皮膚癬菌病的鏡檢診斷新方法

1/1皮膚癬菌病的鏡檢診斷新方法第一部分檢材采集及制片 2第二部分直接鏡檢方法 3第三部分熒光顯微鏡鏡檢 6第四部分鏡檢指標觀察 9第五部分革蘭染色鏡檢 12第六部分培養(yǎng)基培養(yǎng)標準 15第七部分真菌鏡檢診斷要點 16第八部分皮膚癬菌鏡檢意義 20

第一部分檢材采集及制片關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點標本采集

1.部位選擇：選擇皮疹邊緣處有鱗屑和水皰的部位，因為該區(qū)域通常含有大量的真菌孢子。

2.無菌操作：使用無菌棉簽或刮刀輕輕刮取標本，避免污染。

3.標本量：采集足夠的標本，以確保顯微鏡檢查有足夠的材料。

標本制片

1.直接涂片：將標本直接涂抹到載玻片上，并用蓋玻片覆蓋。

2.氫氧化鉀(KOH)溶液澄清：用10%~20%的KOH溶液浸泡標本15~30分鐘，以溶解角蛋白，使真菌結(jié)構(gòu)清晰可見。

3.染色：使用帕斯染色或蘇木素-伊紅染色，以突出真菌結(jié)構(gòu)的顏色并增強其在顯微鏡下的對比度。檢材采集及制片

準確的鏡檢診斷依賴于適宜的檢材采集和制備技術(shù)。對于皮膚癬菌病，檢材采集的目標是獲得含菌量高的樣本，并避免污染。

檢材采集

*皮損刮取物：使用無菌刮片或刀片輕輕刮取病變部位的鱗屑或皮屑。盡量深入到病變區(qū)域，避免混入正常的表皮細胞。

*頭發(fā)或指甲：剪取受影響的頭發(fā)或指甲，長度約為5-10mm。

*分泌物：對于濕疹樣皮膚癬菌病，可采集膿性或鱗屑樣的分泌物。

*培養(yǎng)基：為了提高檢出率，可以將檢材接種到富含營養(yǎng)的培養(yǎng)基中（例如沙氏培養(yǎng)基或真菌瓊脂培養(yǎng)基），并進行培養(yǎng)2-4周。培養(yǎng)后的菌落可用于鏡檢和鑒定。

制片

*直接鏡檢：將檢材置于載玻片上，加入氫氧化鉀(KOH)溶液（濃度為10-20%）并在加熱狀態(tài)下溶解角質(zhì)組織。透清后，在顯微鏡下觀察檢材。

*光學增白劑染色：這是一種熒光染色技術(shù)，使用卡拉明紅或CalcofluorWhite等光學增白劑。它可以增強真菌細胞壁的發(fā)光，使檢材在紫外光下更易于觀察。

*PAS染色：PAS染色是一種組織化學染色技術(shù)，使用過碘酸-席夫試劑染色真菌細胞壁上的多糖。它可以產(chǎn)生清晰的真菌結(jié)構(gòu)圖像，包括分隔菌絲、孢子等。

鏡檢觀察

鏡檢時，觀察以下特征：

*菌絲：分隔的細長絲狀結(jié)構(gòu)，寬度通常在2-10μm之間。

*孢子：真菌無性繁殖產(chǎn)生的單細胞或多細胞結(jié)構(gòu)，形狀和大小可根據(jù)真菌種類而異。

*孢子窩：真菌產(chǎn)生大量孢子的特殊結(jié)構(gòu)，形狀和排列方式可用于輔助診斷。

通過觀察這些特征，可以初步診斷皮膚癬菌病。然而，對于某些難以鑒別的真菌，可能需要進行額外的分子鑒定或培養(yǎng)來確認診斷。第二部分直接鏡檢方法關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點直接鏡檢方法

1.通過直接觀察樣本中皮屑或鱗屑中的真菌元素來診斷皮膚癬菌病。

2.具有簡單、快捷、成本低廉的優(yōu)點。

3.可使用10%氫氧化鉀(KOH)溶液或真菌染色劑進行制片。

KOH直接鏡檢

1.KOH溶液可以溶解角質(zhì)細胞，使真菌元素清晰可見。

2.可觀察到真菌的菌絲體和孢子，有助于快速區(qū)分真菌感染和非真菌性疾病。

3.需注意假陽性結(jié)果，如存在酵母菌或棒狀真菌等非皮膚癬菌真菌。

真菌染色法

1.使用甲基藍、帕斯染色等方法對真菌元素進行染色。

2.提高了真菌元素的對比度，便于觀察和識別。

3.適用于KOH直接鏡檢難以明確診斷或需要進一步鑒別真菌種類的情況。

熒光檢測

1.采用熒光顯微鏡觀察經(jīng)過熒光染料染色的真菌元素。

2.提高了真菌元素的檢測靈敏度，可發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)鏡檢難以觀察的早期或淺層感染。

