DB54T-絳蟲(chóng)蚴病地方標(biāo)準(zhǔn)

ICSFORMTEXT11.220FORMTEXTB41FORMTEXTDBFORMTEXT54DBFORMTEXT××/TFORMTEXT××××—FORMTEXT××××FORMTEXTFORMTEXT絳蟲(chóng)蚴病防治技術(shù)規(guī)程FORMDROPDOWNFORMTEXT××××-FORMTEXT××-FORMTEXT××發(fā)布FORMTEXT××××-FORMTEXT××-FORMTEXT××實(shí)施FORMTEXT西藏自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB××/T××××—××××前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14臨床診斷 15實(shí)驗(yàn)室診斷 26防治措施 27人員防護(hù) 4附錄A（資料性附錄）假絳蟲(chóng)蚴包囊 5附錄B（資料性附錄）絳蟲(chóng)蚴包囊 6附錄C（規(guī)范性附錄）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 7附錄D（規(guī)范性附錄）PCR檢測(cè) 8附錄E（規(guī)范性附錄）絳蟲(chóng)蚴病藥物治療及使用規(guī)定 9前??言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。本文件起草人：趙霞玲、夏晨陽(yáng)、石斌、單曲拉姆、唐文強(qiáng)、劉增強(qiáng)。絳蟲(chóng)蚴病防治技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了牛、羊絳蟲(chóng)蚴病的防治技術(shù)規(guī)范，包括診斷、預(yù)防及防治。本文件適用于牛、羊絳蟲(chóng)蚴病的防治。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB17013包蟲(chóng)病診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則WS/T664包蟲(chóng)病控制《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》術(shù)語(yǔ)和定義絳蟲(chóng)蚴病絳蟲(chóng)蚴病是由絳蟲(chóng)的幼蟲(chóng)寄生于家畜(或人體)而引起的一類蠕蟲(chóng)病，是絳蟲(chóng)成長(zhǎng)到中絳期時(shí)使中間宿主發(fā)生的疾病。腦包蟲(chóng)病腦包蟲(chóng)病又稱腦多頭蚴病，是由多頭帶絳蟲(chóng)的中絳期幼蟲(chóng)寄生于牛、羊腦和脊髓內(nèi)引起的疾病。棘球蚴病棘球蚴病又名包蟲(chóng)病，是由寄生于犬、狼、狐貍等動(dòng)物小腸的棘球絳蟲(chóng)中絳期幼蟲(chóng)棘球蚴感染中級(jí)宿主而引起人獸共患寄生蟲(chóng)病。細(xì)頸囊尾蚴細(xì)頸囊尾蚴是泡狀帶絳蟲(chóng)的中絳期幼蟲(chóng)，寄生于綿羊、山羊﹐偶見(jiàn)于牛及其他野生反芻動(dòng)物的肝漿膜、大網(wǎng)膜﹑腸系膜及其他器官中。臨床診斷流行特點(diǎn)終末宿主主要是犬、狼、狐貍等；中間宿主主要是牛、羊等哺乳動(dòng)物，人也是易感宿主。該病主要分布在牧區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)。蟲(chóng)卵隨感染犬糞便排出，借助空氣塵埃傳播，中間宿主食入蟲(chóng)卵被感染。