醫(yī)院檢驗科臨床微生物標本的采集、儲存和轉(zhuǎn)運、微生物標本的采集送檢規(guī)范 課件教程

微生物標本的采集、儲存和轉(zhuǎn)運醫(yī)院檢驗科目錄

臨床須重視微生物標本采集及送檢

微生物標本采集送檢基本原則

幾種主要微生物標本的采集送檢規(guī)范衛(wèi)計委強調(diào)提高臨床微生物標本送檢率《2013年抗菌藥物臨床應用專項整治活動方案》明確規(guī)定了住院患者抗菌藥物使用前微生物檢驗樣本送檢率:接受抗菌藥物治療者接受限制使用級抗菌藥物治療者接受特殊使用級抗菌藥物治療者/yzygj/s3585u/201305/823b9d131ff4416ab7b41b2c4e1f0e83.shtml不低于30%不低于50%不低于80%送檢率1標本采集3標本接收處理5標本檢測分析6檢驗數(shù)據(jù)處理8分析前檢驗申請患者準備2標本運送4分析中標本質(zhì)控評價7分析后檢驗結(jié)果審核9檢驗結(jié)果報告10臨床微生物檢驗的具體步驟及分期檢驗報告解讀11臨床科室檢 驗 科分析前標本的質(zhì)量直接影響檢驗結(jié)果

合格的標本是獲得準確檢驗結(jié)果的先決條件。不當?shù)臉吮究蓪е聶z驗結(jié)果的假陰性、假陽性結(jié)果。分析前68.2%分析中

13.3%

研究顯示，影響檢驗結(jié)果準確性的因素中分析前標本質(zhì)量好壞約占70%。分析后18.5%

重視微生物檢驗標本的采集及運送Intermsoftheeffectivenessofthelaboratory,nothingismoreimportantthantheappropriateselection,collection,andhandlingofaspecimenformicrobiologic

diagnosis.──PatrickR.

Murray正確的采集、運送、保存及處理微生物檢驗標本，對于保證臨床微生物檢驗工作質(zhì)量至關重要。為了準確檢出病原菌，避免漏檢及誤診，臨床醫(yī)護人員及實驗室工作人員應掌握微生物檢驗標本采集、運送、保存及處理的一般原則。MurrayPR,,etal.ManualofClinicalMicrobiology,9thEdition.

2007.陳東科，孫長貴

著.實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P129.微生物檢驗的基本原則及時采集微生物標本作病原學檢查在抗菌藥物使用前采集標本采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作采樣后立即送檢標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑送檢標本應注明來源和檢驗目的檢驗申請單即臨床病史美國微生物學會臨床微生物標本送檢指南

第2版

2013P7檢驗申請1應重視檢驗申請單的填寫檢驗申請單填寫須規(guī)范微生物檢驗申請單應包含以下信息：

患者信息：姓名、年齡、門診號/住院號（床號）、臨床診斷

申請人信息：申請科室、申請醫(yī)生

(姓名、工號）

標本信息：標本種類、采集部位、采集時間（日期、時間）、抗菌藥物應用情況

申請信息：申請項目（一般涂片檢查、特殊涂片檢查、培養(yǎng)及鑒定、藥敏檢測--定性

or

定量等）、特殊要求或標注（緊急處理、疑似或明確含有非常危險病原體等）、特殊檢測（PCR、rRND檢測等）美國微生物學會臨床微生物標本送檢指南

第2版

2013P7檢驗申請1

逐一核對：采樣前，必須根據(jù)檢驗申請單中的患者姓名、住院號及臨床診斷等信息，來核對所需采樣的患者；對采樣患者、采樣部位、檢驗申請單、標本容器等，均須逐一確認無誤。

患者準備：一般要求患者處于安靜狀態(tài)、避免劇烈運動；最好停服干擾檢測的藥物或刺激性食物。患者準備201盡 早 采 集03無 菌 操 作04適 量 標 本05適 當 方 法06安 全 采 集02合 適 部 位標本采集3

最好是病程早期、急性期

盡量在抗生素使用之前采集

對已用抗生素又不能停藥者，可在下次用藥前采集，并注明使用的抗生素標本采集31-

盡早采集標本采集重在時效性陳東科，孫長貴

著.