3.適用于疑似皮膚癬菌病但直接鏡檢陰性的病例。

廣場染色法

1.一種改良的KOH直接鏡檢方法，添加了丙烯酸和甲苯藍。

2.提高了真菌元素的顯著性和易于觀察性。

3.適用于懷疑皮膚癬菌病但常規(guī)KOH直接鏡檢結(jié)果不確定的情況。

衍射相襯顯微鏡

1.一種特殊類型的顯微鏡，利用光的衍射和相襯原理觀察樣本。

2.可提供真菌元素的立體三維圖像，提高觀察的清晰度和準確性。

3.適用于需要精細鑒別真菌種類或評估真菌侵襲深度的病例。直接鏡檢方法

直接鏡檢方法是皮膚癬菌病診斷中最常用的方法，具有簡單、快速、廉價等優(yōu)點。

標本采集

1.皮膚病變區(qū):用無菌棉棒或刮匙輕輕刮取病變部位的鱗屑，收集于干凈的載玻片上。

2.毛發(fā)病變區(qū):用無菌鑷子拔取受感染的毛發(fā)，收集于載玻片上。

3.指甲病變區(qū):用指甲剪剪取少量的病甲，收集于載玻片上。

標本制備

1.KOH法：將10%的氫氧化鉀（KOH）溶液滴加到標本上，靜置10-15分鐘。KOH可以溶解角質(zhì)細胞，使癬菌更易于觀察。

2.帕克藍墨水法：將帕克藍墨水（派克國際牌）滴加到標本上，靜置5-10分鐘。藍墨水可以被癬菌吸收，使癬菌結(jié)構(gòu)更清晰。

3.丙烯酸藍法：將丙烯酸藍溶液（1g丙烯酸藍溶解于100ml蒸餾水中）滴加到標本上，靜置1-2分鐘。丙烯酸藍可以特異性地與癬菌的糖蛋白結(jié)合，使癬菌呈藍色。

鏡檢

1.皮膚病變區(qū)：在顯微鏡下觀察KOH溶解后的標本，尋找有無癬菌絲和孢子。癬菌絲呈透明或微棕色的細長管狀結(jié)構(gòu)，而孢子呈圓形或橢圓形，大小不等。

2.毛發(fā)病變區(qū)：觀察毛發(fā)周圍有無癬菌菌鞘。菌鞘是癬菌入侵毛發(fā)時形成的保護性結(jié)構(gòu)，呈不規(guī)則的管狀或鞘狀，包裹著毛發(fā)。

3.指甲病變區(qū)：觀察指甲碎片有無癬菌侵襲的跡象，如癬菌絲或孢子。

陽性結(jié)果的判定

1.KOH法：觀察到有真菌絲和孢子。

2.帕克藍墨水法：觀察到癬菌結(jié)構(gòu)被藍墨水染色。

3.丙烯酸藍法：觀察到癬菌結(jié)構(gòu)呈藍色。

注意事項

1.標本采集時應避免污染，以免影響結(jié)果。

2.標本制備時間不宜過長，以免破壞癬菌結(jié)構(gòu)。

3.鏡檢時應注意觀察細節(jié)，如癬菌絲的形態(tài)、孢子的形狀和大小等。

4.直接鏡檢方法僅能初步診斷皮膚癬菌病，確診仍需結(jié)合其他檢查，如真菌培養(yǎng)和分子檢測等。第三部分熒光顯微鏡鏡檢關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點熒光顯微鏡鏡檢

1.熒光顯微鏡的工作原理

-利用特定波長的激發(fā)光照射樣本，某些物質(zhì)會吸收光能并發(fā)射出熒光。

-通過熒光濾鏡組觀察樣本，可區(qū)分不同波長的熒光，從而識別樣本中特定結(jié)構(gòu)或成分。

2.熒光染料在皮膚癬菌病診斷中的應用

-熒光染料（如卡羅紅、考馬仕藍）可以特異性地與皮膚癬菌細胞壁上的成分結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了染料的皮膚癬菌細胞會發(fā)出熒光，與未結(jié)合染料的背景細胞區(qū)分開來。

