加味桃紅四物湯含量測(cè)定、指紋圖譜以及抗氧化活性研究

背景介紹桃紅四物湯（TaohongSiwuDecoction，TSD）由紅花、桃仁、當(dāng)歸、白芍、川芎、地黃6味藥材組成，具有活血祛瘀、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效。近年來(lái)隨著對(duì)該方藥理作用的深入研究，發(fā)現(xiàn)除傳統(tǒng)功效之外，桃紅四物湯還可表現(xiàn)出一定的神經(jīng)保護(hù)、抗炎、降血脂等作用。除此之外，桃紅四物湯可表現(xiàn)出一定的抗氧化活性，其中的芳香酸類(lèi)及其苷類(lèi)成分被認(rèn)為是桃紅四物湯發(fā)揮抗氧化作用的主要效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)。本文亮點(diǎn)1建立了加味桃紅四物湯的HPLC指紋圖譜，指認(rèn)并測(cè)定沒(méi)食子酸、苦杏仁苷、綠原酸等12種成分的含量，結(jié)果表明分離良好，化學(xué)成分信息豐富；2評(píng)價(jià)其抗氧化活性，為經(jīng)典名方桃紅四物湯在傳統(tǒng)功效之外的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。內(nèi)容介紹1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑1.2

色譜條件1.3

混合對(duì)照品溶液分別取1～12號(hào)成分對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品（沒(méi)食子酸、苦杏仁苷、綠原酸、芍藥內(nèi)酯苷、羥基紅花黃色素A、芍藥苷、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、毛蕊花糖苷、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋(píng)果酸酯、苯甲酰芍藥苷、藁本內(nèi)酯）適量，精密稱(chēng)取后置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容，分別得到質(zhì)量濃度為3.33、5.72、2.86、3.16、2.68、3.33、3.39、3.18、2.95、3.23、3.29、4.00mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。1.4

全方供試品溶液取11.2g加味桃紅四物湯標(biāo)準(zhǔn)煎液，將其減壓濃縮后充分干燥，得到5.1g無(wú)流動(dòng)性浸膏。2

結(jié)果與討論2.1

方法學(xué)考察2.1.1

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取加味桃紅四物湯樣品，分別根據(jù)1.4中方法平行制備6份供試品溶液。2.1.2

精密度實(shí)驗(yàn)取加味桃紅四物湯樣品，根據(jù)1.4中方法制得供試品溶液，平行6次注入HPLC色譜儀。2.2

圖譜生成及相似度評(píng)價(jià)根據(jù)1.4中方法制備10批樣品溶液（編號(hào)S1～S10），色譜條件同1.2，記錄圖譜，導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》，采用中位數(shù)法及多點(diǎn)校正，時(shí)間寬度0.1min，生成對(duì)照?qǐng)D譜（見(jiàn)圖1）。圖1

10批樣品HPLC指紋圖譜Fig.1

HPLCfingerprintsfor10batchesofsamples2.3

聚類(lèi)分析使用HeatmapIllustrator軟件，根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果，進(jìn)行聚類(lèi)分析（結(jié)果如圖2所示）。圖2

10批樣品中12種成分含量聚類(lèi)分析熱圖Fig.2

Heatmapvisualizationofclusteranalysisof12componentsin10batchesofsamples2.4

OPLS-DA分析為了進(jìn)一步研究不同批次間12種指標(biāo)成分的具體含量差異，對(duì)樣品測(cè)定結(jié)果進(jìn)行正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA），分析結(jié)果見(jiàn)圖3、4。圖3

10批樣品的OPLS-DA得分圖Fig.3

OPLS-DAscoreplotof10batchesofsamples圖4

12種成分的VIP值Fig.4

VIPvalueof12components3

結(jié)論本研究建立了加味桃紅四物湯HPLC指紋圖譜，同時(shí)測(cè)定了沒(méi)食子酸、苦杏仁苷、綠原酸、芍藥內(nèi)酯苷、羥基紅花黃素色A、芍藥苷、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、毛蕊花糖苷、1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋(píng)果酸酯、苯甲酰芍藥苷、藁本內(nèi)酯的含量，并測(cè)定其抗氧化活性。本方法采用指紋圖譜定性與有效成分定量相結(jié)合，研究結(jié)果表明其分離度良好，化學(xué)成分信息豐富，可