通過技術(shù)研究基因在小麥與葉銹菌互作過程中的反應(yīng)

畢業(yè)論文題目:通過VIGS技術(shù)研究ATG8基因在小麥與葉銹菌互作過程中的HR反映學(xué)院:專業(yè)班級(jí):學(xué)號(hào):學(xué)生姓名:指導(dǎo)教師姓名:指導(dǎo)教師職稱: 二O一二年六月十四日通過VIGS技術(shù)研究ATG8基因在小麥與葉銹菌互作過程中的HR反映摘要:由小麥葉銹菌(Pucciniatriticina)引起的小麥葉銹病在世界各地產(chǎn)麥區(qū)均有發(fā)生。植物抵抗病原體侵入所誘發(fā)的超敏反映在小麥抵抗葉銹菌侵染的過程中占有重要地位。ATG8基因參與了小麥抵抗葉銹菌侵染過程中的自噬發(fā)生,ATG8蛋白家族作為一種已被鑒定的膜結(jié)合蛋白,在自噬功能中具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過VIGS技術(shù)沉默掉小麥中自噬相關(guān)基因ATG8,進(jìn)而運(yùn)用HR熒光染色技術(shù)研究分析在小麥與葉銹菌互作過程中ATG8基因?qū)R反映的影響,為進(jìn)一步探討ATG8基因和自噬功能的研究奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:小麥;葉銹菌;自噬;HR;VIGSThehypersensitiveresponseofATG8geneinWheat-leafRustInteractionresearchingbyVIGStechnologyAbstract:WheatleafrustcausedbyPucciniatriticinaisaseriousandwidelydistributeddiseaseofwheat.TheHypersensitiveReaction(HR)inducedbytheinvasionofpathogensintheplantsplaysaveryimportantpartintheprocessofthewheatresistanttothepathogen.ATG8genesinvolvedintheprocessofautophagyduringwheatresistancetoleafrustinfection.Asaconfirmedmembrane-bindingproteinfamily,ATG8playsanimportantroleintheautophagyfunction.InthisarticleweSilentoutATG8genes,theautophagy-relatedgenesinwheat,viaVGIStechnologyandthenusetheHRfluorescentstainingtechniquetostudytheimpactofATG8genesontheHRresponseinthewheatleafrustinteraction.AndallofthislaidthefoundationforfurtherstudyoftheATG8genesandautophagyfunctions.Keywords:Wheat;leafRust;Autophagy;HR;VIGS1引言 11.1小麥與葉銹菌 11.2PCD 11.2.1PCD與HR 11.2.2自噬 11.3VIGS技術(shù) 21.4本實(shí)驗(yàn)的研究目的 22材料與方法 32.1材料 32.1.1小麥、供試菌與病毒 32.1.2重要試劑及儀器 32.2方法 42.2.1幼苗的培養(yǎng) 42.2.2搖菌提質(zhì)粒 42.2.3酶切線性化 52.2.3接菌 62.2.4取樣 62.2.5HR熒光染色 63結(jié)果 63.1體外轉(zhuǎn)錄結(jié)果檢測(cè)圖 63.2病毒侵染小麥結(jié)果 73.3HR熒光染色結(jié)果 74討論與分析 84.1病毒侵染小麥結(jié)果的分析 84.2HR熒光染色結(jié)果分析 84.3本實(shí)驗(yàn)問題分析 95結(jié)論 91引言1.1小麥與葉銹菌小麥（Triticumaestivum）是世界上分布范圍最廣、栽培面積最大、總產(chǎn)量最高的糧食作物。小麥葉銹菌是一種嚴(yán)格的活體寄生性真菌,同寄主之間存在著高度的小種一品種?；?并在小麥上形成夏孢子和冬孢子,冬孢子萌發(fā)產(chǎn)生擔(dān)孢子。