3.皮膚癬菌病熒光顯微鏡鏡檢的優(yōu)點

-快速準確：熒光顯微鏡鏡檢可以快速識別皮膚癬菌，準確率高。

-非侵入性：只需要采集少量皮膚樣本，不會對患者造成太大的創(chuàng)傷。

-區(qū)分物種：不同種類的皮膚癬菌對熒光染料的結(jié)合能力不同，可用于區(qū)分物種。

卡羅紅染色

1.原理：

-卡羅紅是一種苯并噁嗪熒光染料，可與皮膚癬菌細胞壁上的葡聚糖結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了卡羅紅的皮膚癬菌細胞發(fā)出蘋果綠色的熒光。

2.優(yōu)點：

-靈敏度高：即使是少量的皮膚癬菌也能被檢測到。

-特異性強：卡羅紅對皮膚癬菌具有特異性，很少出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

-操作簡單：染色過程簡便，結(jié)果易于觀察。

考馬仕藍染色

1.原理：

-考馬仕藍是一種二苯氧氮卓類熒光染料，可與皮膚癬菌細胞壁上的幾丁結(jié)合。

-在熒光顯微鏡下，結(jié)合了考馬仕藍的皮膚癬菌細胞發(fā)出藍綠色的熒光。

2.優(yōu)點：

-滲透性強：考馬仕藍可以穿透皮膚癬菌的厚壁，與細胞壁成分結(jié)合。

-背景低：考馬仕藍對皮膚和真菌細胞的背景染色較低，有利于觀察熒光信號。

-區(qū)分真菌和非真菌：考馬仕藍對真菌細胞壁具有特異性，可以區(qū)分真菌和非真菌性病變。熒光顯微鏡鏡檢

原理：

熒光顯微鏡是一種顯微鏡，利用熒光染料與標本中特定成分的結(jié)合特性，在特定波長的激發(fā)光照射下發(fā)出熒光的原理，實現(xiàn)對標本的觀察和分析。在皮膚癬菌病鏡檢中，熒光顯微鏡的應用主要基于以下機制：

*癬菌熒光：某些癬菌，如毛癬菌屬（Trichophyton）和表皮癬菌屬（Epidermophyton），在含有熒光染料的介質(zhì)中，其真菌細胞壁和菌絲會發(fā)出熒光。

*角蛋白熒光淬滅：角蛋白是皮膚和毛發(fā)角質(zhì)層的組成成分，在受到癬菌侵染后，其結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化，導致熒光特性改變。利用熒光顯微鏡，可以通過觀察受感染角蛋白熒光淬滅的程度，來判斷癬菌的存在。

染料選擇：

用于皮膚癬菌病熒光顯微鏡鏡檢的染料通常為熒光光團劑，如：

*BlankophorB：是一種普遍應用的熒光光團劑，在與癬菌細胞壁結(jié)合后發(fā)出藍色熒光。

*Calcofluor白：另一種熒光光團劑，與纖維素和幾丁（真菌細胞壁的組成成分）結(jié)合后發(fā)出綠色或藍色熒光。

操作步驟：

熒光顯微鏡鏡檢的具體操作步驟如下：

1.標本采集：取用患者皮膚或毛發(fā)的病變組織或刮屑物作為標本。

2.染色：將標本與熒光染料混合，進行染色反應。

3.洗滌：去除未結(jié)合的染料。

4.載玻片制備：將染色后的標本滴加到載玻片上，蓋上蓋玻片。

5.熒光顯微鏡觀察：在熒光顯微鏡下，使用特定的波長激發(fā)光，觀察標本中癬菌的熒光特征。

優(yōu)點：

熒光顯微鏡鏡檢在皮膚癬菌病診斷中具有以下優(yōu)點：

*靈敏性高：熒光顯微鏡鏡檢可以檢測出活體癬菌和死菌，靈敏性高于傳統(tǒng)顯微鏡鏡檢。

*特異性強：熒光顯微鏡鏡檢可以通過特定染料的結(jié)合特性，識別出癬菌與其他微生物。

*快速簡便：操作過程相對簡單，結(jié)果出具時間短。

*方便觀察：熒光顯微鏡鏡檢不需要復雜的前處理步驟，可以直接觀察標本。

不足：

熒光顯微鏡鏡檢也存在一定的局限性：

*設(shè)備要求高：熒光顯微鏡鏡檢需要使用專門的熒光顯微鏡設(shè)備，成本相對較高。

*受染色技術(shù)影響：染色技術(shù)的不當會導致假陰性或假陽性結(jié)果。

*不能區(qū)分種類：熒光顯微鏡鏡檢只能識別癬菌的存在，無法區(qū)分具體的癬菌種類。第四部分鏡檢指標觀察關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點直接涂片法