臨床癥狀腦包蟲(chóng)病患病牛羊：寄生于腦內(nèi)時(shí)，呈現(xiàn)神經(jīng)癥狀，因蟲(chóng)體寄生部位不同，可出現(xiàn)頭偏向一側(cè)的轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng),對(duì)側(cè)視覺(jué)障礙。棘球蚴患病牛羊：消瘦、咳嗽、呼吸困難、脫毛、當(dāng)大量寄生于肝臟時(shí)，腹右側(cè)膨大，觸診表現(xiàn)疼痛。細(xì)頸囊尾蚴患病牛羊：機(jī)體消瘦，被毛逆立失去光澤，眼結(jié)膜及皮膚的顏色逐漸變淡，出現(xiàn)黃疸。病理變化腦包蟲(chóng)病患病牛羊：頭骨萎縮、變薄，腦壓迫性壞死、充血，顱腔積液。棘球蚴患病牛羊：肝、肺腫大，有包囊組織；包囊內(nèi)充滿液體，可見(jiàn)生發(fā)囊與原頭蚴。細(xì)頸囊尾蚴患病牛羊：肝漿膜、腸系膜、大網(wǎng)膜上有蟲(chóng)體泡囊，嚴(yán)重者在肺和胸腔處有蟲(chóng)體。臨床結(jié)果判定綿羊、山羊、牦牛等出現(xiàn)上述臨床癥狀，并有上述流行病學(xué)史時(shí)可判定為絳蟲(chóng)蚴病疑似病例。在剖檢或病理學(xué)檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)被檢組織器官中觸診有包囊，剖開(kāi)有囊壁、囊液或原頭蚴，即可確診為絳蟲(chóng)蚴病例。假絳蟲(chóng)蚴包囊形態(tài)學(xué)見(jiàn)附錄A，絳蟲(chóng)蚴包囊見(jiàn)附錄B。實(shí)驗(yàn)室診斷家畜酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)犬糞抗原水平及牛羊等中間宿主動(dòng)物血清抗體水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢查法具體操作程序見(jiàn)附錄C。PCR診斷采用PCR方法更加準(zhǔn)確的鑒定是否存在絳蟲(chóng)蚴的感染。PCR診斷具體操作程序見(jiàn)附錄D。實(shí)驗(yàn)室結(jié)果判定符合5.1結(jié)果陽(yáng)性者判為疑似患病動(dòng)物；符合5.2結(jié)果陽(yáng)性者判定為患病動(dòng)物。防治措施犬只防治絳蟲(chóng)蚴病的防治關(guān)鍵在于預(yù)防，避免動(dòng)物的感染。因絳蟲(chóng)蚴病的感染源主要來(lái)自犬，從消除感染源著手采取預(yù)防措施，只要消滅犬體內(nèi)絳蟲(chóng)，絳蟲(chóng)蚴病可得到有效的控制。犬只驅(qū)蟲(chóng)犬只按5mg～10mg/kg的劑量一次性口服吡喹酮，每4～6周驅(qū)蟲(chóng)一次。投藥前犬禁食1天，然后將吡喹酮夾在食物中進(jìn)行投喂，確認(rèn)犬吞服后進(jìn)行犬只驅(qū)蟲(chóng)登記。犬只驅(qū)蟲(chóng)后糞便的處理收集犬只驅(qū)蟲(chóng)后5天內(nèi)的糞便，采用深埋、焚燒或10%的氫氧化鈉溶液消毒等方式進(jìn)行無(wú)害化處理，防止蟲(chóng)卵污染環(huán)境。嚴(yán)格犬只數(shù)量管理犬只管理機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)犬只的管理和登記，實(shí)行拴養(yǎng)、圈養(yǎng)制度，應(yīng)及時(shí)撲殺陽(yáng)性犬，嚴(yán)格管控犬只數(shù)量。免疫疫苗選擇主要是免疫羊棘球蚴疫苗。