實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P129.注意避免“背景干擾”

無菌標本：注意局部及周圍皮膚的消毒，嚴格進行無菌操作

與外界相通的腔道：標本采集32-合適部

位避開腔道口取標本，以免皮膚表面正常菌群的污染，造成混淆和誤診。

正常菌群寄生部位：采集時應特別小心；應明確檢查的目的菌在進行分離培養(yǎng)時，采用特殊選擇性培養(yǎng)基

血標本采集：應避免輸液的影響。陳東科，孫長貴

著.實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P129.采集標本時應盡量減少或避免感染部位附近皮膚或粘膜常居菌群污染和防止外源性細菌污染標本。

在采集血液、腦脊液、胸腔積液、關節(jié)液等無菌標本時，應注意對局部及周圍皮膚的消毒，嚴格進行無菌操作；

對于采集與外界相通的腔道標本時，如竇道標本，應從竇道底部取活組織檢查，而非從竇道口取標本，以免受皮膚表面正常菌群的污染，造成混淆和誤診；

采集的標本均應盛于無菌容器內(nèi)送檢。盛裝標本的容器須先經(jīng)高壓滅菌、煮沸、干熱等物理方法滅菌，或使用一次性無菌容器，不能用消毒劑或酸類處理。標本中也不得添加防腐劑，一面降低病原菌的分離率標本采集33-

無菌操作陳東科，孫長貴

著.

實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P129.標本采集34-

適量標本

標本采集應足量。標本量過少，可能會導致假陰性結(jié)果。血液標本：通常成人采血量每瓶

8-10ml，兒童每瓶

1-5ml；腦脊液、骨髓、膿腫、穿刺液、引流液、痰液等標本：≥1ml尿液標本：≥3ml糞標本：1-3g

或

1-3ml

結(jié)核標本采集量要求特殊：痰、肺泡灌洗液或支氣管沖洗液：>5ml；清晨中段尿：5-10ml；糞標本：>1g；穿刺液（胸水、腹水、關節(jié)液等）：5-10ml。

標本應具有代表性，同時有些標本還要注意在不同時間采集不同部位標本。陳東科，孫長貴

著.實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P130.周庭銀，倪語星

著.臨床微生物檢驗標準化操作.

第2版.

2010.

P52=57.

根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集：厭氧菌、需氧或兼性厭氧菌，以及L型菌采用的方法不同。用于厭氧菌培養(yǎng)的臨床標本，應盡量用注射器采集抽吸物，一般不要用拭子采集標本（除非是在床邊采樣并立即接種）采集到的厭氧標本應室溫保存，不能冷藏或冷凍。

有些細菌引起的感染，應注意在同時間采集不同部位標本。如傷寒患者，發(fā)病第1周應采集血液，第2周應采集糞便和尿液。否則影響細菌的檢出率。

以拭子采集的標本，如咽拭、肛拭或傷口拭子，易受正常菌群污染，不可置于肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。陳東科，孫長貴

著.

實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P130.標本采集35-

合適方法采集標本時不僅要防止皮膚和黏膜正常菌群對標本的污染。同時也要注意安全，防止傳播和自身感染。

醫(yī)護人員的安全防護：標本采集的所有步驟都必須戴手套、穿工作服，必要時應穿隔離服、戴防護口罩、防護眼鏡；

標本防漏：采集到的原始標本應采用防漏可密封的無菌管或杯盛裝，外加防漏可密封的塑料袋，塑料袋上需注明標本的相關信息。

標本采集所用的帶針頭的注射器不可隨意丟棄，其內(nèi)容物應移至無菌管內(nèi)或用保護性裝置移去針頭，再重新蓋上蓋置于密封、防漏的塑料袋內(nèi)送檢。

已有泄漏的標本容器不能至實驗室或隨意處理。如果要繼續(xù)進行處理，必須通知醫(yī)生關于容器泄漏的情況、解釋如繼續(xù)操作可能對結(jié)果帶來偏差，并要求重新送檢。如果重新送了標本，則對泄漏的標本應進行高壓滅菌后丟棄；若無法重新送檢標本，使用原來標本進行檢驗，則必須在生物安全柜內(nèi)操作。陳東科，孫長貴

著.

實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P130.徐建國等譯.

臨床微生物學手冊

（上冊）.

科學出版社

2005.

P48.標本采集36-

安

全

采

集1-

標本運送的時間要求標本運送4

一般原則：標本采集后應立即送檢，最好在2h內(nèi)送至實驗室，否則會影響病原菌的檢出。一般性細菌培養(yǎng)標本延遲送檢時，應置于4℃冰箱保存，且不得超過24h。臨床標本最佳的運送時間取決于采集的量少量液體（<1ml）或組織（<1cm3）應在15-30’內(nèi)送至實驗室，以免蒸發(fā)、干燥及暴露于周圍環(huán)境。較多量的標本置于運送培養(yǎng)基中可放12-24h。厭氧培養(yǎng)標本原則上應在床邊接種。如延遲送檢，需保存在厭氧運送培養(yǎng)基中，室溫保存，一般不超過24h。陳東科，孫長貴

著.實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P130.徐建國等譯.