1.直接涂片法是最簡單、最快速的皮膚癬菌病鏡檢診斷方法之一。

2.直接涂片法操作簡便，取材部位皮膚表面菌斑或鱗屑，加入10%氫氧化鉀溶液，輕輕壓片蓋玻片，待角質(zhì)軟化后，在顯微鏡下直接觀察。

3.直接涂片法可觀察到真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和排列方式，有利于真菌類型的初步判斷。

毛發(fā)涂片法

1.毛發(fā)涂片法適用于感染部位為毛發(fā)的皮膚癬菌病，如頭癬、體癬等。

2.毛發(fā)涂片法操作步驟與直接涂片法類似，但需將感染部位毛發(fā)拔除，連同鱗屑一起放入10%氫氧化鉀溶液中，軟化后鏡檢。

3.毛發(fā)涂片法不僅可以觀察到毛發(fā)表面真菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，還能發(fā)現(xiàn)毛發(fā)內(nèi)部的真菌侵犯情況，提高真菌感染部位定位的準確性。

培養(yǎng)法

1.培養(yǎng)法是皮膚癬菌病鏡檢診斷的金標準，具有確診意義。

2.培養(yǎng)法操作步驟較為繁瑣，需在無菌條件下取材，并接種于專用培養(yǎng)基上，在特定溫度和濕度條件下培養(yǎng)一定時間。

3.培養(yǎng)法不僅可以分離出致病真菌，還可進行真菌藥敏試驗，為臨床用藥選擇提供依據(jù)。

組織病理學檢查

1.組織病理學檢查是皮膚癬菌病診斷的重要輔助手段，可觀察到真菌在組織中的分布、侵犯程度和宿主反應。

2.組織病理學檢查需要取皮膚活檢組織，制成病理切片，在顯微鏡下觀察真菌侵犯的情況，有利于鑒別皮膚癬菌病與其他皮膚疾病。

3.組織病理學檢查還可以提供真菌侵犯的深度、炎癥反應程度等信息，指導臨床治療方案的制定。

分子生物學檢測

1.分子生物學檢測是近年來發(fā)展起來的皮膚癬菌病鏡檢診斷新技術(shù)，具有快速、準確、靈敏的特點。

2.分子生物學檢測主要通過擴增和檢測真菌特異性基因序列來識別真菌類型，可提高皮膚癬菌病診斷的敏感性和特異性。

3.分子生物學檢測還可以進行真菌分型，了解真菌的致病力、耐藥性等信息，為臨床診療提供更精準的依據(jù)。鏡檢指標觀察

鏡檢是皮膚癬菌病診斷的重要方法，主要通過檢查臨床標本中的菌絲和孢子來確診。常用的鏡檢指標包括：

1.菌絲觀察

*菌絲形態(tài)：細長、分枝、透明、折光性強。

*菌絲直徑：一般為2-10μm，不同種類的癬菌菌絲直徑有所不同。

*菌絲分隔：菌絲上有規(guī)則或不規(guī)則的分隔，分隔間距大小和形狀因菌種而異。

*菌絲壁結(jié)構(gòu)：菌絲壁由內(nèi)外兩層組成，外層為透明的蛋白鞘，內(nèi)層為透電子致密的幾丁質(zhì)。

2.孢子觀察

*孢子形態(tài)：根據(jù)孢子形狀和分隔特點，可分為大孢子和小孢子。大孢子通常呈梭形、錘形或棒狀，小孢子呈梨形、球形或橢圓形。

*孢子大?。捍箧咦右话汩L30-150μm，寬8-15μm；小孢子一般直徑為2-10μm。

*孢子隔膜：大孢子通常有多個隔膜，小孢子一般為無隔膜或僅有幾個隔膜。

*孢子壁結(jié)構(gòu)：孢子壁由兩層或多層組成，外層為蛋白鞘，內(nèi)層為幾丁質(zhì)。

3.其他觀察指標

*革蘭染色：癬菌為革蘭陽性菌，染色后呈藍紫色。

*熒光顯微鏡檢查：某些癬菌在熒光顯微鏡下發(fā)射熒光，可以輔助診斷。

*分子生物學檢測：通過PCR或基因測序等方法，可以對癬菌進行快速、準確的鑒定。

鏡檢注意事項

*標本采集：應取用病灶邊緣的鱗屑或皮膚碎片。

*標本處理：可用10%氫氧化鉀溶液浸泡標本，溶解角質(zhì)層，便于菌絲和孢子的顯微鏡觀察。

*鏡檢過程：使用復合顯微鏡和100倍油浸物鏡進行觀察，注意菌絲和孢子的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)和分隔等特征。