疫苗的保存、運(yùn)輸在2～8℃下保存，避免高溫和陽(yáng)光直射，忌劇烈搖蕩。疫苗稀釋后，不能當(dāng)日用完，可在-20℃凍存，只能凍融1次，不可反復(fù)凍融使用。免疫程序按瓶簽注明的頭份，用滅菌生理鹽水稀釋，每只羊頸部皮下注射1mL；免疫程序的制定應(yīng)以羊群棘球蚴病血清抗體水平的高低為依據(jù)；妊娠母羊可以進(jìn)行免疫，以使羔羊獲得良好的免疫力;未用本疫苗免疫過(guò)的羊，常間隔4周進(jìn)行加強(qiáng)免疫；免疫過(guò)的母羊所產(chǎn)羔羊應(yīng)在16周齡進(jìn)行首次免疫，20周齡進(jìn)行2次免疫；未免疫過(guò)的母羊所產(chǎn)羔羊應(yīng)在8周齡進(jìn)行首次免疫，12周齡進(jìn)行強(qiáng)化免疫；免疫過(guò)的羊每12個(gè)月加強(qiáng)免疫1次。免疫要求體弱或患病羊禁用，疫苗注射當(dāng)日早晨應(yīng)禁飼。疫苗使用前要逐瓶檢查，確保藥瓶無(wú)破損、真空包裝完整，瓶簽上疫苗的名稱、批號(hào)、有效日期、檢驗(yàn)號(hào)碼等清楚。疫苗使用前應(yīng)置于22℃～25℃環(huán)境2h，使用時(shí)充分搖勻，保持勻質(zhì)。疫苗啟封后，24h內(nèi)用完。免疫質(zhì)量控制安排專人負(fù)責(zé)監(jiān)督接種過(guò)程，發(fā)現(xiàn)漏免羊要及時(shí)補(bǔ)免，對(duì)免疫抗體水平不合格的羊要及時(shí)強(qiáng)化免疫。做好免疫記錄工作。記錄內(nèi)容包括：羊品種、年齡、疫苗的來(lái)源、批次、接種時(shí)間等。免疫效力的評(píng)價(jià)羊群在同批次疫苗接種前和免疫后3周，分別靜脈采血3mL-5mL分離血清，檢測(cè)羊的免疫抗體水平，評(píng)價(jià)免疫效果。屠宰管理按國(guó)家有關(guān)規(guī)定對(duì)牛、羊進(jìn)行屠宰檢疫和產(chǎn)品檢驗(yàn)。不得出售病變臟器，以及將病變臟器隨意丟棄，以免犬科動(dòng)物采食。不得在屠宰場(chǎng)內(nèi)養(yǎng)犬，并防止犬只進(jìn)入屠宰場(chǎng)。對(duì)病變臟器、污染物應(yīng)進(jìn)行高溫高壓、焚燒或深埋等無(wú)害化處理。治療藥物治療所用藥物應(yīng)符合《獸藥管理?xiàng)l例》的規(guī)定。定期預(yù)防性驅(qū)蟲(chóng)，要選擇對(duì)優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種均有效的藥物。休藥期要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行，對(duì)未規(guī)定休藥期的藥物，休藥期不應(yīng)少于28d，具有治療方法見(jiàn)附錄E。手術(shù)治療腦包蟲(chóng)可以采樣手術(shù)摘除，當(dāng)腦包蟲(chóng)位于頭部前方表層時(shí)可實(shí)施外科手術(shù)摘除。其他管理合理搭配飼料和投喂量，保持養(yǎng)殖環(huán)境的清潔衛(wèi)生，定期清理糞便和雜草。圈舍、場(chǎng)地、車輛每月用3.75%次氯酸鈉溶液進(jìn)行全面的殺蟲(chóng)滅卵，防止犬糞污染。人員防護(hù)應(yīng)穿防護(hù)服、長(zhǎng)筒靴子，戴手套、口罩和護(hù)目鏡等開(kāi)展絳蟲(chóng)蚴病相關(guān)防控工作。使用過(guò)的防護(hù)服、口罩和一次性手套采用高溫或焚燒等方式進(jìn)行無(wú)害化處理，護(hù)目鏡、靴子用10%次氯酸鈉溶液消毒或者高溫進(jìn)行殺蟲(chóng)滅卵。

