GBT 40672-2021 臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 抗菌劑敏感試驗(yàn)脫水MH瓊脂和肉湯可接受批標(biāo)準(zhǔn)

brothforantimicrobialsusceptibil國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I Ⅲ 1 1 14MH肉湯的要求 34.1MH肉湯的成分 34.2理化特性 3 44.4結(jié)果解釋 54.5結(jié)果評(píng)價(jià) 55MH瓊脂的要求 65.1MH瓊脂的成分 65.2理化特性 6 75.4結(jié)果解釋 75.5結(jié)果評(píng)價(jià) 9 9附錄A(資料性)MH培養(yǎng)基 附錄B(資料性)質(zhì)控菌株制備 附錄C(資料性)推薦的生產(chǎn)批檢測(cè)數(shù)據(jù)表 附錄D(資料性)標(biāo)簽聲明 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件等同采用ISO/TS16782:2016《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)抗菌劑敏感試驗(yàn)脫水MH瓊脂和肉湯可請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)GB/T40672—2021/IS法最小抑菌濃度(MIC)參考方法(ISO20776-1)的培養(yǎng)基，并且MH瓊脂(MHA)廣泛用于快速生長(zhǎng)細(xì)MH培養(yǎng)基能對(duì)多數(shù)非苛養(yǎng)病原菌提供滿意的生長(zhǎng)條件，具有可接受的批間重現(xiàn)性以及低含量對(duì)磺胺、甲氧芐啶和四環(huán)素的抑制劑，并且?guī)资陙?lái)從此培養(yǎng)基的抗菌劑敏感性試驗(yàn)中已積累了大量試驗(yàn)結(jié)果必須符合每個(gè)抗菌劑和質(zhì)控菌株組合規(guī)定的質(zhì)量控制限值范圍。本文件是部分基于美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)以往兩個(gè)文件在許可下制定的。即CLSI商可采用本文件來(lái)評(píng)價(jià)其脫水MH瓊脂(dMHA)和脫水MH肉湯(dMHB)生產(chǎn)批的性能特征。1抗菌劑敏感試驗(yàn)脫水MH瓊脂和肉湯本文件不闡述添加到培養(yǎng)基中支持苛養(yǎng)菌生長(zhǎng)的添加劑(例如血液或血液制品)(CLSI方infectiousagentsandevaluationofperformanceoBrothmicro-dilutionreferencemethodfrapidlygrowingaerobicba2在規(guī)定的體外試驗(yàn)條件下，在規(guī)定的孵育時(shí)間內(nèi)，能抑制細(xì)菌出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的抗菌劑最低容器加入適當(dāng)體積含有某抗菌劑遞增濃度(通常兩倍)的肉紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)中含有特定量抗菌劑紙片周圍生長(zhǎng)抑制區(qū)的直徑(mm)。3在后一種情況下，最終標(biāo)簽應(yīng)注明肉湯中所含的實(shí)際量。對(duì)于最終測(cè)試，所制備的MHB應(yīng)含有4需要質(zhì)控菌株的一個(gè)小瓶(見(jiàn)4.4)。每個(gè)菌種接種于非選擇性營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上并按照5可接受范圍哌拉西林/他唑巴坦大腸埃希菌替加環(huán)素四環(huán)素甲氧芐啶-磺胺甲惡唑·CLSI或EUCAST還未建立甲氧芐啶-磺胺甲惡唑質(zhì)控范圍。甲氧芐啶-磺胺甲惡唑MIC結(jié)果應(yīng)為≤0.5/9.5mg/L.6——脫水300g牛肉浸液(即2g牛肉浸膏粉);凝固的培養(yǎng)基為淺草黃色、輕微乳白色。