該菌在華北、西北、西南、中南等廣大麥區(qū)的自生麥和晚熟春麥上以夏孢子連續(xù)侵染的方式越夏,秋季就近侵染秋苗,并向鄰近地區(qū)傳播,其越冬形式和越冬條件與條銹病類似。該菌夏孢子萌發(fā)后產(chǎn)生芽管從葉片氣孔侵入,氣溫20—25℃經(jīng)6天潛育,在葉面上產(chǎn)生夏孢子堆和夏孢子,進(jìn)行多次反復(fù)侵染[1,2]。1.2PCD1.2.1PCD與HR程序性細(xì)胞死亡（ProgrammedCellDeath,PCD）是有機(jī)體在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過程中發(fā)展起來的細(xì)胞自殺機(jī)制,在生物體生長(zhǎng)發(fā)育、清除無用、多余或癌變的細(xì)胞,維持機(jī)體內(nèi)物質(zhì)循環(huán)及環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。PCD最早在動(dòng)物中研究發(fā)現(xiàn),是生物體生長(zhǎng)發(fā)育到一定階段,在特定組織器官中出現(xiàn)的一種積極的、由特定基因控制的生理性細(xì)胞死亡[3,4]。由于植物生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特殊性,植物細(xì)胞PCD的研究起步較晚。1994年Greenberg等初次提出在植物抵抗病原體侵入所誘發(fā)的超敏反映(HypersensitiveReaction,HR)中也存在著類似動(dòng)物細(xì)胞程序性死亡的現(xiàn)象[5,6]。HR即過敏性壞死反映是植物基本的抗病反映,特點(diǎn)是當(dāng)寄主植物受到病原物侵染時(shí),在侵人點(diǎn)周邊的少數(shù)細(xì)胞迅速死亡,產(chǎn)生枯斑,從而限制病原物擴(kuò)展、蔓延的一種積極防衛(wèi)反映[7]?，F(xiàn)在人們習(xí)慣上都把HR歸為PCD的重要表現(xiàn)形式之一,并以HR-PCD表達(dá)。雖然HR的形態(tài)特性已經(jīng)被詳盡描述了,但PCD的誘發(fā)和終止機(jī)制目前還不清楚。在侵染部位形成的HR-PCD必須通過專門的機(jī)制被精細(xì)的控制,從而使寄主的損傷控制到最小。而對(duì)于HR-PCD誘發(fā)和控制的理解,絕大部分來自枯斑模擬突變體的研究[8]。PCD分為兩種類型:I型細(xì)胞死亡即是指細(xì)胞凋亡；II型細(xì)胞死亡則是自噬性細(xì)胞死亡（Autophagiccelldeath）[9]。1.2.2自噬自噬（Autophagy）,指細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)缺少或應(yīng)激條件下,通過降解細(xì)胞內(nèi)衰老的長(zhǎng)壽命蛋白質(zhì)、受損傷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器,為細(xì)胞的重建、再生和修復(fù)提供必需原料,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的再循環(huán)和再運(yùn)用,是生物體一種重要的防御和保護(hù)機(jī)制[10]。自噬重要分為三種類型:巨型自體吞噬(Macroautophagy),微型自體吞噬(Microautophagy)和分子伴侶介導(dǎo)自噬(Chaperonmediatedautophagy)。而在植物中目前擬定的自噬機(jī)制涉及巨自噬（Macroautophagy）和微自噬（Microautophagy）兩種。目前,研究最廣泛最重要的自噬形式是巨自噬[11]。自噬的形成過程可劃分為4個(gè)重要階段,即誘導(dǎo)、自噬小泡的形成、自噬小泡辨認(rèn)并與液泡(溶酶體)融合,以及自噬小體的降解。一方面,細(xì)胞接受到自噬誘導(dǎo)信號(hào)后(饑餓條件或營(yíng)養(yǎng)因子缺少),在細(xì)胞漿中產(chǎn)成相稱量的游離扁平的雙層膜結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)類似“脂質(zhì)體”,被稱作隔離膜,圍繞在被降解物的周邊。