（資料性附錄）

假絳蟲(chóng)蚴包囊假絳蟲(chóng)蚴包囊

（資料性附錄）

絳蟲(chóng)蚴包囊棘球蚴病牦牛肺臟棘球蚴病藏羊肝臟細(xì)頸囊尾蚴絳蟲(chóng)蚴包囊

（規(guī)范性附錄）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病原針對(duì)腦包蟲(chóng)、棘球蚴、細(xì)頸囊尾蚴進(jìn)行檢測(cè)，不同的病原采用不同的包被板，其余操作方法一致。待檢樣品適用于檢測(cè)動(dòng)物的血清及犬糞樣品。樣品須新鮮、無(wú)污染及未變質(zhì)。操作方法犬糞樣品處理：新鮮采集的犬糞樣品，于-80℃或液氮冷凍7d，以滅活蟲(chóng)卵。室溫解凍，取1g犬糞樣品加入1mL工作濃度的稀釋液，混勻形成懸濁液，3000rpm離心10min，取上清備用。制備的樣品可在2～8℃保存7天，長(zhǎng)期保存則應(yīng)儲(chǔ)存于-20℃。血液樣品處理：將采血管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清析出。4℃3000rpm離心10min，收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。加樣：按順序依次加入待檢樣品、2孔陰性對(duì)照和2孔陽(yáng)性對(duì)照，100μL/孔，覆封板膜后，置37℃孵育30min。洗滌：無(wú)菌PBST洗滌5次。一抗結(jié)合：100μL/孔加入工作濃度的單抗液，覆封板膜后，置37℃孵育30min。洗滌：無(wú)菌PBST洗滌5次。。二抗結(jié)合：100μL/孔加入工作濃度的酶標(biāo)抗體，覆封板膜后，置37℃孵育30min。洗滌：無(wú)菌PBST洗滌5次。顯色：每孔加入100μLTMB顯色液，避光顯色15min。終止：50μL/孔加入終止液。讀數(shù)：酶標(biāo)儀10min內(nèi)測(cè)定450nm波長(zhǎng)處的吸光度值。結(jié)果判斷同時(shí)滿足：陽(yáng)性對(duì)照OD450nm平均值≥0.60，且陽(yáng)性對(duì)照OD450nm平均值>陰性對(duì)照,OD450nm平均值×2.1，方可進(jìn)行判定。當(dāng)陰性對(duì)照不足0.15時(shí)按0.15計(jì)算。陽(yáng)性判定：樣品OD450nm值>陰性對(duì)照OD450nm平均值×2.1。陰性判定：樣品OD450nm值≤陰性對(duì)照OD450nm平均值×2.1。

（規(guī)范性附錄）

PCR檢測(cè)試劑電泳緩沖液、基因組DNA提取試劑盒、2×PCRMix、DL2000DNAMarker、Ts-GelRed、瓊脂糖等。操作方法可疑包囊采集采集中間宿主包括家畜和野生動(dòng)物絳蟲(chóng)蚴可疑包囊病灶作為待檢樣本，取其整個(gè)包囊或者病灶組直接至于-20℃冷凍保存?；蚪MDNA提取按基因組DNA提取試劑盒的操作說(shuō)明從樣品中提取基因組。PCR操作方法參照文獻(xiàn)中提及的絳蟲(chóng)蚴檢測(cè)參考所涉及的蟲(chóng)種鑒定檢測(cè)引物(見(jiàn)表1)。引物信息蟲(chóng)種基因名稱引物序列5′-3′退火溫度/℃產(chǎn)物大小/bp腦包蟲(chóng)CobGGGTATGGCTTTGTATTATGGTAGTT58526ATCACTCAGGCTTAATACTAACAGGAG棘球蚴COX1GTTTAGGGGCTGGTGTTGGT55546CCGTCTTCACATCCAACCCA細(xì)頸囊尾蚴nad4GTCTATTACTCGTTTTCTAAACAG551254AATCTCAACCAGACACATAAGTG擴(kuò)增體系（50μL）：2×TaqPCRMasterMix25μL，上下游引物各2μL，模板4μL，ddH２O補(bǔ)齊為17μL，混勻后稍加離心。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3min；95℃變性15s，退火溫度退火15s，72℃延伸35s，共35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min。同時(shí)，以ddH2O代替模板DNA作為空白對(duì)照，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)結(jié)束后，配制1%瓊脂糖凝膠和1×TAE緩沖液，取5μL的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳儀中電泳。結(jié)果判定在同一塊瓊脂糖凝膠板上電泳后,當(dāng)DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、陰性及陽(yáng)性對(duì)照同時(shí)成立時(shí)，被檢樣本