平板中培養(yǎng)基厚度應(yīng)均勻，在3.5mm～5.0mm 不同來(lái)源平皿可能直徑不同(在平皿底部的內(nèi)部測(cè)量)。特定厚度需要的瓊脂體積按此公式計(jì)算7GB/T40672—2021/ISO/TS對(duì)諸如鏈球菌和嗜血桿菌屬等苛養(yǎng)微生物的測(cè)試需要添加生長(zhǎng)補(bǔ)充劑(例如血液或血液成分)。如果用符合本文件的MH瓊脂或肉湯測(cè)試苛養(yǎng)微生物，其在添加補(bǔ)充劑后的MIC或抑菌環(huán)直徑應(yīng)落在公布于CLSI?]或EUCAST[3]文件中特定培養(yǎng)基和測(cè)試微生物可接受的質(zhì)量控制范圍內(nèi)。應(yīng)使用紙片擴(kuò)散法評(píng)價(jià)dMHA的生產(chǎn)批。CLSI?]和EUCAST[3]描述了平板制a)5.4所列的每個(gè)微生物抗菌劑組合至少在三個(gè)獨(dú)立平板上測(cè)試一個(gè)濃度的接種量。該微生物抗菌劑組合的列表代表了測(cè)試的最低要求，并包括可能檢測(cè)到培養(yǎng)基特定問(wèn)題的抗菌劑。其他抗菌劑可根據(jù)制造商的判斷進(jìn)行測(cè)試，以確保培養(yǎng)基的一致性能。培養(yǎng)基應(yīng)適合于測(cè)試的b)測(cè)試平板接種前至少2天，解凍每個(gè)需要質(zhì)控菌株的一個(gè)小瓶(如下并見(jiàn)附錄C)。每個(gè)菌種接種于非選擇性營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，在35℃±2℃(CLSI)或35℃±1℃(EUCAST)空氣環(huán)c)每個(gè)質(zhì)控菌株應(yīng)按照最新版CLSI或EUCAST文件描述的方法采用菌落懸浮法制備單一接d)每個(gè)培養(yǎng)基用每個(gè)質(zhì)控菌株培養(yǎng)物的標(biāo)準(zhǔn)接種量接種三個(gè)平行平板，接種懸液調(diào)整后15minf)結(jié)果應(yīng)按制造商的記錄保留政策記錄和維護(hù)。為此目的所建議的數(shù)據(jù)表見(jiàn)附錄C?？山邮芊秶瘘S色葡萄球菌WDCM00034°阿莫西林-克拉維酸510單位四環(huán)素8表2質(zhì)控菌株紙片擴(kuò)散范圍(續(xù))可接受范圍1單位青霉素(芐青霉素)5四環(huán)素2硝基呋喃妥因5甲氧芐啶甲氧芐啶-磺胺甲惡唑5大腸埃希菌WDCM00013阿莫西林-克拉維酸30或55四環(huán)素替加環(huán)素甲氧芐啶-磺胺甲惡唑10或30頭孢他啶5100/10或30/6哌拉西林-他唑巴坦9表2質(zhì)控菌株紙片擴(kuò)散范圍(續(xù))可接受范圍甲氧芐啶-磺胺甲惡唑金黃色葡萄球菌WDCM00211頭孢西丁金黃色葡萄球菌WDCM00212頭孢西丁紙片擴(kuò)散范圍來(lái)自EUCAST質(zhì)控范圍表[3]。檢查來(lái)自EUCAST最新版本的更新范菌WDCM00034的替代菌株?？咕鷦?duì)金黃色葡萄球菌WDCM00131沒(méi)有可接受范圍時(shí)應(yīng)檢測(cè)金黃色葡萄球菌WDCM00034。頭孢西丁代替苯唑西林作為檢測(cè)甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MR唑西林紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)不再推薦。參見(jiàn)CLSI?]或EUCAST[3]文件。甲氧芐啶-磺胺甲惡唑抑菌環(huán)直徑應(yīng)≥20mm。d頭孢西丁抑菌環(huán)直徑應(yīng)≤21mm(CLSI5))。如果所有微生物抗菌劑組合所有性能標(biāo)準(zhǔn)在可接受限值內(nèi)(見(jiàn)5.4)并5.2),制造商可以使用附錄D中給出的標(biāo)簽聲明。制造商應(yīng)設(shè)法使得平均抑菌環(huán)直徑值接近質(zhì)控范圍6用脫水MH肉湯或瓊脂生產(chǎn)批測(cè)試新抗菌劑當(dāng)開(kāi)發(fā)新抗菌劑的體外數(shù)據(jù)時(shí)，應(yīng)使用符合本文件的dMHB或dMHA生產(chǎn)批來(lái)研發(fā)這些新抗菌劑的質(zhì)量控制參數(shù)。