臨床微生物學手冊

（上冊）.

科學出版社

2005.

P48.2-

標本運送的保存要求標本運送4

若疑似標本中有對周圍環(huán)境敏感的微生物，包括淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌和流感嗜血桿菌（低溫易死亡），應立即運送和處理。通常血液、腦脊液、生殖道、眼或內(nèi)耳標本不要冷藏保存。

從一個實驗室運至另一個實驗室的臨床標本及感染性物質(zhì)，不論距離如何，均應嚴格注意標本的包裝，且應注明注意事項。在運送標本及感染物過程中，應采取安全防護措施。用于轉(zhuǎn)運的交通工具上應有生物安全標志。陳東科，孫長貴

著.

實用臨床微生物學檢驗與圖譜.人民衛(wèi)生出版社

2011.

P130-1.徐建國等譯.

臨床微生物學手冊

（上冊）.

科學出版社

2005.

P48.-50保存或介質(zhì)類型標本4℃保存標本25℃保存非防腐活檢組織、支氣管灌洗液、I.V.（靜脈穿刺管）、腦脊液（病毒檢驗）、肺活檢、心包液、痰、尿（全程）腦脊液（細菌檢驗）、滑膜液厭氧運送培養(yǎng)基腹水、羊水、厭氧培養(yǎng)抽吸物、膽汁、盲腸標本、深部損傷物、神隊放線菌的宮內(nèi)節(jié)育器（IUD）、肺吸取物、胎盤（剖宮產(chǎn)取得）、竇道吸取物、組織（手術）、經(jīng)氣管吸取物、尿（恥骨弓上穿刺）直接培養(yǎng)基培養(yǎng)角膜刮片、血培養(yǎng)物、針對博德特菌屬用的RL平板（Regan-Lowe培養(yǎng)基）或BG平板（博-金培養(yǎng)基）、針對淋病奈瑟菌的JEMBEC平板、玻璃體液需氧運送培養(yǎng)基燒傷活檢組織、彎曲菌屬、外耳取材、志賀菌屬、弧菌屬、耶爾森菌屬骨髓、上呼吸道標本、宮頸分泌物、關節(jié)液、結(jié)膜拭子、內(nèi)耳取材、生殖器標本、鼻咽標本、博德特菌屬、奈瑟菌屬、沙門菌屬、幫桿菌屬3-

標本運送的保存條件標本運送4徐建國等譯.臨床微生物學手冊

（上冊）.

科學出版社

2005.

P51.常見微生物標本拒收原因及處理方式周庭銀，倪語星

著.

臨床微生物檢驗標準化操作.

第2版.2010.

P60.拒絕原因處理方式無標簽非損傷方法獲得的標本（如、痰、糞便等標本），重新送檢損傷方法獲得的標本（如血、腦脊液或組織等），與取樣醫(yī)生協(xié)商后，在處理標本，并在申請單上注明問題所在，記錄所采取的措施送檢延遲（超過規(guī)定時間）提示送檢者拒收原因，并要求重新送檢?；颊呱暾垎紊献⒚鳌皹吮舅蜋z延遲”容器不合適或標本泄漏通知送檢者，并要求重新送檢?；颊呱暾垎紊献⒚鲉栴}所在及所采取的措施標本運送條件不合適（如厭氧條件送檢的標本卻用需氧條件送檢）與送檢者聯(lián)系，注明檢測要求，指出不符合之處，并要求重新送檢同一天內(nèi)同一檢測條件的重復標本（血除外）通知送檢者，指出重復標本，在申請單上注明問題所在標本污染重新采樣標本量不夠重新采樣標本采集細則

細菌性肺炎標本

血流感染標本

泌尿系感染標本

膿液標本標本采集--細菌性肺炎

痰液不是診斷細菌性肺炎的最佳標本，血培養(yǎng)、支氣管肺泡灌洗、氣管吸取物能夠提供更可信的病原菌信息-《臨床微生物標本送檢指南》IDSA/ATS指南CAP

門診治療者:-可不行細菌學檢查

住院患者-應在使用抗菌素之前采取標本-痰涂片意義大HAP

血培養(yǎng)

胸腔積液培養(yǎng)

