膿汁和糞便標本中病原菌的檢測

關(guān)于膿汁和糞便標本中病原菌的檢測空氣細菌檢查結(jié)果分析

細菌菌落直徑1～3mm，有光滑型、粗糙型、粘液型。霉菌菌落比較大，呈棉絮狀、絨毛狀。計數(shù)菌落形成單位（CFU）,報告結(jié)果。37℃培養(yǎng)24小時培養(yǎng)72小時培養(yǎng)48小時第2頁,共42頁，星期六，2024年，5月第3頁,共42頁，星期六，2024年，5月第4頁,共42頁，星期六，2024年，5月第5頁,共42頁，星期六，2024年，5月132

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4手指皮膚的細菌學(xué)檢查甲和乙、丙和丁共用1個平板上:甲、丙→常規(guī)洗手下:乙、丁→標準洗手甲（丙）乙（?。┍〉?格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。

第6頁,共42頁，星期六，2024年，5月手指皮膚細菌檢查結(jié)果分析

比較洗手前后細菌的種類。洗前細菌種類多。洗后細菌種類少。洗手能洗掉大多數(shù)暫住菌。比較常規(guī)和標準洗手的細菌數(shù)量。常規(guī)（簡單）洗手，平板上細菌數(shù)量少。標準洗手，平板上細菌數(shù)量多。常住菌數(shù)量大，牢固附著在皮膚上，常洗不掉，可洗松動，經(jīng)摩擦接種、脫落到培養(yǎng)基上，顯示細菌更多？外科手術(shù)人員洗手？碘酒和酒精棉球消毒以后，有沒有細菌生長？空白對照有沒有細菌生長？第7頁,共42頁，星期六，2024年，5月醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標本中病原菌的檢測（三）菌落特征觀察P11細菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（講解）膿汁和糞便標本檢驗（錄像）第8頁,共42頁，星期六，2024年，5月菌落特征ColonyCharacteristics大小：大(直徑約3mm以上)，中(直徑約1～3mm)，小(直徑約1mm以下)。形狀：圓形，卵圓形、假根形、絲狀、不規(guī)則等。邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。表面：隆起、平坦、中心凸起、臍形凹陷；光滑或粗糙、濕潤或干燥。色素：一般為無色或灰白色，特殊色素有兩類：脂溶性色素(菌落本身著色，培養(yǎng)基不著色)和水溶性色素(菌落及培養(yǎng)基均著色)。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周圍呈草綠色、不透明)，溶血(菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán))。第9頁,共42頁，星期六，2024年，5月金黃色葡萄球菌菌落特征X-SA

瓊脂培養(yǎng)基添加了顯色酶基質(zhì)，金黃色葡萄球菌形成淡藍色菌落。血瓊脂菌落直徑約2mm、圓形、隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊，菌落周圍有透明的β溶血環(huán)，溶血菌株大多有致病性。Baird-Parker瓊脂菌落黑色，奶油狀，表面光滑，濕潤，圓形，凸起，有光澤，邊緣整齊，不透明，外層有一透明圈。第10頁,共42頁，星期六，2024年，5月傷寒沙門菌菌落特征HE瓊脂HektoenEntericAgar沙門菌產(chǎn)生藍綠色、黑色中心菌落XLD瓊脂木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂XyloseLysineDesoxycholateAgar沙門菌產(chǎn)生較小黑色菌落SS瓊脂SalmonellaShigellaAgar沙門菌產(chǎn)生較小黑色菌落埃希菌產(chǎn)生較大紅色菌落第11頁,共42頁，星期六，2024年，5月鏈球菌菌落特征血瓊脂甲型溶血性鏈球菌，菌落周圍有1~2mm寬的草綠色溶血環(huán)，稱甲型溶血或α溶血。血瓊脂乙型溶血性鏈球菌，菌落周圍有2~4mm寬、紅細胞完全溶解、透明的溶血環(huán)，稱乙型溶血或β溶血。血瓊脂丙型鏈球菌，不產(chǎn)生溶血素，菌落周圍無溶血環(huán)，稱不溶血性鏈球菌或γ溶血。甲型乙型丙型第12頁,共42頁，星期六，2024年，5月志賀菌菌落特征HE瓊脂HektoenEntericAgar形成不發(fā)酵乳糖的深綠色菌落。麥康凱瓊脂MacConkeyAgar形成較小的，無色半透明不發(fā)酵乳糖的菌落。SS瓊脂SalmonellaShigellaAgar

菌落圓形、液滴狀、邊緣整齊，濕潤，無色半透明。第13頁,共42頁，星期六，2024年，5月大腸埃希菌菌落特征麥康凱瓊脂MacConkeyAgar伊紅美藍瓊脂eosinmethyleneblueAgar

科瑪嘉顯色瓊脂CHROMagar第14頁,共42頁，星期六，2024年，5月細菌的純培養(yǎng)PureCultures膿汁標本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、不透明。37℃培養(yǎng)24小時

第15頁,共42頁，星期六，2024年，5月糞便標本在伊紅美藍平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落色素是水溶性的，不是細菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是因為大腸埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍結(jié)合，形成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落，菌落直徑2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，淡粉紅色，半透明，直徑1～2mm。37℃培養(yǎng)24小時

