新高考新教材2025屆高考生物二輪總復(fù)習(xí)大題分析與表達(dá)練7基因工程類大題突破

大題分析與表達(dá)練7基因工程類大題突破1.新型冠狀病毒主要通過(guò)其表面刺突蛋白(S蛋白)與人體細(xì)胞膜上的ACE2蛋白結(jié)合實(shí)現(xiàn)感染。截至2024年4月12日,中國(guó)成為全球首個(gè)能供應(yīng)三種生產(chǎn)新型冠狀病毒疫苗技術(shù)路途(滅活疫苗、重組蛋白疫苗和腺病毒載體疫苗)的國(guó)家。三種新型冠狀病毒疫苗研發(fā)途徑的技術(shù)原理如下:滅活疫苗是用各種理化方法滅活病原微生物及其代謝物,再通過(guò)純化等步驟制備出相應(yīng)疫苗;重組蛋白疫苗是將病毒的目標(biāo)抗原基因整合到表達(dá)載體中,然后將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)出大量的抗原蛋白,再通過(guò)純化而得到的疫苗;腺病毒載體疫苗是以腺病毒作為載體,將目標(biāo)抗原基因重組到載體病毒基因組中得到的疫苗?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)上述滅活疫苗中的“滅活”是使新型冠狀病毒失去,但并不破壞該病毒的。

(2)制備重組蛋白疫苗和腺病毒載體疫苗均須要獲得S蛋白基因,獲得過(guò)程是提取新型冠狀病毒總RNA,在酶的作用下合成DNA,再接受PCR技術(shù)選擇性擴(kuò)增出S蛋白基因。PCR技術(shù)的前提是要有一段,以便依據(jù)這一序列設(shè)計(jì)出特異性的引物。

(3)腺病毒載體疫苗是將S蛋白基因重組到改造后的腺病毒內(nèi),導(dǎo)入人體,在體內(nèi)產(chǎn)生S蛋白,刺激人體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。改造后的腺病毒載體應(yīng)具備的條件是(答出兩點(diǎn)即可)。與重組蛋白疫苗相比,腺病毒載體疫苗的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在。

(4)腺病毒載體疫苗注入人體后,其發(fā)揮作用的機(jī)理是

。2.基因工程抗體又稱重組抗體,是指利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)編碼抗體的基因按不同須要進(jìn)行加工改造和重新裝配,經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子。下圖為某探討所制備小鼠抗甲型肝炎病毒抗體的流程圖。回答下列問(wèn)題。(1)試驗(yàn)室構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),為保證目的基因與載體的正確連接,過(guò)程①最好選擇的限制酶是。

(2)在重組質(zhì)粒中,目的基因首端的啟動(dòng)子能夠,從而驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄。除啟動(dòng)子之外,重組質(zhì)粒還應(yīng)當(dāng)包含等。

(3)為了篩選出導(dǎo)入目的基因的骨髓瘤細(xì)胞,可以在過(guò)程③的培育液中添加,過(guò)程③所獲得的細(xì)胞具有的特點(diǎn)。

(4)臨床試驗(yàn)發(fā)覺(jué),過(guò)程⑤提取的小鼠抗甲型肝炎病毒抗體具有外源性,簡(jiǎn)潔被人體的免疫系統(tǒng)清除,從而導(dǎo)致其治療效果大大降低。下頁(yè)左上圖抗體中的A區(qū)是與抗原特異性結(jié)合的區(qū)域,B區(qū)是引起人體免疫反應(yīng)的區(qū)域。若要避開(kāi)小鼠抗甲型肝炎病毒抗體被人體免疫系統(tǒng)清除,請(qǐng)?zhí)岢龊侠淼母脑焖悸贰?.某探討小組從土壤中分別獲得能分解纖維素的細(xì)菌(A菌),從A菌中提取出一種纖維素酶基因(CBHⅡ,長(zhǎng)度為1.4kbp)并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后與高效表達(dá)載體pUT質(zhì)粒(長(zhǎng)度約為11.7kbp)連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌,從而獲得分解纖維素實(shí)力更強(qiáng)的工程菌(B菌)?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)采集土樣時(shí),可以選擇樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土,緣由是。采集到的樣品加無(wú)菌水稀釋后(填“須要”或“不須要”)進(jìn)行滅菌處理。