*診斷標準：根據(jù)菌絲和孢子的觀察結(jié)果，結(jié)合臨床表現(xiàn)和輔助檢查，綜合判斷是否為皮膚癬菌病。第五部分革蘭染色鏡檢關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【革蘭染色鏡檢】

1.染色原理：革蘭染色鏡檢利用革蘭氏陽性和革蘭氏陰性的細胞壁成分不同，對革蘭氏陽性菌染色呈藍紫色，而對革蘭氏陰性菌染色呈紅紅色或桃紅色。

2.染色步驟：采用結(jié)晶紫染色、碘液固定、脫色液處理和番紅染色，通過脫色步驟區(qū)分革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌。

3.鏡檢觀察：在顯微鏡下觀察革蘭染色后的玻片，根據(jù)菌體的顏色形態(tài)進行初步鑒定。

【應用前景】

革蘭染色鏡檢

革蘭染色鏡檢是一種經(jīng)典的顯微鏡技術(shù)，用于區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。該技術(shù)基于細胞壁結(jié)構(gòu)的差異，革蘭氏陽性菌具有較厚的肽聚糖層，而革蘭氏陰性菌具有較薄的肽聚糖層和外膜。

原理

革蘭染色程序包括以下步驟：

1.革蘭氏晶體紫染色：將晶體紫染液涂抹在樣本上，使染料滲透細胞壁。

2.革蘭氏碘處理：碘溶液被加入，與晶體紫形成晶體紫-碘復合物。

3.脫色：使用乙醇或丙酮等脫色劑，除去革蘭氏陰性菌細胞壁中的晶體紫-碘復合物。

4.反染：使用番紅或中性紅等反染劑，對革蘭氏陰性菌進行染色。

步驟

材料：

*樣本

*革蘭氏晶體紫染液

*革蘭氏碘溶液

*脫色劑（乙醇或丙酮）

*反染劑（番紅或中性紅）

*載玻片

*顯微鏡

方法：

1.將樣本涂抹在載玻片上并風干。

2.將晶體紫染液滴在樣本上，孵育1分鐘。

3.將碘溶液滴在樣本上，孵育1分鐘。

4.用脫色劑輕輕沖洗樣本10-15秒。

5.用反染劑滴在樣本上，孵育1分鐘。

6.沖洗樣本并風干。

7.在顯微鏡下觀察。

結(jié)果

*革蘭氏陽性菌：細胞以藍色或紫色呈現(xiàn)，細胞壁較厚。

*革蘭氏陰性菌：細胞以紅色或粉紅色呈現(xiàn)，細胞壁較薄。

優(yōu)勢

革蘭染色鏡檢的優(yōu)勢包括：

*簡單易行：技術(shù)相對簡單，操作方便。

*快速：染色過程通?？稍?0分鐘內(nèi)完成。

*經(jīng)濟有效：所需的試劑和設(shè)備成本低。

*區(qū)分性：可有效區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。

局限性

革蘭染色鏡檢也有一些局限性：

*形態(tài)學變化：某些細菌在特定條件下可能表現(xiàn)出異常的染色特性。

*主觀解讀：結(jié)果可能取決于觀察者的主觀判斷。

*無法識別某些細菌：少數(shù)細菌，如衣原體和支原體，無法通過革蘭染色進行區(qū)分。

應用

革蘭染色鏡檢廣泛應用于細菌性感染的診斷，包括：

*皮膚癬菌?。焊锾m氏真菌會表現(xiàn)為無性分枝菌絲和孢子。

*細菌性肺炎：革蘭氏陽性鏈球菌和革蘭氏陰性肺炎球菌是常見的致病菌。

*尿路感染：革蘭氏陰性大腸桿菌是常見的致病菌。

*傷口感染：革蘭氏陽性葡萄球菌和革蘭氏陰性假單胞菌是常見的致病菌。

總的來說，革蘭染色鏡檢是一種簡單、經(jīng)濟且有用的技術(shù)，用于區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。盡管存在一些局限性，但它仍然是細菌性感染診斷的重要工具。第六部分培養(yǎng)基培養(yǎng)標準關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點【培養(yǎng)基選擇】：

