GB∕ T 40462-2021 有機肥料中19種獸藥殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質譜法（正式版）

ICS65.080有機肥料中19種獸藥殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40462—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國石油和化學工業(yè)聯(lián)合會提出。本文件由全國肥料和土壤調理劑標準化技術委員會(SAC/TC105)歸口。本文件起草單位：上海海關工業(yè)品與原材料檢測技術中心、上海市農業(yè)科學院、上?；ぴ簷z測有GB/T40462—2021有機肥料中19種獸藥殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質譜法警示——使用本文件的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經驗。本文件并未指出所有可能的安全問本文件描述了有機肥料中19種獸藥殘留量的液相色譜串聯(lián)質譜測定方法。本文件適用于有機肥料中金剛烷胺(AMT)、磺胺吡啶(SPD)、磺胺噠嗪(SDZ)、磺胺甲惡唑(SMX)、磺胺噻唑(STZ)、磺胺甲基嘧啶(SMI)、磺胺二甲異惡唑(SIZ)、磺胺甲噻二唑(SMT)、磺胺二甲嘧啶(SMZ)、磺胺-6-甲氧嘧啶(SMM)、磺胺對甲氧嘧啶(SM)、磺胺甲氧噠嗪(SMPZ)、磺胺氯噠嗪(SCP)、磺胺鄰二甲氧嘧啶(SDO)、磺胺間二甲氧嘧啶(SDM)、諾氟沙星(NFC)、環(huán)丙沙星(CFC)、恩諾余目標物均為5μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T8571復混肥料實驗室樣品制備3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。5試劑或材料12GB/T40462—2021丙沙星(環(huán)丙沙星-D?)、氘代恩諾沙星(恩諾沙星-D?)標準品：純度不小于95%。標準品信息見附錄A。5.3甲醇：色譜純。5.5檸檬酸溶液(0.1mol/L)。稱取21.01g檸檬酸，用水溶解，并定容至1000mL。5.6磷酸氫二鈉溶液(0.2mol/L)。稱取71.63g磷酸氫二鈉，用水溶解，并定容至1000mL。5.7Mcllvaine緩沖溶液：將1000mL0.1mol/L檸檬酸溶液(5.5)與625mL0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液(5.6)混合，必要時用氫氧化鈉或鹽酸調節(jié)pH值至4.00±0.05。5.8Na?EDTA-Mcllvaine緩沖溶液(0.02mol/L):稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉放入1625mLMcllvaine緩沖溶液(5.7)中，使其溶解，然后用純水5倍稀釋，混勻。5.9乙腈-乙酸溶液(9+1):量取90mL乙腈與10mL乙酸混合。5.10甲酸水溶液(0.1%)。準確吸取1mL甲酸于1000mL容量瓶中，用水稀釋并定容至1000mL。5.11混合標準儲備液(100μg/mL):分別稱取19種適量的獸藥標準品(5.2),用甲醇溶解配制成19種獸藥濃度均為100μg/mL的混合標準儲備液?；旌蠘藴蕛湟簯凇?8℃冰箱中保存，有效期3個月。5.12混合標準工作液(1μg/mL):準確吸取混合標準儲備液(5.11)10mL轉移至1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，配成1μg/mL混合標準工作液。混合標準工作液應在4℃下保存，有效期1周。5.13氘代同位素內標儲備液(100μg/mL):稱取氘代諾氟沙星、氘代環(huán)丙沙星、氘代恩諾沙星標準品(5.2),用甲醇溶解配制成3種內標物濃度均為100μg/mL的標準儲備液。氘代同位素內標儲備液應在—18℃冰箱中保存，有效期3個月。準確吸取適量氘代同位素內標儲備液(5.13),用甲醇稀釋配成5μg/mL和1μg/mL的內標工作液。混合內標工作液應在4℃下保存，有效期1周。5.15復溶液：準確吸取6.6mL的磷酸以及7.4mL的三乙胺與1000mL的水混合，取85mL混合后的溶液與15mL乙腈混合。5.16HLB(親水/油平衡)固相萃取小柱：如WatersOasisPRiMEHLB60mg,3mL固相萃取柱，或功能相當者。5.17濾膜，0.22μm:如親水PTFE濾膜或相當者。5.18有機肥料空白試樣：不含待測的19種獸藥殘留的有機肥料。注：也可以是經檢測空白值在檢出限以下的有機肥料樣品，并經過二至三次提取(見8.2)后于105℃烘干至與待測樣品水分相近。6儀器設備6.1通常實驗室儀器。6.2試驗篩：孔徑1.00mm和2.00mm。6.3高效液相色譜串聯(lián)質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.4氮吹儀：氮氣流量1L/min～20L/min;水溫控制室溫+5℃~90℃(可調控)。6.6離心機：轉速不低于4000r/min。6.7振蕩器。