藥物雜質(zhì)檢查-特殊雜質(zhì)常用的檢查方法（藥物分析課件）

(一)紫外分光光度法

(二)可見分光光度法（三）紅外光譜法（四）熒光分析法

四光譜行為差異光譜法腎上腺素腎上腺酮（一）紫外分光光度法——利用藥物和待檢雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)的差異進(jìn)行

例:腎上腺素中腎上腺酮的檢查

四光譜行為差異

例:腎上腺素中腎上腺酮的檢查規(guī)定：A310nm≯0.05方法限量計(jì)算雜質(zhì)限量%=10012/1000100=0.0554530.05××

例:腎上腺素中腎上腺酮的檢查腎上腺酮的C(g/100mL)=A/E1%1cm（三）紅外分光光度法

主要用于藥物中無效或低效晶型的檢查。某些多晶型藥物由于其晶型結(jié)構(gòu)不同，一些化學(xué)鍵的鍵長、鍵角等發(fā)生不同程度的變化，從而導(dǎo)致紅外吸收光譜中某些特征峰的頻率、峰形和強(qiáng)度出現(xiàn)顯著差異。利用這些差異，可以檢查藥物中低效（或無效）晶型雜質(zhì)，結(jié)果可靠，方法簡便。

1酸堿性的差異例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查,甲基橙不得顯紅色

2氧化還原性的差異

例：氯化物中碘化物檢查供試品與含亞硝酸鈉的淀粉指示劑不得顯藍(lán)。

Cl－的氧化電位高(1.35)不能被氧化為Cl2.I-的氧化電位低(0.53)能被氧化為I2

二化學(xué)性質(zhì)差異

3雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀間苯二酚中鄰苯二酚檢查4雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色

Aspirin中游離水楊酸的測定5雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體鹽酸乙基嗎啡中胺鹽檢查.二化學(xué)性質(zhì)差異檢查原理紫堇色（有酚羥基）阿司匹林+Fe3+×（無酚羥基）水楊酸+Fe3+Aspirin中游離水楊酸的測定水楊酸鑒別反應(yīng)

色譜法

(一)薄層色譜法(TLC)

(二)高效液相色譜法(HPLC)

(三)氣相色譜法(GC)

三色譜行為差異

根據(jù)藥物與雜質(zhì)對吸附劑的吸附或?qū)φ归_劑的解析能力不同(Rf值的差異),加以分離和檢查.(一)薄層色譜法(TLC)

三色譜行為差異

本法靈敏、簡便、快速；不需特殊的設(shè)備、費(fèi)用低；分離和鑒定同步進(jìn)行.1.TLC法特點(diǎn)

三色譜行為差異1)雜質(zhì)對照品法

——適用于雜質(zhì)已知并有雜質(zhì)對照品的情況.

方法

根據(jù)雜質(zhì)限量,取供試品溶液和一定濃度的雜質(zhì)對照品溶液,分別點(diǎn)于同一薄層板上展開,定位后進(jìn)行檢查.

三色譜行為差異2.TLC法應(yīng)用供試品對照品

判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點(diǎn)不得超過相應(yīng)的雜質(zhì)對照斑點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度高、直觀性強(qiáng)；缺點(diǎn)：需要雜質(zhì)對照品?！m用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定或無雜質(zhì)對照品的情況.2)供試品溶液自身稀釋對照法(高低濃度對照法)

三色譜行為差異2.TLC法應(yīng)用例：氫化可的松中“其他甾體”檢查供試液:3mg/ml對照液:60

g/ml(供試液稀釋50倍)判斷:供試液的雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)≯3個(gè),且供試液的雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色≯對照液主斑點(diǎn)顏色.僅限于雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分斑點(diǎn)顏色相同或相近優(yōu)點(diǎn)：以供試品的稀溶液作為對照液，不需要雜質(zhì)對照品，簡單、價(jià)廉，還可配成幾種限量的對照溶液缺點(diǎn)：不同物質(zhì)，不同Rf值的比較，準(zhǔn)確度差、直觀性差

3)雜質(zhì)對照品與供試品溶液自身稀釋對照法并用當(dāng)藥物中存在多個(gè)雜質(zhì)，有雜質(zhì)對照品的采用雜質(zhì)對照品法檢查，沒有的則采用供試品溶液自身稀釋對照法檢查。

——選用質(zhì)量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作為對照品.4)對照藥物法

三色譜行為差異樣（1)5mg/ml對(3)5mg/ml樣（2)0.2mg/ml馬來酸麥角新堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查判斷：１）主斑點(diǎn)顏色與位置應(yīng)與３）主斑點(diǎn)顏色與位置一致，所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色不得深于３）中對應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，并不得有３）以外的雜質(zhì)斑點(diǎn)；２）除主斑點(diǎn)外，不得顯任何雜質(zhì)斑點(diǎn)。5)以實(shí)驗(yàn)條件下顯色劑對雜質(zhì)的檢出限來控制

根據(jù)供試品與雜質(zhì)的對照品保留時(shí)間相同測定各雜質(zhì)峰面積.(二)高效液相色譜法(HPLC)特點(diǎn)分離效能高、應(yīng)用范圍廣，能準(zhǔn)確、快速、分離分析同時(shí)進(jìn)行