dMHB或dMHA生產(chǎn)批與新抗菌劑的試驗(yàn)應(yīng)遵從本文件規(guī)定的程序。對(duì)于dM-HB,應(yīng)檢查離子含量以確定新抗菌劑是否受到培養(yǎng)基中不同于本文件推薦范圍的特定陽(yáng)離子或陰離子或離子濃度影響。這些研究中發(fā)現(xiàn)的其他可能影響體外藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制別。必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行調(diào)整以達(dá)到穩(wěn)定、可重復(fù)的試驗(yàn)結(jié)果。并且這些信息應(yīng)和質(zhì)量控制的人員中交流，包括CLSI抗菌劑敏感性試驗(yàn)分委員會(huì)和EU(資料性)MH培養(yǎng)基脫水MH肉湯的注意事項(xiàng)見(jiàn)表A.1。說(shuō)明特定水平的Ca2+(20mg/L～25mg/L)和Mg2+(10mg/L～12.5mg/L)基于對(duì)銅綠假單胞菌臨床株MH瓊脂和肉湯稀釋的比較研究[16J[17]雖然痕量鋅是生長(zhǎng)所需的，但鋅的質(zhì)量濃度應(yīng)低于3mg/L。以避免假的耐藥解釋[9]。對(duì)于亞胺培南的影響是已知存在的，并且可能適用培養(yǎng)基應(yīng)補(bǔ)充到終濃度50mg/L總Ca2+葉酸途徑抑制劑類(例如磺胺類藥和甲氧芐啶)培養(yǎng)基胸腺嘧啶脫氧核苷質(zhì)量濃度應(yīng)小于0.03mg/L,WDCM00087與甲氧芐啶-磺胺甲惡唑藥敏試驗(yàn)得出結(jié)果<0.5/9.5mg/L來(lái)表明應(yīng)只使用瓊脂稀釋法作為參考方法，因?yàn)槿鉁♂尭拾滨－h(huán)素類(例如替加環(huán)素)應(yīng)使用新鮮制備的測(cè)試培養(yǎng)基(<12h),這通過(guò)檢測(cè)大腸埃希菌WDCM00013和替加環(huán)素獲得的MIC值在可接受的范圍內(nèi)來(lái)確定萬(wàn)星)當(dāng)使用苯唑西林檢測(cè)時(shí)，甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌檢測(cè)需要在肉湯中加入NaCl,終濃度20g/L喹諾酮類人尿中喹諾酮活性研究數(shù)據(jù)表明當(dāng)MH肉湯中鎂濃度在8mmol/L(100mg/L～150mg/L)時(shí)喹諾酮活性會(huì)下降[18]。其他數(shù)據(jù)表明35mg/L~60mg/LMg2+引起幾個(gè)菌種細(xì)菌的MIC增加[19][20]四環(huán)素類MH肉湯添加至50mg/LCa2+和25mg/LMg2+已顯示會(huì)使大腸埃希菌、銅綠假血液成分)[4J[6]脫水MH瓊脂的注意事項(xiàng)見(jiàn)表A.2。表A.2脫水MH瓊脂的注意事項(xiàng)說(shuō)明培養(yǎng)基中應(yīng)具有Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子，其濃度應(yīng)能使銅綠假單胞菌和氨基糖甙類抗菌劑給出的抑菌圈直徑在預(yù)期范圍內(nèi)，可通過(guò)慶大霉素和銅表A.2脫水MH瓊脂的注意事項(xiàng)(續(xù))說(shuō)明雖然痕量鋅是生長(zhǎng)所需的，但培養(yǎng)基鋅的質(zhì)量濃度應(yīng)低于3mg/L。對(duì)于亞胺培南過(guò)量鋅濃度的影響是已知存在的，并且可能適不能使用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)葉酸途徑抑制劑類(例如磺胺類藥和甲氧芐啶)培養(yǎng)基胸腺嘧啶脫氧核苷質(zhì)量濃度應(yīng)小于0.03mg/L,這可通00210與甲氧芐啶-磺胺甲惡唑藥敏試驗(yàn)得到的抑菌環(huán)清晰且過(guò)檢測(cè)糞腸球菌WDCM00087得到的抑菌環(huán)直徑在可接受范圍內(nèi)來(lái)表明甘氨酰環(huán)素類(例如替加環(huán)素)應(yīng)使用新鮮制備的測(cè)試培養(yǎng)基(<12h),這也可適用于此類藥物的其他抗菌劑。