(2)CBHⅡ基因兩端需添加相關(guān)酶切位點(diǎn)才能與圖1所示的pUT質(zhì)粒連接,因此擴(kuò)增CBHⅡ基因時(shí)需在兩種引物上分別添加序列和序列。

限制酶識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)BglⅡA↓GATCTBstEⅡG↓GTAACCSacⅠG↓AGCTCMspⅠC↓CGGBamHⅠG↓GATCC圖1(3)為了鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建勝利,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌,并將其接種在含的培育基中培育,然后提取3個(gè)不同菌落的質(zhì)粒分別進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證,將酶切片段和CBHⅡ基因分別進(jìn)行電泳,結(jié)果如圖2所示。據(jù)此分析,菌落中勝利導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。

圖2(4)為檢測(cè)B菌的纖維素分解實(shí)力,將含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的纖維素的培育基分為3組,一組接種B菌,一組不作處理,一組接種,在相同條件下培育一段時(shí)間,測(cè)定培育基中纖維素含量,結(jié)果如圖3所示,說(shuō)明

。圖34.菊天牛是菊花的主要害蟲(chóng)之一。科研人員將抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)入菊花,培育出抗蟲(chóng)菊花。下圖是獲得轉(zhuǎn)基因菊花的技術(shù)流程圖。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題。注卡那霉素抗性基因(KanR)作為標(biāo)記基因,菊花葉片對(duì)卡那霉素高度敏感。(1)質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體,其化學(xué)本質(zhì)是,基因工程的核心是。

(2)將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌的目的是利用農(nóng)桿菌能夠的特點(diǎn),使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞中,并插入菊花細(xì)胞的上,最終形成轉(zhuǎn)基因植株。生產(chǎn)上常將轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合種植,其目的是

。(3)若利用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因菊花是否含有目的基因,應(yīng)當(dāng)用作為探針;用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需依據(jù)基因兩端的部分堿基序列設(shè)計(jì)特異性引物,若其中一種引物共用了31個(gè),則目的基因最多擴(kuò)增了次。

5.科學(xué)家利用基因編輯技術(shù)將抑癌基因ΔNp63α定點(diǎn)插入小鼠胰腺癌細(xì)胞中,以探討其在胰腺癌細(xì)胞中的作用。詳細(xì)方法是設(shè)計(jì)特定的sgRNA序列,構(gòu)建Cas9-sgRNA質(zhì)粒(如圖甲所示),將其導(dǎo)入胰腺癌細(xì)胞并表達(dá);sgRNA能識(shí)別并結(jié)合胰腺癌細(xì)胞基因組DNA中的特定序列,引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行剪切,使DNA雙鏈斷裂(如圖乙所示);攜帶ANPΔNp63α基因的供體質(zhì)粒與斷裂DNA的高度同源序列(同源臂)發(fā)生互換,從而將ANPΔNp63α基因定點(diǎn)插入胰腺癌細(xì)胞基因組中(如圖丙所示)?；卮鹣铝袉?wèn)題。甲乙丙(1)圖甲所示的Cas9-sgRNA質(zhì)粒中,新霉素抗性基因的作用是,除去圖示結(jié)構(gòu)外,還應(yīng)有的結(jié)構(gòu)是。

(2)Cas9蛋白可對(duì)特定的DNA序列切割,在功能上最接近于酶。將Cas9-sgRNA質(zhì)粒和供體質(zhì)粒導(dǎo)入胰腺癌細(xì)胞的方法是。

(3)若要檢測(cè)ΔNp63α基因是否已導(dǎo)入勝利,可運(yùn)用技術(shù)。被ΔNp63α基因勝利轉(zhuǎn)化的胰腺癌細(xì)胞體外培育時(shí),在細(xì)胞水平上可能發(fā)生的變更有。