第16頁,共42頁，星期六，2024年，5月若培養(yǎng)、放置時間過長或者平板上某個部位細菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色可能會發(fā)生改變。因為大腸桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落可能會由原來的紫黑色變成粉紅色，或者菌落中心黑色，邊緣粉紅色。由紫黑色變成粉紅色菌落中心黑色，邊緣粉紅色。大腸埃希菌菌落特征改變第17頁,共42頁，星期六，2024年，5月若劃線分離不成功，菌落數(shù)量少的，或者菌落分布密集的，獲得菌落形成單位的可能性比較大。劃線分離成功的，菌落分布越往后越稀疏的，獲得單菌落可能性越大。第18頁,共42頁，星期六，2024年，5月斜面接種分工甲→普通平板→黃色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面丁→EMB平板→粉紅菌落→1支斜面※斜面正面上2/3作標記：組號、黃色、白色、紫黑、粉紅?！x擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落?！谄矫蟮撞坎Ａ?，畫個大圈選取菌落，得到同組同學(xué)認可，才能挑取。第19頁,共42頁，星期六，2024年，5月畫圈選菌落第20頁,共42頁，星期六，2024年，5月畫圈選菌落第21頁,共42頁，星期六，2024年，5月甲→黃色丙→紫黑乙→白色丁→粉紅接種環(huán)→套住菌落→輕刮取菌第22頁,共42頁，星期六，2024年，5月斜面接種法StreakSlantMethod甲→黃色,乙→白色。丙→紫黑,丁→粉紅。標記：組號，顏色①接種環(huán)取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一條細菌接種線。②再伸入底部，自下向上，作蜿蜒劃線。③細菌涂布接種在斜面培養(yǎng)基的表面。第23頁,共42頁，星期六，2024年，5月生物安全警告接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴散開,＜5um通過呼吸道直接到達肺泡。Pike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴散引起的。實驗時應(yīng)坐著，在火焰周圍10～20厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。第24頁,共42頁，星期六，2024年，5月滅菌收集平板→滅菌桶內(nèi)（平板底部朝下，蓋朝上放置）→速送滅菌室→高壓蒸汽滅菌→洗刷。第25頁,共42頁，星期六，2024年，5月第26頁,共42頁，星期六，2024年，5月奧林巴斯CX21型生物顯微鏡第27頁,共42頁，星期六，2024年，5月使用須知顯微鏡是精密光學(xué)儀器，請不要讓其受到撞擊，請小心操作。在搬運顯微鏡時，請按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運。★如果拿住載物臺①和鏡筒②等部位搬運的話，有可能會造成損壞。第28頁,共42頁，星期六，2024年，5月開關(guān)與調(diào)整光強開或關(guān)之前，必須將亮度調(diào)整旋鈕②按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動到最小位置，以免損壞燈泡。電源開關(guān)①撥到∣側(cè)為開，撥到○側(cè)為關(guān)閉。按箭頭方向轉(zhuǎn)動亮度調(diào)整旋鈕②變亮，相反方向轉(zhuǎn)動則變暗。第29頁,共42頁，星期六，2024年，5月聚焦從顯微鏡的側(cè)面觀察，按箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕①，使物鏡③盡可能接近標本。一邊看目鏡，一邊慢慢逆箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕①，使載物臺下降?？吹綐吮疽院?，用微調(diào)旋鈕②來正確對焦?！?0倍物鏡的工作距離（WD，從物鏡到標本的距離）為10.5mm。★油鏡的WD為0.13mm。第30頁,共42頁，星期六，2024年，5月調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌用聚光鏡上下移動旋鈕①，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。在孔徑光闌環(huán)②上刻有物鏡倍率（10倍，100倍等），觀察時將與使用物鏡相對應(yīng)的倍率放到正面。第31頁,共42頁，星期六，2024年，5月轉(zhuǎn)換物鏡旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤①，將希望使用的物鏡（10倍、100倍）轉(zhuǎn)到標本的上方。第32頁,共42頁，星期六，2024年，5月100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標本的觀察部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。如果浸油內(nèi)有氣泡，會影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過1～2次浸油，排除油內(nèi)氣泡。第33頁,共42頁，星期六，2024年，5月香柏油折射率n=1.515空氣的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸鏡的原理光線

滴加香柏油可使光線更多進入物鏡,避免光線通過折射率低的空氣而散失,以提高物鏡的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍數(shù)：目鏡10倍×物鏡90或100倍?！值?4頁,共42頁，星期六，2024年，5月奧林巴斯CX21型生物顯微鏡（實驗柜內(nèi)，每人一臺）注意：只能橫放，不得豎放。第35頁,共42頁，星期六，2024年，5月顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→看到標本→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中→模糊物象→細調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源。將聚光鏡調(diào)到最高處；孔徑光闌環(huán)上刻有的物鏡倍率（10×，100×）必須轉(zhuǎn)到正面，與使用的物鏡相對應(yīng)。油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩→橫放在實驗柜內(nèi)。★(順德校區(qū)）實驗臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個插頭，請選擇離你最近的電源插座?！铮ㄐ１静浚嶒炁_中間，三個位的插座，中間那位插孔沒有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。第36頁,共42頁，星期六，2024年，5月醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗三、一空氣、手指皮膚的細菌學(xué)檢查結(jié)果分析膿汁和糞便標本中病原菌的檢測菌落特征觀察P11細菌純培養(yǎng)P10油鏡使用方法（講解）膿汁標本檢驗（錄像）腸道致病菌的分離鑒定（錄像）第37頁,共42頁，星期六，2024年，5月①試管用毛刷，上下刷洗內(nèi)壁和管底。②字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。③管口朝向相同，流水沖洗10次。④洗干凈的試管，倒扣在筐內(nèi)，晾干。平皿用紗布，旋轉(zhuǎn)擦拭內(nèi)外側(cè)，字跡用紗布粘去污粉擦拭。流水沖洗10次。逐個倒扣在筐內(nèi)，晾干。第38頁,共42頁，星期六，2024年，5月思考題在微生物學(xué)實驗中,怎樣才能避免雜菌的污染?空氣的衛(wèi)生標準規(guī)定如何?你的實驗結(jié)果說明了什么問題?怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球