬于原代培養(yǎng)，此過程的細(xì)胞大部分能保持正常的二倍體核型，有些細(xì)胞的遺傳物質(zhì)也可能發(fā)生改變，C錯(cuò)誤；D、丁過程屬于傳代培養(yǎng)，此過程少數(shù)細(xì)胞會(huì)發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展，可能會(huì)無限增殖，D正確。故選D。6．實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚組織皮膚細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)1細(xì)胞培養(yǎng)2A．甲過程需要在無菌條件下進(jìn)行B．乙過程需要將獲得的皮膚細(xì)胞制成細(xì)胞懸液C．丙過程是原代培養(yǎng)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象D．丁過程是傳代培養(yǎng)，細(xì)胞增殖時(shí)一般不會(huì)貼附在瓶壁上【答案】D【分析】據(jù)圖分析，甲表示取實(shí)驗(yàn)小鼠的組織細(xì)胞，乙表示用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)皮膚細(xì)胞，丙表示原代培養(yǎng)，丁表示傳代培養(yǎng)?！驹斀狻緼、離體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌、無毒的環(huán)境，需要對實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒處理，A正確；B、乙表示用胰蛋白酶處理皮膚組織，使其分散成單個(gè)皮膚細(xì)胞，B正確；C、丙表示原代培養(yǎng)，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，C正確；D、丁是傳代培養(yǎng)過程，該過程少部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能發(fā)生了變化，大部分能保持二倍體核型，會(huì)出現(xiàn)貼壁生長，D錯(cuò)誤。故選D。7．動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是（）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B．動(dòng)物細(xì)胞融合C．單克隆抗體 D．胚胎核移植【答案】A【分析】細(xì)胞工程：以細(xì)胞為對象，應(yīng)用生命科學(xué)理論，借助工程學(xué)原理與技術(shù)，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門綜合性科學(xué)技術(shù)?！驹斀狻縿?dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體、動(dòng)物細(xì)胞核移植。其中，最基礎(chǔ)的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。故選A。8．絕大部分用以生產(chǎn)生物醫(yī)藥產(chǎn)品的哺乳動(dòng)物細(xì)胞均為貼壁生長細(xì)胞，這給大規(guī)模生物醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)帶來很大困難。微載體的出現(xiàn)，從根本上改變了傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)工藝以懸浮在培養(yǎng)液中的微珠作為細(xì)胞貼附的載體，可以在輕度攪拌下進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．輕度攪拌有利于細(xì)胞的氧氣供應(yīng)B．接觸抑制現(xiàn)象為傳統(tǒng)工藝中產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)帶來困難C．微珠為細(xì)胞的貼壁生長提供了足夠的表面積D．傳代培養(yǎng)時(shí)只需將附著有細(xì)胞的微珠分到更多的瓶中即可【答案】D【分析】1、原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：①原代培養(yǎng)：指沒有分瓶之前的細(xì)胞培養(yǎng)。②傳代培養(yǎng)指細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)一段時(shí)間后，分瓶進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。2、細(xì)胞貼壁：進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般情況下，細(xì)胞懸液中分散的細(xì)胞會(huì)很快貼附在瓶壁上，即細(xì)胞貼壁。接觸抑制：貼壁細(xì)胞不斷分裂生長到相互接觸時(shí)，會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象即為接觸抑制。因?yàn)橛薪佑|抑制現(xiàn)象，所以貼壁生長的細(xì)胞一般為單層細(xì)胞。癌變的細(xì)胞沒有接觸抑制現(xiàn)象，可無限增殖?！驹斀狻緼、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足營養(yǎng)條件、無菌無毒條件、適宜的溫度、PH和滲透壓、適宜的氣體環(huán)境，攪拌有利于氧氣供應(yīng)，A正確；B、接觸抑制即當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖，因此為產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)帶來困難，B正確；C、以懸浮在培養(yǎng)液中的微珠作為細(xì)胞貼附的載體，增加了細(xì)胞貼壁的表面積，C正確；D、傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞直接利用離心法收集，貼壁細(xì)胞用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，再用離心法收集，之后，將收集的細(xì)胞制成懸浮液，分瓶培養(yǎng)，D錯(cuò)誤。故選D。9．美國和日本的兩個(gè)研究小組分別宣布，其研究人員成功地將人體皮膚細(xì)胞改造成了幾乎可以和胚胎干細(xì)胞相媲美的多功能干細(xì)胞—“iPS細(xì)胞”，人類"iPS細(xì)胞"可以形成神經(jīng)元等人體多種組織細(xì)胞。以下有關(guān)“iPS細(xì)胞”的說法正確的是（