(4)在上述基因編輯過(guò)程中,下列核酸序列中應(yīng)已知堿基序列的有。

A.sgRNA識(shí)別序列B.同源臂1C.同源臂2 D.CMV啟動(dòng)子(5)此技術(shù)優(yōu)于傳統(tǒng)基因工程之處在于

。6.生物柴油作為新型能源已經(jīng)成為世界上應(yīng)用廣泛、發(fā)展迅猛的可再生能源之一。探討人員利用基因工程的方法,將油料作物紫蘇的產(chǎn)油基因DGAT1與含有氨芐青霉素抗性基因的pMD克隆質(zhì)粒構(gòu)建pMD-DGAT1重組質(zhì)粒,然后導(dǎo)入大腸桿菌擴(kuò)大培育;再提取出擴(kuò)增的pMD-DGAT1克隆質(zhì)粒,與pBI121空載體同時(shí)用XbaⅠ、BamHⅠ兩種限制酶酶切,構(gòu)建pBI121-DGAT1表達(dá)載體;最終將表達(dá)載體導(dǎo)入四尾柵藻獲得產(chǎn)油微藻,利用地?zé)釓U水培育產(chǎn)油微藻不僅能生產(chǎn)生物柴油,還能治理地?zé)釓U水。回答下列問(wèn)題。(1)提取紫蘇組織細(xì)胞RNA經(jīng)過(guò)得到cDNA,再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到DGAT1基因。在PCR擴(kuò)增之前,須要對(duì)DGAT1基因進(jìn)行一次預(yù)變性的目的是;在擴(kuò)增DGAT1基因時(shí),須要依據(jù)設(shè)計(jì)特異性引物序列。

(2)在配制培育大腸桿菌的培育基時(shí),要在培育基滅菌并冷卻到30℃左右后,加入用無(wú)菌水配制的相宜濃度的氨芐青霉素溶液,氨芐青霉素不能與培育基一同滅菌的緣由可能是

。(3)將DGAT1基因插入pBI121空載體的啟動(dòng)子與終止子之間的目的是。若用DGAT1基因探針檢測(cè)產(chǎn)油微藻,能檢測(cè)到細(xì)胞中的;推斷產(chǎn)油微藻細(xì)胞中DGAT1基因是否勝利表達(dá),須要加入進(jìn)行檢測(cè)。

(4)為檢測(cè)產(chǎn)油微藻對(duì)地?zé)釓U水的去污實(shí)力,探討人員設(shè)計(jì)試驗(yàn)并得到相應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果如下表所示。檢測(cè)指標(biāo)總氮總磷氟化物地?zé)釓U水培育基23.24.324.56培育轉(zhuǎn)基因產(chǎn)油微藻11d后1.90.450.84該試驗(yàn)不能說(shuō)明產(chǎn)油微藻顯著提高了去污實(shí)力,請(qǐng)進(jìn)一步完善試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

。7.探討發(fā)覺(jué),新型冠狀病毒外殼中的S蛋白具有很強(qiáng)的抗原性,可利用其制備單克隆抗體,制備流程如下圖所示,相關(guān)限制酶及其識(shí)別序列如下表所示。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)EcoRⅠG↓AATTCBamHⅠG↓GATCCBglⅡA↓GATCTSalⅠG↓TCGAC(1)人體內(nèi)分泌抗體的細(xì)胞可來(lái)自細(xì)胞的增殖分化。

(2)依據(jù)病毒的結(jié)構(gòu),圖中①過(guò)程常用酶處理,完成②過(guò)程須要的酶是。

(3)檢測(cè)④過(guò)程是否勝利的方法是,⑥過(guò)程常用的方法是。

(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增無(wú)限增殖調(diào)控基因時(shí),科研人員設(shè)計(jì)了如下一對(duì)引物(部分序列):和,其中下劃線部分序列的設(shè)計(jì)依據(jù)是,方框部分序列的設(shè)計(jì)目的是

。(5)抗體可變區(qū)氨基酸的組成和排列依次可隨抗體結(jié)合抗原的特異性不同而有較大的變異,由于可變區(qū)中氨基酸的種類以及排列依次千變?nèi)f化,故可形成很多種具有不同結(jié)合抗原特異性的抗體。為克服鼠源單克隆抗體輸入人體后產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng),科研人員通過(guò)人工改造鼠源單克隆抗體獲得了嵌合抗體。分析下圖,你認(rèn)為最符合臨床要求的嵌合抗體是A~D中的。嵌合抗體的研制屬于這一技術(shù)范疇。

8.番茄果實(shí)后熟問(wèn)題影響番茄的生產(chǎn)、加工和運(yùn)輸。ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的關(guān)鍵酶,科學(xué)家利用反義基因技術(shù)培育出了耐儲(chǔ)存、利于長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)姆研缕贩N,詳細(xì)做法是接受農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將攜帶有反義ACC合成酶基因的重組質(zhì)粒M導(dǎo)入番茄栽培品種中,經(jīng)過(guò)卡那霉素篩選后,獲得番茄新品種。反義基因是指人工合成出的一段與某種基因堿基序列相同的DNA,經(jīng)過(guò)人為操作使之在轉(zhuǎn)錄生成mRNA時(shí),模板鏈與原基因不同?；卮鹣铝袉?wèn)題。(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用的植物種類是。重組質(zhì)粒M中的抗性基因是。