6.9固相萃取裝置。GB/T40462—2021按照GB/T8571規(guī)定進行。試樣制備時應將樣品研磨至全部通過1.00mm試驗篩，若樣品很難研碎，可研磨至全部通過2.00mm試驗篩。試樣置于4℃下避光保存。8試驗步驟8.1平行試驗樣品測定和空白試驗均平行做兩份試驗。稱取(2.00±0.02)g試樣(精確至0.001g)于50mL離心管中，加入100μL的5μg/mL混合內標工作液(5.14)混勻，再加入5mLNa?EDTA-Mcllvaine緩沖溶液(5.8),混勻后再加入20mL乙腈-乙酸溶液(5.9),在振蕩器上振搖20min,在4000r/min轉速下離心10min,保留上清液A,用于獸藥含量取2mL上清液A過3mL固相萃取小柱(5.16),保持約每秒一滴的流速，準確量取1mL流出液，8.4基質匹配標準曲線的制備8.4.1外標基質匹配標準溶液制備取有機肥料空白試樣(5.18),按8.2和8.3規(guī)定的步驟處理，在洗脫液中加入混合標準工作液(5.12),配置濃度為0.010μg/mL、0.020μg/mL、0.050pg/mL、0.100pg/mL、0.150pg/mL及0.200μg/mL的系列標準曲線工作溶液，用液相色譜串聯(lián)質譜儀測定(測定條件見8.5)。以定量離子的峰面積為縱坐標，標準溶液質量濃度為橫坐標，繪制基質匹配標準曲線。8.4.2內標基質匹配標準曲線制備取有機肥料空白試樣(5.18),按8.2和8.3規(guī)定的步驟處理，在洗脫液中加入混合標準工作液0.150μg/mL及0.200μg/mL的系列基質匹配標準溶液(內標濃度為0.010pg/mL),用液相色譜串聯(lián)質譜儀測定。氧氟沙星和諾氟沙星以氘代諾氟沙星(5.2)為內標；環(huán)丙沙星以氘代環(huán)丙沙星(5.2)為內標；恩諾沙星以氘代恩諾沙星(5.2)為內標。以諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星的定量離子的峰面積和相對應內標物的定量離子峰面積的比值為縱坐標，標準溶液質量濃度為橫坐標，繪制內標基質匹配標準曲線。8.5測定條件推薦的色譜參考條件如下：a)色譜柱：C?s柱，如ThermoHypersilGOLDaQ,100mm×2.1mm(i.d.),1.9μm,或相同分離功能色譜柱；34GB/T40462—2021c)流動相：A相為甲醇，B相為0.1%甲酸水溶液(5.10);表1流動相梯度洗脫條件時間%流動相B%5555推薦的質譜條件如下：e)離子傳輸管溫度：350℃;h)測試物質母離子、定量/定性離子及相應碰撞能量和錐孔電壓見表2。獸藥簡寫母離子(m/z)產物離子(m/z)碰撞能量錐孔電壓V金剛烷胺AMT磺胺吡啶磺胺噠嗪磺胺甲惡唑磺胺噻唑磺胺甲基嘧啶5表219種獸藥的母離子、定量/定性離子及相應碰撞能量和錐孔電壓(續(xù))獸藥簡寫母離子(m/z)產物離子(m/z)碰撞能量錐孔電壓V磺胺二甲異惡唑磺胺甲噻二唑92.0/156.0磺胺二甲嘧啶磺胺-6-甲氧嘧啶磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲氧噠嗪磺胺氯噠嗪磺胺鄰二甲氧嘧啶磺胺間二甲氧嘧啶諾氟沙星NFC276.1/233.0環(huán)丙沙星314.1/288.1恩諾沙星316.1/245氧氟沙星261.1/318.1諾氟沙星-d?NFC-d?環(huán)丙沙星-d?CFC-dg恩諾沙星-dEFC-ds定量離子及相應碰撞電壓由加粗字體標出。8.6定性定量方法在相同實驗條件下，被測樣品中待測物的保留時間與基質匹配標準溶液中對應的保留時間偏差在±2.5%之內，且被測樣品中待測物的離子相對豐度與濃度相近的基質匹配標準溶液中的對應離子相對豐度偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。表3離子相對豐度的允許偏差范圍%相對豐度a允許偏差a>50士2050≥a>20士2520≥a>10士30a≤108.6.2定量方法6GB/T40462—2021諾沙星、氧氟沙星(共4種物質)采用內標法定量(或外標法);金剛烷胺、磺胺吡啶、磺胺噠嗪、磺胺甲惡氧噠嗪、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶(共15種物質)采用外標法定量。試樣溶液和基質匹配標準溶液中各獸藥的響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內，超出線性范圍需稀釋進樣測定，低于線性范圍應按8.2和8.3步驟提取凈化后，準確量取2.5mL流出液，40℃水浴氮氣吹干后用1mL復溶液(5.15)溶解，過0.22μm濾膜，待上機測試。19種獸藥殘留及3種內標混合標準溶液總離子流圖見附錄B的圖B.1,19種獸藥殘留及三種內標混合標準溶液選擇離子流圖見圖B.2,空白有機肥料樣品中添加回收的選擇離子流圖見圖B.3。8.7空白試驗除不加試樣外，按(8.2～8.5)規(guī)定的步驟與測定試樣同時進行。9試驗數(shù)據(jù)處理試樣中被測獸藥殘留量w,以質量分數(shù)計，數(shù)值以毫克每千克(mg/kg)表示，內標法按式(1)計算，外標法按式(2)計算。計算結果應扣除空白值。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留到小數(shù)點后兩位?！