保護性毛刷

氣管吸取物

支氣管肺泡灌洗液

細菌學診斷應用氣管內(nèi)吸取物、支氣管肺泡灌洗液、保護性毛刷標本定量培養(yǎng)的方法來進行病原學診斷

超過閾值濃度的細菌生長為定義HAP

低于閾值濃度的細菌生長認為屬于定植或污染保護性毛刷

將細胞學檢查用刷裝置插入鏡子開口，并推進

至目視到欲采樣部位時，將刷子推出護套，獲得氣道分泌物

將刷子抽回護套，取出整個毛刷裝置

毛刷獲得的標本在空氣中很快會干燥導致細菌死亡，從而影響檢出率

將刷子頭剪下，放置于1ml液體運送培養(yǎng)基（如生理鹽水和無菌肉湯）

定量培養(yǎng)：103CFU/ml，靈敏度和特異度分別為66±19%和90±15%支氣管肺泡灌洗

為將細胞沖洗出氣管鏡不能到達的小氣道

操作-注入滅菌生理鹽水20ml-負壓吸引收回灌洗液（50-80mmHg）-根據(jù)需要重復上述操作最多5次（100ml），獲得標本40-70ml（一般回收率為40%-70%）*兒科患者只能灌入1~2ml/kg。通常兒童回收量不超過10ml支氣管肺泡灌洗

灌洗液放入無菌管中，將標本送至實驗室

涂片觀察標本質(zhì)量：-<1%的細胞為鱗狀上皮細胞，可接受的標本->1%的細胞為鱗狀上皮細胞，不可接受的標本

定量培養(yǎng)：104CFU/ml，敏感度平均73±18%，特異度82±19%。氣管吸取物

中度污染標本

可通過氣管切開或氣管內(nèi)插管采集標本，但導管插入時必須經(jīng)過正常菌群聚集區(qū)域，從而增加了解釋培養(yǎng)結(jié)果的難度。

定量培養(yǎng)：106CFU/ml，靈敏度達76±9%，特異度75±28%29呼吸道標本的病原學診斷價值檢驗方法定量培養(yǎng)半定量培養(yǎng)靈敏度(%)特異度(%)氣管吸取物106≥3+76±975±28BAL10473±1882±19PSB10366±1990±15肺炎患者：采集血培養(yǎng)

HAP:<25%;CAP:5-16%

血培養(yǎng)與痰培養(yǎng)得到相同菌(無其他部位感染相同菌株)，可確定為肺部感染菌

血培養(yǎng)陽性，但不能通過其他原因解釋，如腹腔感染、導管等，有可能為肺部感染菌31

顯微鏡檢查：取膿性部分涂片，作革蘭染色.

低倍視野下看涂片,

記錄5個視野下平均細胞數(shù)，每低倍鏡視野中鱗狀上皮細胞<10，白細胞>25，為合格下呼吸道標本

對照痰涂片結(jié)果，涂片中所見細菌的量及吞噬細胞內(nèi)是否有細菌等，如發(fā)現(xiàn)酵母樣菌孢子、菌絲或放線菌、奴卡菌等，應予相應報告和繼續(xù)檢查。痰涂片判斷標本合格性以及病原菌不合格痰標本痰標本的正確采集（1）給患者正確的指導：

以晨痰為佳，采集標本前1-2小時不可進食

采集標本前應用清水、冷開水漱口或用牙刷清潔口腔和牙齒

-盡可能在用抗菌藥物之前采集標本

-用力咳出呼吸道深部的痰

-痰液直接吐入無菌容器中痰標本的正確采集（2）

標本量應大于2ml（膿痰除外）

標本應立即送往實驗室，盡快進行涂片和接種

如預計將延遲1-2小時，冷藏標本，以抑制雜菌過度生長，但會導致苛養(yǎng)菌培養(yǎng)陽性率下降

24小時內(nèi)送1份標本即可

應拒收被口腔污染的標本革蘭染色質(zhì)量評價唾 液判斷深部痰標本的指征下呼吸道感染病原學檢測結(jié)果確定有參考意義無意義血或胸液培養(yǎng)到病原菌；合格痰標本培養(yǎng)優(yōu)勢痰培養(yǎng)有上呼吸道正常菌群的細菌（如草綠色鏈球HAP:血、呼吸道分泌物培養(yǎng)菌中度以上生長菌、表皮葡萄球菌、非致一致病原菌（≥3+

）病奈瑟菌、類白喉桿菌等）經(jīng)纖維支氣管鏡或人工氣道合格痰標本細菌少量生長，

但與涂片鏡檢結(jié)果一致（肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌）；吸引的標本培養(yǎng)的病原菌濃痰培養(yǎng)為多種病原菌少量度≥106CFU/ml（半定量培養(yǎng)（>3）生長；2+