(2)有同學(xué)提出若要提取番茄中限制ACC合成酶的基因,只能利用成熟的番茄組織。你認(rèn)為他的說(shuō)法是否有道理?。作出推斷的依據(jù)是。

(3)ACC合成酶基因在番茄細(xì)胞中表達(dá)的過(guò)程發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的中。反義ACC合成酶基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)后,檢測(cè)發(fā)覺(jué)番茄果實(shí)中乙烯含量顯著降低,推想其機(jī)理最可能是

。

大題分析與表達(dá)練7基因工程類大題突破1.答案(1)感染性抗原結(jié)構(gòu)(2)逆轉(zhuǎn)錄已知S蛋白基因的核苷酸序列(3)具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、能自我復(fù)制(或具有標(biāo)記基因)能夠持續(xù)表達(dá)抗原,免疫應(yīng)答許久(4)腺病毒能夠?qū)蛋白基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中,并在受體細(xì)胞中表達(dá)出S蛋白,作為抗原引起人體的免疫應(yīng)答解析(1)由題干可知,滅活疫苗是用各種理化方法滅活病原微生物及其代謝物,使其漸漸丟失感染性。作為疫苗,要保留有抗原性,以激發(fā)體內(nèi)的特異性免疫,所以并不破壞該病毒的抗原結(jié)構(gòu)。(2)遺傳信息從RNA傳遞到DNA的過(guò)程稱為逆轉(zhuǎn)錄,須要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。PCR技術(shù)的前提條件是要有一段已知目的基因(S蛋白基因)的核苷酸序列,以便依據(jù)這一序列設(shè)計(jì)出特異性的引物。(3)基因工程中載體應(yīng)具備的條件有能自我復(fù)制,有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn),具有標(biāo)記基因,能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,不影響受體細(xì)胞的生命活動(dòng)等。與重組蛋白疫苗相比,腺病毒載體疫苗的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在抗原基因在宿主細(xì)胞內(nèi)能持續(xù)表達(dá)出抗原(即S蛋白),腺病毒載體疫苗一次接種即可獲得長(zhǎng)期免疫力,免疫應(yīng)答更許久。(4)腺病毒載體疫苗注入人體后,其發(fā)揮作用的機(jī)理是重組腺病毒能夠?qū)蛋白基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中,并在受體細(xì)胞中通過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程表達(dá)出S蛋白,作為抗原引起人體的免疫應(yīng)答。2.答案(1)EcoRⅠ和BamHⅠ(2)與RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合終止子、目的基因、標(biāo)記基因(復(fù)制原點(diǎn))(3)(適量的)青霉素既能大量增殖,又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體(抗甲型肝炎病毒抗體)(4)接受蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)小鼠抗甲型肝炎病毒抗體上B區(qū)進(jìn)行改造,或替換成人體相應(yīng)抗體的B區(qū),進(jìn)而降低人體對(duì)該抗體的免疫排斥。解析(1)題圖中EcoRⅤ會(huì)破壞目的基因,故不能用于切割目的基因,目的基因和載體共同含有的限制酶還有EcoRⅠ和BamHⅠ,為了保證目的基因與載體的正確連接,應(yīng)當(dāng)選擇EcoRⅠ和BamHⅠ切割目的基因和載體。(2)目的基因的啟動(dòng)子可以與RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合,驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄。重組質(zhì)粒應(yīng)當(dāng)包含目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。(3)重組質(zhì)粒中含有青霉素抗性基因,故可以在過(guò)程③的培育液中添加青霉素,來(lái)篩選導(dǎo)入目的基因的骨髓瘤細(xì)胞。過(guò)程③所獲得的細(xì)胞是含有目的基因的骨髓瘤細(xì)胞,既能大量增殖,又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的抗甲型肝炎病毒抗體。(4)由于B區(qū)是引起人體免疫反應(yīng)的區(qū)域,若要避開(kāi)小鼠抗甲型肝炎病毒抗體被人體免疫系統(tǒng)清除,可以接受蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)小鼠抗甲型肝炎病毒抗體上B區(qū)進(jìn)行改造,或替換成人體相應(yīng)抗體的B區(qū),進(jìn)而降低人體對(duì)該抗體的免疫排斥。