痕量錳是生長(zhǎng)所需的，但質(zhì)量濃度應(yīng)低于8mg/L,以避免過(guò)檢測(cè)大腸埃希菌WDCM00013和替加環(huán)素獲得的數(shù)值喹諾酮類數(shù)據(jù)表明鎂濃度在35mg/L～60mg/L時(shí)會(huì)引起抑菌圈直種細(xì)菌的MIC增加[19][20]四環(huán)素類培養(yǎng)基中應(yīng)具有鈣和鎂，其濃度應(yīng)能使銅綠假單胞菌和氨基糖甙類抗菌劑給出的抑菌圈直徑在預(yù)期范圍內(nèi)，可通過(guò)慶大霉素和銅綠假單胞菌WDCM0諸如鏈球菌和嗜血桿菌屬等苛養(yǎng)微生物的測(cè)試需要添加生長(zhǎng)補(bǔ)(資料性)從認(rèn)可的國(guó)家保藏中心菌株獲取的凍干菌株制備貯存菌株。應(yīng)按保藏中心規(guī)定的步驟復(fù)溶菌株，并以對(duì)遺傳變異體的選擇性最小化方式來(lái)保存。如可用，來(lái)自不同如下所列。表B.1所列為本方案的目的所需菌株。編號(hào)金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌WDCM?00034;ATCC25923;NCTC*金黃色葡萄球菌或金黃色葡萄球菌大腸埃希菌WDCM?00025;ATCCF27853;NCTC*12903;糞腸球菌WDCM?00087;ATCCh29212;NCTC*12697或糞腸球菌WDCM*00210;ATCCb331WDCM,世界微生物數(shù)據(jù)中心，。ATCC美國(guó)菌種保藏中心供應(yīng)產(chǎn)品的商標(biāo)，便于此標(biāo)準(zhǔn)使用者的方便給出這個(gè)信息，此標(biāo)準(zhǔn)使用者的方便給出這個(gè)信息，不構(gòu)成ISO對(duì)該產(chǎn)品名稱的背書。可使用如上所列等同產(chǎn)品。dCIP,巴斯德研究院菌種中心，www.pasteur.fr。'CCUG,菌種中心，哥德堡大學(xué)(CultureCollection,UniversityofGoteborg)www.ccug.se。CECT,西班牙典型菌種保藏中心，。要制備的冷凍管數(shù)量),每塊平板分區(qū)劃線以獲取獨(dú)立菌落。按ISO20776-1將平板在空氣環(huán)境下，溫度34℃~37℃孵育18h～24h。物肉湯[胰酶大豆肉湯(TSB)]制備成均一濁度的懸液。將凍存管貯存于60℃或更低溫度。用此法菌種應(yīng)至少存活一年。其他制備貯存菌株的方法如果能提供足夠的存活度和穩(wěn)定參見(jiàn)4.3制備試驗(yàn)接種量。GB/T40672—2021/IS(資料性)推薦的dMHB生產(chǎn)批檢測(cè)數(shù)據(jù)表見(jiàn)表C.1。表C.1推薦的dMHB生產(chǎn)批檢測(cè)數(shù)據(jù)表可接受范圍/(mg/L)123哌拉西林-他唑巴坦大腸埃希菌替加環(huán)素四環(huán)素甲氧芐啶-磺胺甲惡唑GB/T40672—2021/IS范圍會(huì)受到定期更新。范圍更新可檢查從CLSI獲取的M100最新版本。CLSI,950WestValley獲取/ast_of_bacteria/qc_tables/。推薦的dMHA生產(chǎn)批檢測(cè)數(shù)據(jù)表見(jiàn)表C.2。123阿莫西林-克拉維酸510單位四環(huán)素金黃色葡萄球菌WDCM00131青霉素(芐青霉素)1單位5四環(huán)素2表C.2推薦的dMHA生產(chǎn)批檢測(cè)數(shù)據(jù)表(續(xù))123硝基呋喃妥因甲氧芐啶5甲氧芐啶-磺胺甲惡唑5大腸埃希菌WDCM00013阿莫西林-克拉維酸30或55四環(huán)素替加環(huán)素甲氧芐啶-磺胺甲惡唑頭孢他啶10或305哌拉西林-他唑巴坦100/10或甲氧芐啶-磺胺甲惡唑金黃色葡萄球菌WDCM00211范圍會(huì)受到定期更新。范圍更新可檢查從CLSI獲取的M100最新版本。CLSI,950WestRoad,Suite2500,Wayne,獲取/ast_of_bacteria/qc_tables/。