街校簆;——內標法(被測物與內標物峰面積之比——濃度間線性關系)計算的樣品制備液中獸藥物殘留濃度，單位為毫克每升(mg/L);V———試樣溶液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——試樣溶液所代表試樣的質量，單位為克(g)?！?2)式中：p′———基質標準工作溶液中被測物的質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);A—-—試樣溶液中被測物的色譜峰面積；A。——基質標準工作溶液中被測物的色譜峰面積；V試樣溶液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——試樣溶液所代表試樣的質量，單位為克(g)。10精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值與其算術平均值的比值(百分率),應不大于表4中的相應數(shù)值。7GB/T40462—2021表4測試結果允許差被測物含量范圍w;mg/kg平行測定結果的精密度%11試驗報告8(資料性)獸藥簡寫CAS號英文名稱金剛烷胺磺胺吡啶磺胺噠嗪磺胺甲惡唑磺胺噻唑磺胺甲基嘧啶磺胺二甲異惡唑磺胺甲噻二唑磺胺二甲嘧啶磺胺-6-甲氧嘧啶磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲氧噠嗪磺胺氯噠嗪磺胺鄰二甲氧嘧啶磺胺間二甲氧嘧啶4-amino-N-(4,6-dimethoxypyrimidin-2-yl)benzenesulfona諾氟沙星環(huán)丙沙星恩諾沙星氧氟沙星諾氟沙星-d?NFC-d?1-(2H5)Ethyl-6-fluor環(huán)丙沙星-d?CFC-d?Ciprofloxacin-d8hydrochloridehydrate恩諾沙星-d?Enrofloxacin-d5(資料性)典型譜圖B.119種獸藥及3種內標混合標準溶液總離子流圖19種獸藥及3種內標混合標準溶液總離子流圖見圖B.1。vimin圖B.119種獸藥及3種內標混合標準溶液(0.020μg/mL)的總離子流圖B.219種獸藥及三種內標混合標準溶液選擇離子流圖19種獸藥及三種內標混合標準溶液選擇離子流圖見圖B.2。9..5金剛烷妝25自C任28103111IIg磺胺噻唑4.44.72283(2430?5u6磺胺甲基嘧啶54i326452;5.62525625:18345786.36377.357037227.575lihte4?59472825磺胺甲噻二唑磺胺甲噻二唑5351.251.271601.952092.532.913.043483603.914.255.685.2日689G027287407.8482e369556磺胺甲氧噠嗪2.31232293284.73GZF3a797107>8791778820名322777磺胺鄰二甲氧嘧啶2.1024U3.J3.53及64.204.14U24.356333210.64磺胺問二甲氧嘧啶6307227.50757768263702.95RT:C.3C-9.0′4020900.110520.791.050.27C422.55□E0221.420551099250.530.2100350561.072.042.4026253.05timin古對一皮古對一皮623Ctmin諾氟沙星壞丙沙星U氧氟沙星古：B.3空白有機肥料樣品中添加回收的選擇離子流圖5金剛烷胺E0磺胺吡啶373磺胺噠嗪3804241.39450285533524磺胺甲惡唑0870,731.751952.2422727232003.3.803,51c371.821.52.00252285052452:35i磺胺甲基嘧啶45C47062080393137150183202224262561347367391460C.14C34C5702505137557824.54725.385.1655組16:26.987.12(,J1.88iU0.IiM30553534558E8n5936.426E76217057377.537783.12240821磺胺二甲異惡唑050C93·31·54·571852.33磺胺噻唑6318355.347.1275264.35timin烹光7593.0737035544643烹光7593.0737035544643tmin640磺胺甲噻二唑bb0磺胺二甲嘧啶57.02725753768.120.33951字字磺胺-6-甲氧嘧啶5戶戶0.1920a只10.341.501.U1.212.322.532713.173403.363.L94.94<4505.245885.99磺胺對甲氧嘧啶磺胺甲氧噠嗪35617.157467.E四7.些息250.300.17D4S202109140158060400bD?50.75n?130156169磺胺氯噠嗪2.072.272422713222.1735L239?4294.504025205205.ta 3.22橫胺間二|氧嘧啶磺胺鄰二甲氧嘧啶2.792.7929234B3034.124.432.77諾氟沙星597a852832e2e15;1.372.23236z2.873.2235C4485.001.511652.002.252432722.923.053.413.54