基于IEF的蛋白等電點(diǎn)分析

百泰派克生物科技基于IEF的蛋白等電點(diǎn)分析蛋白質(zhì)分子是兩性電解質(zhì)，當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的酸堿度，使蛋白質(zhì)分子上所帶的正負(fù)電荷相等時(shí)，在電場(chǎng)中，該蛋白質(zhì)分子既不向正極移動(dòng)，也不向負(fù)極移動(dòng)，這時(shí)溶液的pH值，就是該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（isoelectricpoint,pI）。蛋白的等電點(diǎn)與其氨基酸序列和三維結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，特定蛋白的等電點(diǎn)是固定的，因此可以通過比較不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)來研究它們的結(jié)構(gòu)和功能差異，精確測(cè)定等電點(diǎn)是生物制品電荷異質(zhì)性表征的重要一環(huán)。等電聚焦（IsoelectricFocusing，IEF）是一種非常有效的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)分析技術(shù)。其利用等電點(diǎn)處的蛋白質(zhì)電荷為零的特性，帶電的蛋白質(zhì)在電泳中向極性相反的方向遷移，當(dāng)?shù)竭_(dá)其等電點(diǎn)（此處的pH值使相應(yīng)的蛋白質(zhì)不再帶電荷）時(shí)，電流達(dá)到最小，不再移動(dòng)，從而達(dá)到檢測(cè)生物制品等電點(diǎn)的目的。百泰派克生物科技（BTP）通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量認(rèn)證體系；公司根據(jù)IEF原理，建立了針對(duì)于不同類別生物制品的蛋白等電點(diǎn)檢測(cè)平臺(tái)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白、抗體、疫苗、多肽、膠原蛋白等的等電點(diǎn)精確測(cè)定。實(shí)驗(yàn)儀器GE公司的EttanIPGphor3。技術(shù)應(yīng)用基于cIEF的等電點(diǎn)分析，檢測(cè)器采集280nm處的吸收峰。對(duì)于280nm處無吸收峰的生物制品，例如膠原蛋白，cIEF的方法顯然不太合適?；贗EF的方法是對(duì)280nm處無吸收峰蛋白等電點(diǎn)檢測(cè)的有效補(bǔ)充，并在膠原蛋白類生物制品和醫(yī)療器械表征中得到廣泛應(yīng)用。案例示意實(shí)驗(yàn)過程中，一根膠條用來測(cè)試Marker，對(duì)預(yù)制膠條的pI分布情況進(jìn)行校準(zhǔn)，另外一根膠條用來測(cè)試樣品；兩個(gè)膠條同時(shí)進(jìn)行等電聚焦以減少系統(tǒng)誤差。左邊為pImarker結(jié)果，右邊為膠原蛋白樣品結(jié)果。典型問答問題1：為什么多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)是中性偏酸性？回答：蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的，而大多數(shù)氨基酸等電點(diǎn)小于人體的pH（pH=7.4），故而大多數(shù)的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)偏酸性，如山羊胃蛋白酶等電點(diǎn)約為3。問題2：有沒有等電點(diǎn)偏堿性的蛋白質(zhì)？回答：存在pI堿性的蛋白質(zhì)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)中的堿性氨基酸，如組氨酸，精氨酸、賴氨酸、比列較大，會(huì)導(dǎo)致等電點(diǎn)偏堿性，如魚精蛋白等電點(diǎn)約為12。問題3：做等電點(diǎn)檢測(cè)，兩種檢測(cè)方法如何選擇？回答：基于CIEF的等電點(diǎn)檢測(cè)需要樣品具有280nm的紫外吸收；不具有280nm的紫外吸收的樣品（例如膠原蛋白）進(jìn)行基于IEF的等電點(diǎn)檢測(cè)。中/英文項(xiàng)目報(bào)告在技術(shù)報(bào)告中，百泰派克會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語版技術(shù)報(bào)告，報(bào)告包括：1.實(shí)驗(yàn)步驟（中英文）。2.相關(guān)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)（中英文）。3.基于IEF的蛋白等電點(diǎn)分析詳細(xì)信息。4.電泳圖片。5.原始數(shù)據(jù)。基于I