人抗角蛋白絲聚集素絲集蛋白抗體(AFA)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

第第頁(yè)人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體（AFA）ELISA檢測(cè)試劑盒說明書人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體（AFA）ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理試劑盒采納雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被抗絲集蛋白抗原包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最后的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體（AFA）的存在與否。樣品收集、處理及保存方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避開任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞快速當(dāng)心地分別。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存：假如樣本收集后不適時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于20℃，避開反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)試劑盒保存在28℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶wan全溶解后再使用。試驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立刻放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。嚴(yán)格依照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及次序進(jìn)行溫育操作。全部液體組分使用前充分搖勻。試劑盒構(gòu)成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無陰性對(duì)比0.5mL0.5mL無陽(yáng)性對(duì)比0.5mL0.5mL無樣本稀釋液6mL3mL無檢測(cè)抗原HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無停止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個(gè)1個(gè)無試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)比孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)比孔中加入陰性對(duì)比、陽(yáng)性對(duì)比各50μL；3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μl，樣本稀釋液40μL；4.隨后陰、陽(yáng)性對(duì)比孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判定1.試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)比孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)比孔OD值平均值≤0.15、2.臨界值（Cutoff）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)比孔平均值+0.153.陰性判定：樣品OD值＜臨界值（Cutoff），樣品為陰性4.陽(yáng)性判定：樣品OD值＞臨界值（Cutoff），樣品為陽(yáng)性試劑盒性能精準(zhǔn)性：陽(yáng)性對(duì)比孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)比孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)仿佛物交叉反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。貯藏：28℃，避光防潮保存。有效期：6個(gè)月免