）A．iPS細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的過程體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性B．iPS細(xì)胞含有人體生長發(fā)育的完整基因組C．人體皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞的過程中，細(xì)胞分化程度逐漸增加D．iPS細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞過程中，染色體數(shù)量發(fā)生了變化【答案】B【分析】胚胎干細(xì)胞的特點(diǎn)是具有胚胎細(xì)胞的特性，體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞。另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細(xì)胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可以進(jìn)行某些遺傳改造。【詳解】A、“iPS細(xì)胞”分化為神經(jīng)細(xì)胞的過程沒有體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，因?yàn)樵撨^程中沒有形成完整個(gè)體，也沒有體現(xiàn)出分化成各種細(xì)胞的能力，A錯(cuò)誤；B、“iPS細(xì)胞”是人體細(xì)胞改造形成的，其所含基因與人體體細(xì)胞相同，即含有人體生長發(fā)育的完整基因組，B正確；C、人體皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞的過程中，細(xì)胞分化程度逐漸下降，C錯(cuò)誤；D、iPS細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞過程中，只是發(fā)生了基因選擇性表達(dá)，遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變，其中的染色體數(shù)量也沒有變化，D錯(cuò)誤。故選B。10．如圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。在此過程中發(fā)生了（

）A．僅細(xì)胞分裂 B．僅有基因選擇性表達(dá)C．僅細(xì)胞分化 D．細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化【答案】A【分析】1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2、培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH值）?！驹斀狻吭隗w外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需要提供與體內(nèi)細(xì)胞相似的環(huán)境條件，如充足的營養(yǎng)物質(zhì)，適宜的溫度和pH、穩(wěn)定的滲透壓等，以保證培養(yǎng)的細(xì)胞能正常生長、增殖。不同來源的細(xì)胞還需要添加不同的生長因子（如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子等）。生長因子對促進(jìn)細(xì)胞生長、維持細(xì)胞形態(tài)及功能具有十分重要的作用。細(xì)胞分化是細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。根據(jù)以上描述（來源于教材），該過程中沒有出現(xiàn)分化，僅有分裂。故選A。11．測定藥物對體外培養(yǎng)的某種動(dòng)物肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）細(xì)胞的毒性。下列敘述正確的是（

）A．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理肝組織塊B．本實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，以檢測藥物對甲、乙的毒性大小C．為了保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的無毒環(huán)境，需大量添加各種抗生素D．恒溫培養(yǎng)箱中的CO2濃度維持在左右，以促進(jìn)細(xì)胞呼吸【答案】B【分析】1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。2、培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH值）?！驹斀狻緼、制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胰蛋白酶處理肝組織塊，A錯(cuò)誤；B、測定藥物對體外培養(yǎng)的某種動(dòng)物肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）細(xì)胞的毒性，應(yīng)設(shè)置加藥物溶劑（不含藥物）作為對照，B正確；C、抗生素是用來殺菌的，不是殺病毒的，C錯(cuò)誤；D、恒溫培養(yǎng)箱中的CO2濃度維持在5%左右，以維持培養(yǎng)液的pH，D錯(cuò)誤。故選B。12．胚胎干細(xì)胞研究在醫(yī)學(xué)上有重大應(yīng)用價(jià)值。通過移植胚胎干細(xì)胞期望可以治療的疾病是①糖尿病

②高血壓

③唐氏綜合征（21三體綜合征）④老年癡呆癥

⑤白化病

⑥肝衰竭A．①②⑤ B．②③⑥ C．①④⑥ D．③④⑤【答案】C【詳解】胚胎干細(xì)胞可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞，移植胚胎干細(xì)胞可以使壞死或退化的部位得以修復(fù)和恢復(fù)正常功能，因此，通過移植胚胎干細(xì)胞期望可以治療的疾病是①糖尿病、④老年癡呆癥、⑥肝衰竭，這些疾病都是由于相關(guān)細(xì)胞壞死或退化引起的；而②高血壓是不良生活習(xí)慣或遺傳引起的，③唐氏綜合征（21三體綜合征）是染色體變異引起的，⑤白化病是遺傳引起的，C正確。故選C。13．某生物興趣小組在體外培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞。下列說法正確的是（

）A．將肝組織剪碎后用胃蛋白酶處理可得到肝細(xì)胞懸液B．在持續(xù)的培養(yǎng)過程中，肝細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象C．在培養(yǎng)過程中通常要通入5%的以刺激細(xì)胞呼吸D．該試驗(yàn)中用到的培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒【答案】B【分析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)?！驹斀狻緼、處理肝組織塊獲得到肝細(xì)胞懸液，應(yīng)該用胰蛋白酶或膠原蛋白酶，不能用胃蛋白酶，A錯(cuò)誤；B、正常細(xì)胞不具有無限增殖能力，因此在持續(xù)的培養(yǎng)過程中，肝細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象，B