TNAIA 0294-2024 葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素的測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS67.160.10CCSC151T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0294—20247高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法SimultaneousDeterminationofSevenAlternariaToxinsResiduesinWinebyHPLC-MS/MS2024-05-31發(fā)布 2024-06-10實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0294—2024T/NAIA0294—2024前 言GB/T1.1-20201編寫(xiě)。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：寧夏回族自治區(qū)食品檢測(cè)研究院（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（枸杞和葡萄酒質(zhì)量安全））、寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)、北方民族大學(xué)、寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所、銀川海關(guān)技術(shù)中心。本文件主要起草人：馬桂娟、朱燕燕、馬雪梅、卜春苗、李強(qiáng)、郭陽(yáng)、劉競(jìng)擇、楊春霞、王芳煥、張小飛。本文件為首次發(fā)布。IPAGEPAGE1PAGEPAGE2萄酒中7種鏈格孢霉毒素的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素（番茄交鏈孢菌毒素、交鏈孢烯、交鏈孢毒素I、鏈格孢酚單甲醚、細(xì)交鏈孢菌酮酸、交鏈孢酚、騰毒素）的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。本文件適用葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素的測(cè)定和確證。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法LS/T6133-2018 16種真菌毒素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法T/AFFI038-2023葡萄干中8種真菌毒素殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理試樣經(jīng)甲酸乙腈溶液超聲提取，QuEChERS法凈化后，經(jīng)反相色譜柱分離，以保留時(shí)間定性，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定和確證，外標(biāo)法定量。試劑和材料本方法所用的試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈：色譜純。甲醇：色譜純。甲酸：優(yōu)級(jí)純。氯化鈉：優(yōu)級(jí)純。無(wú)水硫酸鎂粉末。十八烷基（C18）粉末。N-丙基乙二胺（PSA）粉末。1%1mL100mL。50%50mL50mL水混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)品T/NAIA0294—2024T/NAIA0294—2024T/NAIA0294—2024T/NAIA0294—2024標(biāo)準(zhǔn)品：番茄交鏈孢菌毒素（AAL，CAS79367-52-5）、交鏈孢烯（ALT，CAS號(hào)29752-43-0）I（ATX-1，CAS56258-32-3）、鏈格孢酚單甲醚（AME，CAS號(hào)26894-49-5）、細(xì)交鏈孢菌酮酸（TEACAS610-88-8）、交鏈孢酚（AOHCAS號(hào)641-38-3）、騰毒素（TEN，CAS28540-82-1）。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100.0μg/mL）7種鏈格孢霉毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，分別用乙腈溶100.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-20℃避光貯存。71.0mL10mL容量瓶中，乙10.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于-20℃避光貯存。7種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取不同體積混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用空白葡萄酒基質(zhì)定1.0mL7種鏈格孢霉毒素的濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，臨用現(xiàn)配。儀器和設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源。0.1mg0.01g。渦旋混合器。10000r/min。超聲波發(fā)生器。氮吹儀。分析步驟試液的提取10g（0.01mg）50mL10mL1%甲5g10min，8000r/min5min6mL150mg，C1850mgN-丙基乙二胺（PSA）50mg的凈化管中，經(jīng)渦旋2.0mL45℃50%2.0mL0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。儀器參考條件液相色譜參考條件C18，2.1mm×100mm1.7μm或性能相當(dāng)。柱溫：25℃。流動(dòng)相：A-水（0.1%甲酸），B-1。流速：0.25mL/min。進(jìn)樣量：5μL。PAGEPAGE3PAGEPAGE4表1 流動(dòng)相及梯度洗脫條件時(shí)間/min流速/（mL/min）流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0.000.2590101.000.2585152.000.2580208.000.25406013.000.25178315.000.2559515.100.25901018.000.259010質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI）。掃描方式：正離子掃描和負(fù)離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。脫溶劑氣溫度：325℃。脫溶劑氣流速：800L/Hr。錐孔流速：150L/Hr。定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞能量等參數(shù)參見(jiàn)附錄A。定量測(cè)定7.2.17.2.227的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）B，采用基質(zhì)溶液校準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。表2 參考保留時(shí)間被測(cè)物名稱保留時(shí)間/（min）番茄交鏈孢菌毒素（AAL）3.89交鏈孢烯（ALT）4.17交鏈孢毒素I（ATX-1）4.37鏈格孢酚單甲醚（AME）5.87細(xì)交鏈孢菌酮酸（TEA）8.13交鏈孢酚（AOH）8.99騰毒素（TEN）9.54定性測(cè)定許偏差之內(nèi)（3），則可判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。表3 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≤10%允許的相對(duì)偏差±20%±25%±30%±50%空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。分析結(jié)果的表述試樣中7種鏈格孢霉毒素的含量按式（1）進(jìn)行計(jì)算：X cV

……（1）式中：

m 1000X ──試樣中各種化合物含量，單位為微克每千克（μg/kg）；c ──由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的試樣溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V ──試樣的最后定容體積，單位為毫升（mL）；m ──試樣質(zhì)量，單位為克（g）。注：測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算數(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性測(cè)定條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。其他10g10mL（AAL）、交鏈孢烯（ALT）、交鏈I（ATX-1）、細(xì)交鏈孢菌酮酸（TEA）、鏈格孢酚單甲醚（AME）、交鏈孢酚（AOH）、騰毒素（TEN）1.0μg/kg0.4μg/kg。附錄A(資料性)7種鏈格孢霉毒素的質(zhì)譜參數(shù)表A.1 7種鏈格孢霉毒素的質(zhì)譜參數(shù)被測(cè)物名稱母離子(m/z)子離子(m/z)錐孔電壓/V碰撞電壓/V（AAL）522.5340.05024408.05016交鏈孢烯（ALT）293.0229.03320239.03325交鏈孢毒素I（ATX-1）351.0315.07318333.07314鏈格孢酚單甲醚（AME）271.1228.03030256.03010細(xì)交鏈孢菌酮酸（TEA）198