另一方面,隔離膜不斷延伸,將胞漿完全包繞起來,涉及細(xì)胞器等,形成密閉的球狀的自噬體。然后,自噬體形成后,可與細(xì)胞內(nèi)吞的內(nèi)吞泡、吞飲泡在體內(nèi)融合。最后,自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體,在此期間自噬體的內(nèi)膜被溶酶體酶降解,兩者的內(nèi)容物合為一體,同時(shí)自噬體中的降解物被降解,產(chǎn)物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中供細(xì)胞重新運(yùn)用,而殘?jiān)虮慌懦鲶w外或滯留在胞漿中。1.3VIGS技術(shù)病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VirusInducedGeneSilencing,VIGS)屬于轉(zhuǎn)錄后的基因沉默,指攜帶植物功能基因cDNA片段的重組病毒,在侵染植物體后誘導(dǎo)植物發(fā)生基因沉默而出現(xiàn)表型突變,可以通過植物表型或生理指標(biāo)上的變化來反映該基因的功能[12]。VIGS技術(shù)現(xiàn)已被開發(fā)為快速鑒定植物基因功能的一種反向遺傳學(xué)新技術(shù)。BSMV是最早成功應(yīng)用于單子葉植物(大麥和小麥)基因沉默的VIGS載體。八氫番茄紅素脫氫酶(Phytoenedesacturase,PDS)是類胡蘿卜素合成所必需的酶,其相應(yīng)的基因常作為VIGS體系的指示基因[13]。VIGS與動(dòng)物RNAi機(jī)理上有許多相似之處。VIGS啟動(dòng)時(shí)一般先形成雙鏈RNA(doublestrandedRNA,dsRNA),dsRNA被類似動(dòng)物Dicer、稱為Dicerlike(DCL)的RNaseIII酶切割約為21224nt的siRNA(shortinterferingRNA),siRNA作為VIGS促發(fā)因子以單鏈形式與Argonaute(AGO)RNA結(jié)合蛋白以及其他RNase結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNAInducedSilencingComplex,RISC),這一RISC復(fù)合體可以特異地與同源的靶標(biāo)mRNA結(jié)合,并降解這些靶標(biāo)mRNA[14,15]。VIGS誘導(dǎo)基因沉默的機(jī)制非常復(fù)雜。它因所使用的病毒載體的類型和宿主,甚至特定的靶基因片斷不同而產(chǎn)生不同的效果。沉默過程中病毒對(duì)靶基因沉默效率的影響也因具體的體系不同而有明顯差異[16]?；谒查g表達(dá)的VIGS技術(shù),為植物功能基因組的研究提供了一個(gè)高通量分析的技術(shù)平臺(tái)。隨著越來越多的基因組序列的測(cè)定,與傳統(tǒng)的研究基因功能的方法相結(jié)合,VIGS將在植物基因功能研究中廣泛的應(yīng)用[17,18]。1.4本實(shí)驗(yàn)的研究目的本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期以來從事小麥抗葉銹菌侵染生理機(jī)制的研究工作,前期工作基礎(chǔ)條件優(yōu)越,研究技術(shù)有保證,跟蹤國(guó)內(nèi)外研究前沿,至今已積累了大量的文獻(xiàn)資料,并在前期實(shí)驗(yàn)中純熟運(yùn)用VIGS、HR熒光染色等技術(shù),得到了很多關(guān)鍵的結(jié)果。并已知ATG8基因是自噬過程中的重要功能基因。而本實(shí)驗(yàn)重要研究小麥與葉銹菌互作過程中自噬與HR-PCD的關(guān)系。通過采用VIGS技術(shù)沉默掉自噬相關(guān)基因ATG8,然后運(yùn)用HR熒光染色技術(shù)將樣品染色,并將供試組樣品的HR-PCD面積和數(shù)量與對(duì)照進(jìn)行比較,觀測(cè)基因沉默前后變化情況來擬定自噬對(duì)HR-PCD中的影響。2材料與方法2.1材料2.1.1小麥、供試菌與病毒本實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)采用小麥（TriticumaesetrumL.）品種洛夫林10（Lovrin10）。