）BALF標本≥104

CFU/（+~2+

）3d內(nèi)多次培養(yǎng)到相同細菌防污染毛刷或防污染BALF標本≥103CFU/ml

（+）血培養(yǎng)采集時間3060Time

(min)0菌量體溫采集血培養(yǎng)樣本的最佳時間

盡可能在患者寒戰(zhàn)開始時、發(fā)熱高峰前30-60分鐘內(nèi)采血

一旦懷疑發(fā)生嚴重感染時立即采血

在患者接受抗生素治療前采血

如患者已經(jīng)應用抗菌藥物進行治療，應在下一次用藥之前采血培養(yǎng)40Dunneetal.CUMITECHBloodCulturesIII;1997,ASM

Press

靜脈血

-動脈血標本無優(yōu)勢，采集靜脈血更適宜

中心靜脈導管血-更容易被定植的細菌污染，除非為診斷導管相關性血流感染之用，否則絕不要從導管取血進行培養(yǎng)-出生12小時內(nèi)的新生兒，可從臍導管取血進行培養(yǎng)

每套血培養(yǎng)都要從不同部位穿刺獲得

切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采血采血量<1to10

CFU/mL1to300

CFU/mL

成人:革蘭陰性菌革蘭陽性菌

兒童:75%

的兒童100-1000

CFU/mL

每增加1ml采血量，血培養(yǎng)靈敏度增加3

-

5%BettyA.Forbes,DiagnosticMicrobiology,

1998MermelandMaki,Ann.Intern.Med.:119,

1993采血量Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;

45:3546-3548一套二套三套2瓶4瓶6瓶20ml40ml60ml重復送檢

絕大部分患者可憑臨床癥狀判定菌血癥是否已清除，無需繼續(xù)送檢血培養(yǎng)，例外情況包括：感染性心內(nèi)膜炎患者金黃色葡萄球菌菌血癥患者，如48-72小時后依然存在血培養(yǎng)陽性，則提示可能為復雜性金葡菌菌血癥

真菌血癥患者，采用抗真菌治療，應重復血培養(yǎng)評價真菌清除情況。下列細（真）菌常為真正的致病菌（90%）

金黃色葡萄球菌

大腸埃希菌

銅綠假單胞菌

腸桿菌

肺炎鏈球菌

白色念珠菌下列細菌很少為真正的致病菌（<5%）

棒狀桿菌

痤瘡丙酸桿菌

芽孢桿菌（上述細菌單次分離不做藥敏試驗，所以建議重才復查）讓我們糾結(jié)彷徨的細菌凝固酶陰性葡萄球菌（上述細菌單次分離不做藥敏試驗，所以建議重才復查）血培養(yǎng)污染

如果消毒不嚴格，皮膚表面的細菌可能帶入培養(yǎng)瓶中，導致血培養(yǎng)假陽性

臨床醫(yī)師判斷血培養(yǎng)結(jié)果是感染還是污染非常困難，假陽性可能導致額外的抗生素治療、住院天數(shù)的延長和醫(yī)療費用的增加血培養(yǎng)標準采集流程

第一步：用皂液和流動水/含酒精快速手消進行手衛(wèi)生

第二步：用酒精紗布消毒培養(yǎng)瓶塞，充分待干血培養(yǎng)標準采集流程

第三步：穿刺部位皮膚消毒一步法:洗必泰作用30

s（不適用于2個月以內(nèi)的新生兒）三步法：-70%酒精擦拭靜脈穿刺點，待干-1%-2%碘酊30秒或10%碘伏消毒1.5-2分鐘，待干-從穿刺點向外畫圈消毒,直徑>10cm-70%酒精脫碘血培養(yǎng)標準采集流程

第四步：戴手套如需對穿刺部位進行觸診，戴無菌手套如無需對穿刺部位進行觸診，戴非無菌手套血培養(yǎng)標準采集流程

第五步：抽血血量：用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養(yǎng)瓶-血量充足：先注厭氧瓶，后注需氧瓶-血量不足：優(yōu)先注入需氧瓶，剩余注入?yún)捬跗浚ㄒ蛘婢?、綠膿桿菌、窄食單胞菌多長在需氧瓶內(nèi)）人群需氧厭氧成人10ml10ml新生兒1-2ml不需兒童3-5不需血培養(yǎng)標準采集流程

第六步：混勻血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固（不要大力搖晃）血培養(yǎng)標準采集流程

第七步：從另一部位穿刺采集第二套血培養(yǎng)，方法同前血培養(yǎng)標準采集流程第八步：血培養(yǎng)瓶盡快送實驗室，任何延遲上機將會延遲或阻止檢測細菌的生長血培養(yǎng)瓶保留在室溫，被接種后不得