3.答案(1)腐殖土中富含纖維素不須要(2)AGATCTGGTAACC(3)抗生素N2、3(4)A菌B菌分解纖維素的實(shí)力最強(qiáng)解析(1)在自然條件下篩選目的菌,應(yīng)在富含該菌種的環(huán)境中找尋,因腐殖土中富含纖維素,故欲從土壤中分別獲得能分解纖維素的細(xì)菌,應(yīng)選擇樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土;為避開(kāi)目的菌被殺死,采集到的樣品加無(wú)菌水稀釋后不須要進(jìn)行滅菌處理。(2)為保證目的基因能正常表達(dá),目的基因應(yīng)插入啟動(dòng)子和終止子之間,且應(yīng)至少保留一個(gè)標(biāo)記基因,故應(yīng)選擇BglⅡ和BstEⅡ進(jìn)行酶切,故擴(kuò)增CBHⅡ基因時(shí)需在兩種引物上分別添加AGATCT序列和GGTAACC序列。(3)由于用BglⅡ和BstEⅡ進(jìn)行酶切后,抗生素M抗性基因被破壞,故為了鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建勝利,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌,并將其接種在含抗生素N的培育基中培育。由題圖可知,用BglⅡ和BstEⅡ進(jìn)行酶切后,該環(huán)狀DNA應(yīng)得到兩種長(zhǎng)度的片段,而圖2中的2和3酶切片段有兩個(gè),符合題意,故據(jù)此推想,菌落2和3中勝利導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。(4)本試驗(yàn)的目的為檢測(cè)B菌的纖維素分解實(shí)力,則試驗(yàn)的自變量為菌種類型,因變量為纖維素的分解實(shí)力,可用纖維素的剩余量作為檢測(cè)指標(biāo),試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循比照原則與單一變量原則,故將含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的纖維素的培育基分為3組(無(wú)關(guān)變量一樣),一組接種B菌,一組不作處理,一組接種A菌;由題圖3可知,比照組1的纖維素含量最高,B菌的纖維素含量最低,說(shuō)明B菌分解纖維素的實(shí)力最強(qiáng)。4.答案(1)DNA基因表達(dá)載體的構(gòu)建(2)感染菊花細(xì)胞,并將Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞染色體DNA降低害蟲(chóng)種群中抗性基因頻率的增長(zhǎng)速率(3)放射性同位素(或熒光分子)標(biāo)記的抗蟲(chóng)基因5解析(1)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子,其化學(xué)本質(zhì)是DNA,基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(2)依據(jù)農(nóng)桿菌能夠感染菊花細(xì)胞,且農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒中的T-DNA可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上的特點(diǎn),通常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。生產(chǎn)上常將轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合種植,其目的是降低害蟲(chóng)種群中抗性基因頻率的增長(zhǎng)速率。(3)用放射性同位素標(biāo)記的抗蟲(chóng)基因作為探針,用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需依據(jù)基因兩端的部分堿基序列設(shè)計(jì)特異性引物,假設(shè)目的基因擴(kuò)增了n次,則須要引物的對(duì)數(shù)為2n-1,已知其中一種引物共用了31個(gè),則2n-1=31,n=5。5.答案(1)鑒別受體細(xì)胞中是否含有Cas9基因和sgRNA基因,從而將含Cas9基因和sgRNA基因的細(xì)胞篩選出來(lái)終止子(2)限制顯微注射法(3)PCR細(xì)胞停止分裂,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變更,復(fù)原(出現(xiàn))接觸抑制現(xiàn)象(4)ABC(5)可將目的基因定點(diǎn)插入所需位點(diǎn),而不是隨機(jī)插入解析(1)新霉素抗性基因作為標(biāo)記基因,其作用是便于鑒別受體細(xì)胞中是否含有Cas9基因和sgRNA基因,從而將含Cas9基因和sgRNA基因的細(xì)胞篩選出來(lái)?；虮磉_(dá)載體含有復(fù)制原點(diǎn)、啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因,圖甲基因表達(dá)載體中還應(yīng)添加終止子。