供試菌種為小麥葉銹菌（Pucciniatriticina）生理小種260（單孢菌系繁殖）。洛夫林10與葉銹菌小種組成不親和組合。大腸桿菌DH5α。2.1.2重要試劑及儀器重要試劑:甲醇、氯仿、乳酚油（苯酚20g、20﹪甘油40mL、乳酸20mL、水20mL）、95%乙醇、50%乙醇、0.5M氫氧化鈉（NaOH2g水100mL）、Tris-Hcl緩沖液（PH8.5）、0.1﹪FlorensentBnghthener（FB）、25﹪甘油、北京TransGenBiotech有限公司的EasyPureTMPlasmidMiniPrepKit、TaKaRaBiotechnology公司的SpeⅠ酶和MulⅠ酶、Ambion公司的mMESSAGEmMACHINE

T7轉(zhuǎn)錄試劑盒10×GD.FES根據(jù)下表配制VIGS藥品,如下：表110×GD的配制Tab.1Protocolof10×GD組分加入量Glycine18.77gK2HPO426.13gddH2O用于定容總體積500mL用ddH2O將配制的藥品定容止500mL,然后高壓滅菌20分鐘。表2FES的配制Tab.2ProtocolofFBS組分加入量10×GD50mLSodiumPyrophate（焦磷酸）2.5gBentonite（皂粘土）2.5gGelite545AWCourse（硅藻土）2.5gddH2O用于定容總體積250mL用ddH2O將配制的藥品定容止250mL,高壓滅菌20分鐘。用品與儀器:離心機(jī)、水浴鍋、安瓿瓶、電子天平、磁力加熱攪拌器、熒光顯微鏡、小型離心機(jī)、861旋渦混合器、DYY-2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、pH計(jì)、全套微量移液器、超低溫冰箱、制冰機(jī)2.2方法2.2.1幼苗的培養(yǎng)先將小麥種子在一定的溫度與濕度下催芽一夜,然后選取飽滿健碩且萌發(fā)一致的種子播于直徑15cm的花盆中,每盆種12-16粒種子,覆蓋薄薄一層細(xì)土,將花盆放于人工氣候培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng),晝夜溫度25/20攝氏度,光照周期14h/d,日光型鏑燈照射,光照強(qiáng)度400W/m2,培養(yǎng)至一葉一心時(shí)期,進(jìn)行病毒感染。2.2.2搖菌提質(zhì)粒將具有目的基因載體的大腸桿菌在培養(yǎng)基中搖菌過夜,按照TransGenBiotech公司的EasyPureTMPlasmidMiniPrepKit的操作環(huán)節(jié)提取質(zhì)粒。環(huán)節(jié)如下:取1.5mL過夜培養(yǎng)的細(xì)菌10000×g離心1min,盡量吸盡上清。加入250μL無色溶液RB（含RNaseA）,震蕩懸浮細(xì)菌沉淀,不應(yīng)留有小的菌塊。加入250μL藍(lán)色溶液LB,溫和的上下翻轉(zhuǎn)混合4-6次,使菌體充足裂解,（形成藍(lán)色的透亮的溶液,顏色有半透亮變?yōu)橥噶了{(lán)色,指示完全裂解,不宜超過5min）。加入350μL黃色溶液NB,輕輕地混合5-6次（顏色由藍(lán)色完全變?yōu)辄S色,指示完全混合均勻,中和完全）,直至形成緊實(shí)的黃色凝集塊,室溫靜置2min。15000×g離心6min,小心吸取上清加入吸附柱中。15000×g離心1min,棄去流出液。加入650μL溶液WB,15000×g離心1min,棄去流出液。15000×g離心1-2min,徹底去除殘余的WB。將吸附柱放于干凈的離心管中,在柱的中央加入30-50μLEB或去離子水（pH>7.0）室溫靜置1min。10000×g離心1min,洗脫DNA于-20℃保存。2.2.3酶切線性化將上一步提出的質(zhì)粒中BSMV-α,BSMV-γ0,BSMV:PDS和BSMV:ATG8用MluⅠ進(jìn)行酶切線性化,BSMV-β用SpeⅠ進(jìn)行酶切線性化。酶切體系如下:表3酶切體系的配制Tab.3Protocolofdigestionsystem組分加入體積SpeⅠ/MulⅠ2.5μL質(zhì)粒提取液9μL10×MBuffer5μL滅菌水33.5μL總體積50μL離心混勻,37℃水浴2h。