血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定

關(guān)于血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定實驗提綱實驗?zāi)康?酶活性測定原理與方法2比色分析法原理與公式計算3722分光光度計操作方法與注意事項4

思考題5第2頁,共19頁，星期六，2024年，5月1實驗?zāi)康?234掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的原理熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的方法熟悉比色分析法了解722分光光度計的使用方法第3頁,共19頁，星期六，2024年，5月2酶活性測定原理與方法酶活性測定原理＋2,4－二硝基苯肼

(黃色)丙酮酸二硝基苯腙(紅棕色)NaOHα-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸＋GPT丙酮酸第4頁,共19頁，星期六，2024年，5月酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法1試管號標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鮮血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）0.50.50.5－0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（ml）(pH=7.4)－0.1－－

此前三管置于37℃保溫30分鐘2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH（ml）555523第5頁,共19頁，星期六，2024年，5月酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管顏色深淺不一第6頁,共19頁，星期六，2024年，5月酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法試管號標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（ml）(1ml=100μg)0.1－－－新鮮血清（ml）－－0.10.1底物液（37℃）（ml）0.50.50.5－0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（ml）(pH=7.4)－0.1－－

此前三管置于37℃保溫30分鐘2，4-二硝基苯肼(ml）0.50.50.50.5底物液（ml）－－－0.5充分混合，置于37℃保溫20分鐘0.4mol/LNaOH（ml）5555第7頁,共19頁，星期六，2024年，5月酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管如何排除干擾?真正丙酮酸定量?顏色深淺不一:還有其他酮酸的影響第8頁,共19頁，星期六，2024年，5月3比色分析法原理與公式計算比色分析法原理定義——通過比較有色物質(zhì)溶液顏色的深淺，測知該物質(zhì)濃度的方法。12原理——Lambert－Beer定律第9頁,共19頁，星期六，2024年，5月3比色分析法原理與公式計算比色分析法公式推導(dǎo)2A標(biāo)/A測=C標(biāo)/C測數(shù)學(xué)表達式——A=K×C×L溶液吸光度溶液吸光系數(shù)溶液濃度液層厚度1公式推導(dǎo)第10頁,共19頁，星期六，2024年，5月本實驗公式計算3比色分析法原理與公式計算A標(biāo)準(zhǔn)－A標(biāo)準(zhǔn)空白0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)＝A測定－A測定空白C標(biāo)準(zhǔn)×谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義：1ml血清于37℃與底物作用30分鐘，產(chǎn)生2.5μg丙酮酸為1個GPT活性單位?；盍挝?ml＝0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸μg數(shù)×102.512第11頁,共19頁，星期六，2024年，5月上述各管靜置10分鐘后，使用722分光光度計，在520nm處，以蒸餾水校正零點，測定各管相應(yīng)吸光度值。標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管酶活性測定方法2酶活性測定原理與方法第12頁,共19頁，星期六，2024年，5月4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)空白液、測定液、測定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖）1234蓋上暗箱蓋，選擇儀器自動校正空白液“A”=0，并由下向上的順序讀取各管“A”（即A標(biāo)準(zhǔn)、A標(biāo)空、A測定、A測空）。（見圖）start接通電源打開暗箱蓋，進入光度測量界面。選擇測定的波長（520nm）。（見圖）GOTOλ第13頁,共19頁，星期六，2024年，5月4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第14頁,共19頁，星期六，2024年，5月4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第15頁,共19頁，星期六，2024年，5月4722分光光度計使用方法及注意事項使用方法第16頁,共19頁，星期六，2024年，5月注意事項4722分光光度計使用方法及注意事項手持比色杯磨砂面，比色杯光面對準(zhǔn)光路。比色杯內(nèi)液體體積占總體積2/3，比色杯外壁不可有液體，則需擦鏡紙沾去。與比色杯由下向上所放位置對應(yīng)，儀器所報數(shù)據(jù)順序則由1-5。123第17頁,共19頁，星期六，2024年，5月5思考題123實驗操作中第一次37℃保溫30分鐘和第二次37℃保溫20分鐘，各有什么意義