三色譜行為差異中國藥典規(guī)定正文各品種項(xiàng)下的HPLC條件不得任意改變固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測器類型可適當(dāng)改變色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速和比例、柱溫、進(jìn)樣量、靈敏度１、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

ChP

每次檢測前，應(yīng)對儀器進(jìn)適用性試驗(yàn)，應(yīng)達(dá)到規(guī)定要求

理論板數(shù)（n）分離度（R）重復(fù)性（RSD）拖尾因子（T）（一）理論板數(shù)（n）

如測得n低于規(guī)定，應(yīng)改變柱長或載體性能、重填色譜柱等以求達(dá)到（二）分離度（R）

除另有規(guī)定外，R≥1.5（三）重復(fù)性（RSD）

1×5峰面積

3×3校正因子RSD≤2.0%（四）拖尾因子（T）

除另有規(guī)定外，T應(yīng)0.95~1.051.內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)的含量

準(zhǔn)確測定雜質(zhì)含量

方法

內(nèi)標(biāo)+雜質(zhì)對照品→溶液，進(jìn)樣，測定，計(jì)算校正因子

內(nèi)標(biāo)物+雜質(zhì)對照品→校正因子內(nèi)標(biāo)物+樣品→雜質(zhì)含量內(nèi)標(biāo)物+雜質(zhì)對照品→校正因子內(nèi)標(biāo)物+樣品→雜質(zhì)含量

供試品+內(nèi)標(biāo)→供試品溶液，進(jìn)樣，測定雜質(zhì)和內(nèi)標(biāo)峰面積或峰高，計(jì)算雜質(zhì)量2.外標(biāo)法測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)的量供試品→供試品溶液

雜質(zhì)對照品→對照品溶液進(jìn)樣，測定，計(jì)算雜質(zhì)的含量

缺點(diǎn)：不易準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)進(jìn)樣

3.加校正因子的主成分自身對照法

方法將校正因子載入藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

分別進(jìn)樣，測定供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積及其總和，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分峰面積比較，計(jì)算供試品中雜質(zhì)的量。

例：檢查紅霉素中紅霉素B、C組分及有關(guān)物質(zhì)。判斷：紅霉素B峰（0.7）和紅霉素C（1.0）峰校正后的峰面積均不得大于對照液主峰面積（5.0%）紅霉素稀醇醚校正后的峰面積不得大于對照溶液主峰面積的3/5(3.0%)

其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（5.0%）4.不加校正因子的主成分自身對照法

雜質(zhì)峰面積與主成分峰面積相差懸殊時(shí)應(yīng)用。

方法

分別進(jìn)樣，測定供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積，與對照溶液主成分峰面積比較，計(jì)算供試品中雜質(zhì)的量。

優(yōu)點(diǎn)：不需雜質(zhì)對照品，可同時(shí)控制各個(gè)雜質(zhì)及其總量限度

缺點(diǎn)：檢測波長處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強(qiáng)度可能有差異，準(zhǔn)確度差例：氧氟沙星中有關(guān)物質(zhì)的檢查判斷：

供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積（0.2%）各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2.5倍。5.峰面積歸一化法

取一定量供試品溶液進(jìn)樣，測定各雜質(zhì)及藥物的峰面積，計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不能超過限量。注意溶劑峰不應(yīng)計(jì)算在總峰面積內(nèi)。例如：利巴韋林中有關(guān)雜質(zhì)的檢查：對照品液(5μg/ml)進(jìn)樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程的20%～25%

樣品液(0.4mg/ml)進(jìn)樣10μl,雜質(zhì)∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%

優(yōu)點(diǎn)：不需雜質(zhì)對照品，簡便易行。

缺點(diǎn)：檢測波長處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強(qiáng)度可能有差異，控制雜質(zhì)峰面積百分率不一定就是雜質(zhì)限量，準(zhǔn)確度差，適用于粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。

(三)氣相色譜法(GC)——用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查,如藥物中殘留溶劑、農(nóng)藥殘留量等.

三色譜行為差異(四)毛細(xì)管電泳法(HPCE)——用于酶類藥物中酶類雜質(zhì)的檢查，方法與HPLC相同。（二）、化學(xué)性質(zhì)的差異（一）、物理性質(zhì)的差異二特殊雜質(zhì)常用的檢查方法（三）、光學(xué)性質(zhì)的差異（四）、色譜性質(zhì)的差異

臭味及揮發(fā)性差異顏色差異溶解行為差異旋光性質(zhì)的差異對光吸收性質(zhì)的差異吸附或分配性質(zhì)的差異一物理性質(zhì)差異

2.雜質(zhì)無揮發(fā)性利用藥物在室溫或加熱揮發(fā)后,遺留殘?jiān)谝欢囟燃訜嶂梁阒?其重量不得超過規(guī)定.

例：乙醇中不揮發(fā)物的檢查.(一)嗅味及揮發(fā)性差異1.雜質(zhì)有特殊氣味：例：乙醇中的雜醇油（異臭）一物理性質(zhì)差異

藥物自身無色

生產(chǎn)中引入有色的有關(guān)物質(zhì)或分解產(chǎn)物.例：磺胺嘧啶原料藥顏色檢查取本品2.0g,加氫氧化鈉試液10ml溶解后，加水至25ml，溶液應(yīng)澄清無色；如顯色，與黃色3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色夜比較，不得更深。

——磺胺苯環(huán)上胺基被氧化生成有色偶氮苯化合物.(二)顏色差異一