(2)Cas9蛋白能識(shí)別特定核苷酸序列并在特定位點(diǎn)剪切特定的堿基序列,使磷酸二酯鍵斷裂,由此可見(jiàn),Cas9蛋白在功能上屬于限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)。常常用顯微注射技術(shù)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞,因此將Cas9-sgRNA質(zhì)粒和供體質(zhì)粒導(dǎo)入胰腺癌細(xì)胞的方法是顯微注射法。(3)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞,可接受PCR等技術(shù)。在相宜的條件下進(jìn)行體外培育,癌細(xì)胞能夠無(wú)限增殖。若抑癌基因ΔNp63α定點(diǎn)插入小鼠胰腺癌細(xì)胞中,被ΔNp63α基因勝利轉(zhuǎn)化的胰腺癌細(xì)胞體外培育時(shí),細(xì)胞停止分裂,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變更,復(fù)原(出現(xiàn))接觸抑制現(xiàn)象。(4)題述基因編輯技術(shù)中,sgRNA是依據(jù)靶基因設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA,能精確引導(dǎo)Cas9切割與sgRNA配對(duì)的靶基因DNA序列,堿基序列已知,A項(xiàng)符合題意。由于同源臂與靶基因的DNA正好配對(duì),能將表達(dá)載體精確地帶到靶基因的位置,所以堿基序列已知,B、C兩項(xiàng)符合題意。因?yàn)榛蛑袉?dòng)子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄,所以由基因表達(dá)產(chǎn)物無(wú)法推知啟動(dòng)子堿基序列,D項(xiàng)不符合題意。(5)與傳統(tǒng)的基因工程相比,運(yùn)用基因編輯技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因生物的顯著優(yōu)點(diǎn)是可將目的基因定點(diǎn)插入所需位點(diǎn),避開(kāi)了因目的基因隨機(jī)插入受體細(xì)胞DNA引起的生物平安性問(wèn)題。6.答案(1)逆轉(zhuǎn)錄提高DGAT1基因的變性概率DGAT1基因兩端的核苷酸(或堿基)序列(2)高溫會(huì)破壞氨芐青霉素的結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致其失效(3)保證DGAT1基因能在產(chǎn)油微藻細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄DGAT1基因及其轉(zhuǎn)錄出的mRNADGAT1抗體(4)添加用地?zé)釓U水培育四尾柵藻的比照組,11d后檢測(cè)總氮、總磷和氟化物的含量解析(1)以RNA為模板產(chǎn)生cDNA的過(guò)程是逆轉(zhuǎn)錄;在PCR擴(kuò)增之前,須要對(duì)DGAT1基因進(jìn)行一次預(yù)變性的目的是破壞其中可能存在的較難破壞的二級(jí)結(jié)構(gòu),提高DGAT1基因的變性概率;引物是與模板鏈互補(bǔ)的一段序列,在擴(kuò)增DGAT1基因時(shí),須要依據(jù)DGAT1基因兩端的核苷酸(或堿基)序列設(shè)計(jì)特異性引物序列。(2)氨芐青霉素不耐高溫,高壓滅菌會(huì)破壞氨芐青霉素的結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致其失效。(3)啟動(dòng)子與RNA聚合酶結(jié)合驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄發(fā)生,終止子可使轉(zhuǎn)錄在所須要的地方停下來(lái),所以將DGAT1基因插入pBI121空載體的啟動(dòng)子與終止子之間的目的是保證DGAT1基因能在產(chǎn)油微藻細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄。DGAT1基因探針能與DGAT1基因及其轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成雜交帶,所以可以檢測(cè)到DGAT1基因及其轉(zhuǎn)錄出的mRNA。檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)可用抗原—抗體雜交技術(shù),須要加入DGAT1抗體進(jìn)行檢測(cè)。(4)試驗(yàn)缺少比照組,不能確定受體四尾柵藻本身有無(wú)去污實(shí)力,所以須要增加一組試驗(yàn),即添加用地?zé)釓U水培育四尾柵藻的比照組,11d后檢測(cè)總氮、總磷和氟化物的含量,假如11d后測(cè)得的總氮、總磷和氟化物的含量比培育轉(zhuǎn)基因產(chǎn)油微藻11d后的數(shù)據(jù)高,說(shuō)明轉(zhuǎn)基因產(chǎn)油微藻有去污實(shí)力。7.答案(1)B細(xì)胞和記憶B(2)蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶(3)抗原—抗體雜交顯微注射法(4)介導(dǎo)序列兩端的