2.2.4體外轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)染參照試劑盒說明書進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄體系如下:表4體外轉(zhuǎn)錄體系的配制Tab.4Protocolofinvitrotranscriptionsystem組分加入體積NTP10μL10×MBuffer2μLDNA6μL酶2μL總體積20μL離心混勻,37℃水浴2h。取5μL的轉(zhuǎn)錄后的體系進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),剩余溶液分裝,用于后續(xù)轉(zhuǎn)染。在幼苗生長(zhǎng)7d后（第一片真葉完全展開時(shí)）,各取2μL的BSMV-α、BSMV-β和BSMV:ATG8等量混合于19.5μL的FES,用手將混合后的溶液均勻涂抹于幼苗的第2和第1葉片上,再向葉面均勻噴霧,然后將幼苗置于保濕箱中黑暗保濕12-14h后,移入培養(yǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。同理,各取2μL的BSMV-α、BSMV-β和BSMV:PDS等量混合于19.5μL的FES,和各取2μL的BSMV-α、BSMV-β和BSMV:γ0等量混合于19.5μL的FES,用手分別將混合后的溶液均勻涂抹于兩組幼苗的第2和第1葉片上,再向葉面均勻噴霧,然后將幼苗置于保濕箱中黑暗保濕12-14h后,移入培養(yǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。2.2.5接菌在幼苗接病毒10d后,用毛筆蘸取葉銹菌夏孢子粉,均勻涂于葉表,再向葉面均勻噴霧,然后將幼苗置于保濕箱中黑暗保濕16-18h后,移入培養(yǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。2.2.6取樣分別在抹菌后的72h,96h,120h的幼苗上取樣,取幼苗的第一片葉子中間部分,取1.5cm長(zhǎng)的樣品3-5片,放于安瓿瓶中,標(biāo)清時(shí)間與植株抹病毒情況。染色備用。2.2.7HR熒光染色熒光染色壞死細(xì)胞所有環(huán)節(jié)在27℃-29℃下進(jìn)行:將裝有樣品的安瓿瓶中加入1mL的甲醇和2mL的氯仿（視情況而定,體積比1:2）,透明解決6h。轉(zhuǎn)入1mL乳酚油和2mL乙醇（視情況而定,體積比1:2）中煮沸1.5min,為防止暴沸可放入牙簽,放置過夜,整個(gè)過程在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。50﹪乙醇沖洗兩次,每次15min,用蒸餾水迅速?zèng)_洗2-3次,每次10min。放入0.5M的氫氧化鈉中漂白透明兩次,每次15min,用蒸餾水沖洗2-3次,每次10min。將樣品浸入Tris-Hcl緩沖液中浸泡30min,然后將緩沖液去除干凈。用0.1﹪FlorensentBnghthener（FB）染色5min,（FB可回收再運(yùn)用）,迅速轉(zhuǎn)入蒸餾水中,清洗4次,每次清洗10min。轉(zhuǎn)入25﹪甘油中,浸泡30min后,用品有少量乳酚油的甘油作浮載劑制片。在熒光顯微鏡下觀測(cè)樣品。3結(jié)果3.1體外轉(zhuǎn)錄結(jié)果檢測(cè)圖取5μL的轉(zhuǎn)錄后的體系進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果,如圖1所示:M12345M12345目的條帶目的條帶圖SEQ圖表\*ARABIC1轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物電泳分析（1～5表達(dá)α、β、γ0、PDS、ATG8相應(yīng)的條帶）結(jié)果表白體外轉(zhuǎn)錄獲得了目的條帶,可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.2病毒侵染小麥結(jié)果接種葉銹菌生理小種260后120h小麥葉片結(jié)構(gòu)顯示,如圖2所示:ATG8120hγ0120h圖圖2ATG8120h與γ0120h的葉片結(jié)構(gòu)對(duì)比圖（紅框中白斑代表壞死斑）沉默ATG8基因后的小麥經(jīng)葉銹菌生理小種260侵染120h后葉片上出現(xiàn)壞死斑,而γ0病毒轉(zhuǎn)染后的小麥經(jīng)葉銹菌生理小種260侵染120h后葉片上未出現(xiàn)壞死斑。