GB/T40672—2021/ISO/TS1(資料性)D.1脫水MH肉湯如果所有微生物抗菌劑組合所有性能標(biāo)準(zhǔn)在可接受限值內(nèi)并且所有造商可標(biāo)示該生產(chǎn)批(批號(hào))的dMHB符合本文件抗菌劑敏感試驗(yàn)規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)要求。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)生子的質(zhì)量濃度應(yīng)低于3mg/L。dMHB的測(cè)試證書應(yīng)能被用戶獲取，給出該批次脫水培養(yǎng)基中這些離如果所有微生物抗菌劑組合所有性能標(biāo)準(zhǔn)在可接受限值內(nèi)并且所有造商可標(biāo)示該生產(chǎn)批(批號(hào))的dMHA符合本文件抗菌劑敏感試驗(yàn)規(guī)定的性能標(biāo)準(zhǔn)要求?！氨九蚊撍甅H瓊脂/肉湯已按照GB/T40672/ISO/TS16782檢測(cè)并符合GB/T40672/[1]CLSI.ProtocolsforEvSecondedition.CLSIdocumentM6-A2.Wayn[2]NCCLS.EvaluationofLotsofDehydratedMueller-HintonBrothforAntimicrobialSuscep-tibilityTesting;ProposedGuideline.NCCLSdocumentM32-P.Wayne,P(forlatestversion,see/ast_of_bacteria/disk_[4]EuropeanCommitteeonAntimicrobialSusceptibiinhibitoryconcentrations(MICs)ofantibacterialagentsbyagardilution,EUCASTDefinitiveDocu-mentE.Def3.1.2000,9pp.509-515ard—TwelfthEdition.[6]CLSI.MethodsforDilutionAntimicrobialSuscepobically;ApprovedStandard—TenthEditiLaboratoryStandardsInstitut[7]MuellerJ.H.,&HintonJ.Aprotein-freemediumandmeningococcus.Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1941,48[8]VeenemansJ.,MoutonJ.W.,KluytmansJ.A.J.W.,DonPHJ.Effectofmanganeseintestmediaoninvitrosusceptibbacterbaumanniitotigecycline.J.Clin.Microbiol.2012,50pp.3077-3079[9]DalyJ.S.,DodgeR.A.,GlewR.H.,SojaD.T.,DeLucaB.A.,HebcentrationinMueller-HintonagaronsusceptibilityofPseMicrobiol.1997,35pp.102[10]MorrisonG.H.CriticalReviewsinAnalytica[11]FuchsP.C.,Barrycriteria,qualitycontrol,andeffectofcalciumoninvitrpp.51-58[12]FassR.J.,&Barnishtibilitiesofnon-fermentersotherthanPseudomonasaeruginosa.Antimicrob.AgentsChemother[13]SwensonJ.M.,&TrimethoprimbyaBrothMicrodilutionProcedure[14]CLSI.PerformanceStandardsM100S.Wayne,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute;2016.[15]EuropeanCommitteeonAntimicrobialSusc