1.Sabouraud培養(yǎng)基：該培養(yǎng)基富含葡萄糖、蛋白胨和瓊脂，可促進皮膚癬菌生長，并抑制細菌生長。

2.瓊脂培養(yǎng)基：瓊脂可使培養(yǎng)基凝固，形成固體培養(yǎng)基，便于觀察菌落形態(tài)和進行亞培養(yǎng)。

【培養(yǎng)溫度和時間】：

培養(yǎng)基培養(yǎng)標準

皮膚癬菌病的鏡檢診斷中，培養(yǎng)基培養(yǎng)是重要的確診方法，規(guī)范的培養(yǎng)操作對于提高檢出率和準確性至關(guān)重要。本研究中采用以下培養(yǎng)基培養(yǎng)標準：

培養(yǎng)基類型

*薩布羅瓊氏葡萄糖瓊脂（Sabouraud'sDextroseAgar，SDA）：含葡萄糖、蛋白胨、瓊脂等成分，為皮膚癬菌常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

*改良狄克森培養(yǎng)基（ModifiedDixonAgar，MDA）：在SDA的基礎(chǔ)上添加氯霉素和環(huán)丙沙星，抑制細菌和霉菌的生長，可選擇性培養(yǎng)皮膚癬菌。

*皮膚癬菌選擇性培養(yǎng)基（DermatophyteSelectiveAgar，DSA）：含氯霉素、環(huán)丙沙星、環(huán)己咪唑等抗菌藥，進一步提高皮膚癬菌的檢出率。

培養(yǎng)溫度和時間

*培養(yǎng)溫度：25～28℃（室溫）

*培養(yǎng)時間：2～4周

接種方法

*用無菌移液管或接種環(huán)取標本，接種于培養(yǎng)基表面，形成直徑約5mm的接種點。

*多點接種，確保標本均勻分布在培養(yǎng)基上。

培養(yǎng)環(huán)境

*將接種后的培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

*培養(yǎng)箱內(nèi)濕度保持在50～60%，以防止培養(yǎng)基干燥。

*避免培養(yǎng)基暴露于強光，以防止光線抑制皮膚癬菌的生長。

培養(yǎng)觀察

*培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基，記錄菌落的形態(tài)、顏色、質(zhì)地等特征。

*皮膚癬菌的菌落通常在培養(yǎng)2～4周后出現(xiàn)，呈棉絮狀、粉紅色或白色，質(zhì)地為絨毛狀或革質(zhì)狀。

注意點

*標本采集前避免使用抗真菌藥物，以免影響培養(yǎng)結(jié)果。

*培養(yǎng)期間避免培養(yǎng)基受到交叉污染，以免影響診斷準確性。

*培養(yǎng)基使用前應檢查是否有細菌和霉菌污染，并及時更換。

*培養(yǎng)結(jié)果需由專業(yè)人員進行鑒定，結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷。第七部分真菌鏡檢診斷要點關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點鏡檢標本采集