說明帶有目的基因的病毒已轉(zhuǎn)入小麥體內(nèi),可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.3HR熒光染色結(jié)果圖3ATG8圖3ATG8與γ0轉(zhuǎn)染的葉片經(jīng)病毒侵染不同時(shí)間段的HR熒光染色結(jié)果圖（A~C表達(dá)ATG8轉(zhuǎn)染的葉片經(jīng)病毒侵染72h、96h、120h；a~c表達(dá)γ0轉(zhuǎn)染的葉片經(jīng)病毒侵染72h、96h、120h）ＡａＢｃｂＣ4討論與分析4.1病毒侵染小麥結(jié)果的分析由于ATG8基因是重要的自噬功能基因,它的沉默會(huì)限制小麥自噬過程的正常發(fā)生,而由圖可知沉默ATG8基因后的小麥經(jīng)葉銹菌生理小種260侵染120h后葉片上出現(xiàn)壞死斑,而γ0病毒轉(zhuǎn)染后的小麥經(jīng)葉銹菌生理小種260侵染120h后葉片上未出現(xiàn)壞死斑。說明自噬對(duì)HR-PCD有負(fù)調(diào)控作用。因此當(dāng)ATG8基因被沉默后便表現(xiàn)為HR-PCD失控,蔓延到未受感染的正常組織,而由空載病毒轉(zhuǎn)染后小麥自噬過程正常進(jìn)行,因此出現(xiàn)了沉默ATG8基因后的小麥葉片出現(xiàn)的壞死斑而γ0病毒轉(zhuǎn)染后的小麥葉片未出現(xiàn)壞死斑。4.2HR熒光染色結(jié)果分析在72～120h內(nèi),隨著時(shí)間的變化,ATG8被沉默后,葉片上壞死斑數(shù)量逐漸增多,且單個(gè)壞死面積逐漸增大。而γ0病毒轉(zhuǎn)染后的小麥葉片出現(xiàn)的壞死斑數(shù)量少于沉默ATG8基因后的小麥葉片出現(xiàn)的壞死斑數(shù)量,且面積小于沉默ATG8基因后的小麥葉片出現(xiàn)的壞死斑。4.3本實(shí)驗(yàn)問題分析在HR熒光染色結(jié)果中A圖與B圖對(duì)比中,A圖中的壞死斑比B圖中數(shù)量多與理論結(jié)論矛盾,但單個(gè)壞死斑的面積比B圖中小,也許的因素是由于接菌不均勻?qū)е戮慷嘤冢聵悠贰?結(jié)論由于基因ATG8是自噬過程中重要的功能基因,它影響自噬過程的正常進(jìn)行。通過采用VIGS技術(shù)沉默掉自噬相關(guān)基因ATG8,然后將樣品中發(fā)生HR-PCD的面積和數(shù)量與對(duì)照進(jìn)行比較,比較得出結(jié)果為沉默掉自噬相關(guān)基因ATG8后HR-PCD的面積增大且數(shù)量增多,由此表白自噬對(duì)HR-PCD具有負(fù)調(diào)控作用,即當(dāng)ATG8基因被沉默后便表現(xiàn)為HR-PCD失控,從而蔓延到未受感染的正常組織,而由空載病毒轉(zhuǎn)染后小麥自噬過程正常進(jìn)行,HR-PCD被有效控制在侵染點(diǎn)附近。參考文獻(xiàn)[1]楊文香,田平素,黃燕等.小麥葉銹菌離體培養(yǎng)研究[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2023,24(4):58-61.[2]王智折.小麥葉銹菌侵染對(duì)不同抗病性小麥品種的生理生化差異[J].趙可夫,植物抗性生理研究.山東:科技出版社,1992:173-178.[3]張占全,宋水山,張春英等.異三聚體G蛋白參與小麥抗葉銹病反映的研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2023,42(1):117-123.[4]Greenberg,JT,GuoA,etal.Programmedcelldeathinplants:Apathogen-triggeredresponseactivatedcoordinatelywithmultipledefensefunctions[J].Cell,1994,77:551-564.[5]Greenberg,JT.Programmedcelldeathinplants-pathogeninteraction[J].AnnualReviewofPlantPhysiologyandPlantMolecularBiology,19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