高通量測序技術(shù)平臺流程與應(yīng)用

IlluminaGenomeAnalyzer系統(tǒng)應(yīng)用方向DNAFragment文庫測序DNAMate-pair文庫測序SmallRNA測序數(shù)字化表達(dá)譜測序轉(zhuǎn)錄組測序DNA甲基化測序ChIP-seqMeta-GenomicsDNA測序血漿微量DNA測序12021/5/9基因組DNA的隨機(jī)打斷↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接頭↓PCR擴(kuò)增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation的成簇?cái)U(kuò)增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息組裝/分析IlluminaDNAFragment文庫測序流程

22021/5/9IlluminaMate-pair文庫測序流程

基因組DNA隨機(jī)打斷特定大小片段（2-10kb范圍可選）↓末端修復(fù)↓生物素標(biāo)記↓環(huán)化↓獲得來自大片段兩端共計(jì)400-600bp的DNA片段↓修飾、加接頭↓PCR擴(kuò)增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇?cái)U(kuò)增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息組裝/分析32021/5/9IlluminaSmallRNA測序流程

從總RNA中分離smallRNA↓5′接頭連接和純化↓3′接頭連接純化↓RT-PCR擴(kuò)增↓SmallRNA文庫的純化↓文庫的檢測↓DNA在ClusterStation成簇?cái)U(kuò)增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析42021/5/9Illumina數(shù)字化表達(dá)譜測序流程

mRNA的分離和cDNA第一鏈的合成↓cDNA第二鏈的合成↓限制性內(nèi)切酶NlaIII的酶切↓連接GEXNlaIIIAdapter1↓限制性內(nèi)切酶MmeI的酶切↓連接GEXAdapter2↓Adapter連接cDNA產(chǎn)物和PCR富集↓文庫的檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇?cái)U(kuò)增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析52021/5/9TotalRNA的DNaseI酶消化↓mRNA分離和隨機(jī)打斷↓cDNA第一鏈和第二鏈的合成↓DNA片段的末端修復(fù)↓將“A”堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上特定接頭↓PCR擴(kuò)增連上接頭的DNA片段↓文庫的檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇?cái)U(kuò)增↓Illumina

GenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析Illumina轉(zhuǎn)錄組測序流程

62021/5/9基因組DNA隨機(jī)打斷↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3’末端↓DNA片段末端加上特別處理的甲基化接頭↓重亞硫酸鹽處理↓去鹽處理↓PCR擴(kuò)增連上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation上的成簇?cái)U(kuò)增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析IlluminaDNA甲基化測序流程

72021/5/9染色質(zhì)免疫共沉淀↓目的DNA片段↓DNA片段的末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3‘末端↓DNA片段末端加上接頭↓PCR擴(kuò)增加上接頭的DNA片段↓文庫檢測↓DNA在ClusterStation成簇?cái)U(kuò)增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息學(xué)分析IlluminaChIP-seq測序流程

82021/5/9Meta基因組的提取↓DNA隨機(jī)打斷↓DNA片段末端修復(fù)↓將‘A’堿基加入到DNA片段的3′末端↓在DNA片段的末端加上接頭↓純化連接產(chǎn)物↓PCR擴(kuò)增連上接頭的DNA片段↓文庫的檢測↓DNA在ClusterStation的成簇?cái)U(kuò)增↓IlluminaGenomeAnalyzer上的測序↓生物信息組裝/分析IlluminaMeta-GenomicsDNA測序流程

92021/5/9收集10-15ml孕婦外周血↓提取血漿中游離DNA↓Q-PCR定量總DNA含量↓構(gòu)建DNA文庫↓Agilent和Q-PCR檢測文庫濃度↓Cluster制備和GenomeAnalyzer