2.2.2動(dòng)物細(xì)胞工程（動(dòng)物細(xì)胞融合單抗）高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第二章細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程（動(dòng)物細(xì)胞融合+單抗）P48原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性優(yōu)點(diǎn)：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙形成單核細(xì)胞≠多核P48P49原理特點(diǎn)第一次篩選方法第二次篩選方法P49傳統(tǒng)抗體：P50：①②③應(yīng)用①應(yīng)用②應(yīng)用③思1.下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解,請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來:

議2.抗PD–L1單克隆抗體能與癌細(xì)胞膜表面的PD–L1特異性結(jié)合，因而具有治療癌癥的作用。下圖是制備抗PD–L1單克隆抗體示意圖，分析：（1）①多孔玻璃板中的細(xì)胞是否是B細(xì)胞和鼠瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞？（2）②過程用到的方法？目的是？圖中細(xì)胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體？能在該培養(yǎng)基上大量增殖的細(xì)胞產(chǎn)生的抗體（一定/不一定）能抗PD–L1。（3）圖中③獲得的雜交瘤細(xì)胞還需要經(jīng)過④克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，原因是？

（4）圖中細(xì)胞集落__________可用于擴(kuò)大化培養(yǎng)生產(chǎn)抗PD–L1單克隆抗體。3.【選擇培養(yǎng)基的篩選機(jī)理】細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,D途徑能被氨基嘌呤阻斷,小鼠B細(xì)胞中有這兩種DNA合成途徑,但不分裂增殖。骨髓瘤細(xì)胞盡管沒有S途徑但能不斷分裂增殖【說明骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖存在______途徑】。將這兩種細(xì)胞混合加PEG促進(jìn)細(xì)胞融合.篩選時(shí)，向培養(yǎng)液中添加____________________，則被淘汰的細(xì)胞有未融合的親本細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞，原因是B細(xì)胞___________，骨髓瘤細(xì)胞________________。雜交瘤細(xì)胞由于可以進(jìn)行_______________途徑。自由展

生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，Why不直接培養(yǎng)B細(xì)胞？2.抗PD–L1單克隆抗體能與癌細(xì)胞膜表面的PD–L1特異性結(jié)合，因而具有治療癌癥的作用。下圖是制備抗PD–L1單克隆抗體的示意圖，分析：展1（1）①多孔玻璃板中的細(xì)胞是否是B細(xì)胞和鼠瘤細(xì)胞的融合細(xì)胞？

不一定B骨B-B骨-骨B-骨共5種（2）②過程用到的方法？選擇培養(yǎng)基

目的是？篩選出雜交瘤細(xì)胞圖中細(xì)胞集落a~d是否都是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體？是

能在該培養(yǎng)基上大量增殖的細(xì)胞產(chǎn)生的抗體（不一定）能抗PD–L1。（3）圖中③獲得的雜交瘤細(xì)胞還需要經(jīng)過④克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，原因是？

和骨髓瘤細(xì)胞融合的B細(xì)胞有多種，獲得的雜交瘤不一定能產(chǎn)生所需抗體。

（4）圖中細(xì)胞集落_a可用于擴(kuò)大化培養(yǎng)生產(chǎn)抗PD–L1單克隆抗體。3.【選擇培養(yǎng)基的篩選機(jī)理】細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,其D途徑能被氨基嘌呤阻斷,小鼠的B細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑,但一般不分裂增殖。骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑但能不斷分裂增殖【說明骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖存在

D途徑】。

將這兩種細(xì)胞混合加PEG促進(jìn)細(xì)胞融合.進(jìn)行篩選時(shí)，向混合培養(yǎng)液中添加氨基嘌呤，則被淘汰的細(xì)胞有未融合的親本細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞，原因是B細(xì)胞不能增殖，骨髓瘤細(xì)胞D途徑被氨基嘌呤阻斷。雜交瘤細(xì)胞由于可以進(jìn)行S途徑。展2一、單克隆抗體制備：技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)——原理：2個(gè)評(píng)12.（1）以HPV衣殼蛋白為抗原制備單克隆抗體，應(yīng)向小鼠體內(nèi)注射HPV衣殼蛋白

①注射抗原的目的：獲得產(chǎn)生特定抗體的B細(xì)胞

②反復(fù)注射：獲得大量B細(xì)胞。

若只考慮兩兩融合,融合的細(xì)胞類型有(a/aa/ab/bb/b).體系中出現(xiàn)多種細(xì)胞原因是:①融合是隨機(jī)的②融合率達(dá)不到100%.

評(píng)2【?？键c(diǎn)2】抗體檢測：取上清液檢測。技術(shù)：抗原-抗體雜交

原理：抗原、抗體特異性結(jié)合【?？键c(diǎn)3】（1）雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗體。（2）單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)：①能準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異②與特定抗原特異性結(jié)合

③可以大量制備（3）傳統(tǒng)抗體缺點(diǎn)：①產(chǎn)量低

②純度低

③特異性差【考點(diǎn)4】單克隆抗體用途:①作為診斷試劑（最廣泛的用途）②治療疾病

③運(yùn)載藥物.【常考點(diǎn)1】克隆化培養(yǎng)：（5）②目的是獲得由單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。常用稀釋法，即稀釋到3～l0個(gè)細(xì)胞/mL,每孔加入細(xì)胞懸液0.1mL？目的：使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞,達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。

評(píng)31.抗體作用特異性識(shí)別癌細(xì)胞。

藥物作用促使靶細(xì)胞凋亡【藥物對(duì)靶細(xì)胞沒有選擇性】2.ADC治療疾病，副作用更小原因單克隆抗體把藥定向帶到癌細(xì)胞所在位置,在原位殺死癌細(xì)胞。利用尿液診斷早孕的機(jī)理是孕婦尿液中的人絨毛膜促性腺激素（HCG）與試紙上的抗HCG的單克隆抗體特異性結(jié)合胞吞溶酶體裂解細(xì)胞凋亡1.雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)是既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體。2.單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)①能準(zhǔn)確識(shí)別抗原的細(xì)微差異

②與特定抗原特異性結(jié)合

③可以大量制備3.在選擇性培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長。4.單克隆抗體第一次篩選的方法是選擇性培養(yǎng)基。目的：篩選出雜交瘤細(xì)胞。5.第二次篩選的方法：克隆化培養(yǎng)、抗體檢測。目的;篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞6.單克隆抗體應(yīng)用的技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合

原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖7.若要使能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞大量增殖，可采用的方法有將獲得的細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。8.單克隆抗體擴(kuò)大培養(yǎng)在體外從培養(yǎng)液中提取和在體內(nèi)從腹水中提取。9.單克隆抗體的用途:①作為診斷試劑

②治療疾病

③運(yùn)載藥物.10.克隆化培養(yǎng)的目的是獲得由單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。11.制備H7N9病毒單克隆抗體的過程,B細(xì)胞取自感染過H7N9動(dòng)物的脾臟。12.動(dòng)物細(xì)胞融合原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性

優(yōu)點(diǎn):克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。13.與植物相比特有的誘導(dǎo)融合的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒。

化學(xué)試劑是：