1.采集鱗屑或拔毛：選擇皮損邊緣、紅斑、丘疹或水皰部位，用刮刀或鑷子輕輕刮取鱗屑或拔出毛發(fā)。

2.采集培養(yǎng)標本：對于深部真菌感染或疑似非皮膚癬菌感染，需要取組織標本進行培養(yǎng)。

3.消毒清潔：采集部位和工具應嚴格消毒，避免污染標本。

鏡檢方法

1.直接鏡檢：取少量標本置于載玻片上，滴加10%氫氧化鉀溶液，覆蓋蓋玻片，加熱或室溫放置，待標本透明后觀察菌絲、孢子等真菌形態(tài)。

2.染色鏡檢：將標本染色，如帕斯染色或格羅科特染色，以增強真菌結(jié)構(gòu)的顯色性，提高檢出率。

3.免疫熒光染色：使用抗真菌抗體和熒光標記物，結(jié)合熒光顯微鏡觀察，提高真菌的可視化和特異性。

菌絲形態(tài)觀察

1.分隔菌絲：真菌菌絲由橫隔和分生孢子隔開，表現(xiàn)為細胞狀結(jié)構(gòu)，常見于皮膚癬菌。

2.無分隔菌絲：真菌菌絲沒有橫隔，呈管狀或帶狀結(jié)構(gòu)，常見于念珠菌和隱球菌。

3.假菌絲：酵母菌在特定條件下形成的菌絲，形態(tài)上類似于真菌菌絲，但并非真正的菌絲。

孢子形態(tài)觀察

1.厚壁孢子：皮膚癬菌的特征性孢子，呈圓形、橢圓形或梭形，具有厚厚的壁，不易被壓碎。

2.薄壁孢子：念珠菌和隱球菌等真菌產(chǎn)生的孢子，壁較薄，易被壓碎，常呈圓形、橢圓形或發(fā)芽狀。

3.小分生孢子：由皮膚癬菌的菌絲直接分生產(chǎn)生的孢子，大小較小，常呈圓形或卵形。

其他形態(tài)觀察

1.酵母菌：橢圓形或圓形的單細胞真菌，常呈芽生狀，常見于念珠菌感染。

2.假絲酵母菌：介于酵母菌和真菌菌絲之間的形態(tài)，具有芽生和菌絲生長特征，常見于隱球菌感染。

3.孢子囊：真菌產(chǎn)生的球形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含孢子，常見于某些真菌，如毛霉菌。

報告解讀

1.陽性報告：標本中檢出真菌形態(tài)，包括菌絲和/或孢子，提示真菌感染的存在。

2.陰性報告：標本中未見真菌形態(tài)，但不能完全排除真菌感染，可能需要結(jié)合其他檢查手段確診。

3.需進一步培養(yǎng)：鏡檢存在真菌形態(tài)，但不能明確診斷，需要進行真菌培養(yǎng)進一步鑒別。真菌鏡檢診斷要點

1.標本采集

*皮損邊緣或鱗屑

*使用刮刀或手套收集

*標本應裝入無菌容器并送往實驗室

2.直接鏡檢

*氫氧化鉀（KOH）濕片檢查：將標本置于10%KOH溶液中，加熱溶解角質(zhì)，真菌元件顯露。

*觀察要點：

*菌絲：無隔或多隔、分枝或不分枝

*孢子：分節(jié)孢子、厚壁孢子、微小孢子等

*酵母樣真菌：出芽細胞或假菌絲

3.組氨酸菌素染液檢查

*熒光性光學顯微鏡下觀察

*適用于真菌含有組氨酸成分的物種

*真菌元件發(fā)出藍色或綠色熒光

4.蘇木精-曙紅染色

*光學顯微鏡下觀察

*適用于所有類型的真菌

*觀察要點：

*無隔菌絲：紅色

*多隔菌絲：藍色

*孢子：紅色或藍色，取決于細胞壁成分

5.PAS染色

*周期酸-希夫染色

*顯示真菌細胞壁中多糖成分

*觀察要點：真菌元件呈紫紅色

6.格羅科特染色

*銀浸染色

*顯示真菌細胞壁中多糖和真菌多糖成分

*觀察要點：真菌元件呈黑色

7.培養(yǎng)

*將標本接種到選擇性培養(yǎng)基，如沙保羅葡糖體瓊脂或尼克森瓊脂

*培養(yǎng)條件：室溫或30-37℃，濕度高

*觀察要點：

*菌落形態(tài)：大小、顏色、質(zhì)地

*真菌分生孢子

*鏡檢培養(yǎng)物以確認真菌種類

8.真菌DNA檢測

*聚合酶鏈反應（PCR）或測序

*通過放大或測序真菌特異性核酸序列來鑒定真菌

*靈敏度和特異性高

診斷標準

*直接鏡檢發(fā)現(xiàn)真菌元件

*培養(yǎng)得到真菌，或通過組氨酸菌素染液檢查或基因檢測鑒定出真菌第八部分皮膚癬菌鏡檢意義關(guān)鍵詞關(guān)鍵要點皮膚真菌鏡檢的診斷價值

1.鏡檢是診斷皮膚癬菌病的最方便、快捷、經(jīng)濟的方法。

2.通過鏡檢可以觀察真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)，