項目4-2 動物性食品中獸藥殘留的檢測2課件講解

動物性食品中獸藥殘留的檢測什么是獸藥殘留？獸藥：是指用于預防、治療、診斷動物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動物生理機能的物質(zhì)，主要包括：血清制品、疫苗、診斷制品、微生態(tài)制品、中藥材、中成藥、化學藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及外用殺蟲劑、消毒劑等。獸藥殘留是指用藥后蓄積或存留于畜禽機體或產(chǎn)品(如雞蛋、奶品、肉品等)中原型藥物或其代謝產(chǎn)物，包括與獸藥有關的雜質(zhì)的殘留。常見的幾類獸藥殘留藥物抗生素類：青霉素、四環(huán)素抗生素，還包括抗真菌藥以及磺胺

類、氟喹諾酮類藥物β-激動劑類：俗稱瘦肉精，有

鹽酸克倫特羅、

萊克多巴、

沙丁胺醇等11種磺胺類藥物：磺胺異惡唑、磺安密啶等硝基呋喃類藥物：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林激素類獸藥殘留的危害？2011年3?15特別行動中，央視曝光了雙匯“瘦肉精”養(yǎng)豬一事。2011年1月，浙江省杭州、金華、嘉興等地相繼發(fā)生六起食物中毒事件。中毒者相繼出現(xiàn)臉色潮紅、胸悶、心悸等食物中毒現(xiàn)象。省疾控中心在送檢的食物樣品中測出了不同濃度的“瘦肉精”。

北京奧運會前，歐陽鯤鵬和美國泳將哈迪均因瘦肉精尿檢陽性，而被禁止參賽。瘦肉精事件瘦肉精瘦肉精是一類藥物，是腎上腺素類神經(jīng)興奮劑，屬β－興奮劑類激素，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。在中國，通常所說的瘦肉精是指鹽酸克倫特羅。但瘦肉精有著較強的毒性，中毒者會有心慌、頭疼、惡心等中毒癥狀，長期使用有可能導致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤。對心臟病、高血壓患者、老年人的危害更大。鹽酸克倫特羅快速測試卡“瘦肉精”現(xiàn)場快速檢測孔雀石綠事件孔雀石綠是有毒的三苯甲烷類化學物，既是染料，也是殺菌劑，具有潛在的致癌、致畸、致突變的作用。我國在2002年前就將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》中，禁止用于食品動物。但是，在水產(chǎn)品的養(yǎng)殖過程中，很多漁民仍然用它來預防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等；在運輸過程中，為了使鱗受損的魚延長生命，魚販也常使用孔雀石綠。2005年3月8日，重慶市水產(chǎn)技術推廣站水產(chǎn)檢疫隊在渝中區(qū)西三街水產(chǎn)交易市場查獲600多只含有致癌藥物孔雀石綠的甲魚。2005年8月，香港有關部門一連兩天在市面抽驗29個淡水魚樣本進行測試，當中25個進口淡水魚樣本中，10個證實含有可能致癌的“孔雀石綠”。2005年11月，繼三款“珠江橋牌豆豉鯪魚罐頭”被查出含致癌物孔雀石綠后，香港食物環(huán)境衛(wèi)生署公布的食物最新測試結果顯示，“鷹金錢”牌金獎豆豉鯪魚和甘竹牌豆豉鯪魚等三個食物樣本被查出含有致癌物“孔雀石綠”。日本政府于1994年制訂法規(guī)，規(guī)定對來自中國的鰻魚須加強對抗生素、磺胺制劑及惡喹酸三項有害物質(zhì)控制檢查，其中土霉素等四環(huán)素類抗生素要求未檢出（檢測限為0.1mg/kg）。2012年4月10日起，日本決定對進入日市場的鰻魚及制品逐批抽檢是否有土霉素殘留。這意味著中國出口鰻魚將面臨一次嚴峻的挑戰(zhàn)。如果有關方面不及時采取有效的控制措施，鰻魚加工企業(yè)、養(yǎng)殖戶、鰻魚飼料加工企業(yè)可能將受到嚴重的沖擊。

對出口的影響長期食用獸藥殘留超標的食品后，當體內(nèi)蓄積的藥物濃度達到一定量時會對人體產(chǎn)生多種急、慢性中毒。四環(huán)素類藥物能夠與骨骼中的鈣結合，抑制骨骼和牙齒的發(fā)育。紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類可致急性肝毒性。氨基糖苷類的慶大霉素和卡那霉素能損害前庭和耳蝸神經(jīng)，導致眩暈和聽力減退?；前奉愃幬锬軌蚱茐娜梭w造血機能。硝基呋喃類藥物及其代謝物對人體有致癌、致畸胎副作用。激素對內(nèi)分泌功能、生育功能有影響，引起兒童性早熟。因此，檢測動物性食品中獸藥殘留十分重要。根據(jù)《獸藥管理條例》規(guī)定，農(nóng)業(yè)部組織修訂里了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》，即農(nóng)業(yè)部235號公告，規(guī)定了四類獸藥：1、允許使用，不需要制定最大殘留限量（如碳酸鈣、葡萄糖酸鈣、過氧化氫等）2、允許使用，但需要制定最大殘留限量（如阿莫西林、四環(huán)素類、磺胺類、氟喹諾酮類）3、允許治療使用，動物的任何可食用組織不得檢出（如鎮(zhèn)定劑類，激素類）4、不允許使用，動物的任何可食用組織不得檢出（興奮劑類、氯霉素、硝基呋喃類）藥物名動物種類靶組織殘留限量（μg/kg）阿莫西林所有食品動物肌肉脂肪肝腎奶5050505010地西泮（安定）所有食品動物所有可食組織不得檢出氯霉素及其鹽、酯所有食品動物所有可食組織不得檢出克倫特羅及其鹽、酯所有食品動物所有可食組織不得檢出己烯雌酚及其鹽、酯所有食品動物所有可食組織不得檢出呋喃它酮所有食品動物所有可食組織不得檢出農(nóng)業(yè)部235公告部分獸藥殘留限量獸藥殘留的原因1、養(yǎng)殖環(huán)節(jié)違規(guī)用藥和用藥不當是產(chǎn)生獸藥殘留的最主要原因。非法使用違禁或淘汰藥物不遵守休藥期規(guī)定超劑量濫用藥物違背有關標簽規(guī)定屠宰前用藥2、加工、包裝、貯存、運輸、銷售過程污染3、人為摻雜使假（違法行為）學習目標知識目標：

1.會說出獸藥氟喹諾酮殘留檢測原理；

2.會說出液相色譜的組成部分及作用；技能目標：

1.會熟練使用漩渦振蕩器、固相萃取儀等對樣品進行預處理

2.會正確使用液相色譜儀對樣品進行測定和數(shù)據(jù)處理

3.能準確進行數(shù)據(jù)記錄和處理4.能根據(jù)正確評價食品中獸藥殘留是否符合標準素質(zhì)目標：

1.培養(yǎng)學生嚴謹、務實的學習精神；

2.培養(yǎng)學生開拓創(chuàng)新、團結協(xié)作的職業(yè)素質(zhì)。檢測依據(jù)農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008適用范圍：適用于豬的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟，

雞的肝臟和腎臟組織中達氟沙星、

恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星藥

物殘留檢測。測定原理用磷酸緩沖鹽溶液提取試料中的藥物，C18柱凈化，流動相洗脫，以磷酸-乙腈為流動相，用高效液相色譜—熒光檢測法測定，外標法定量。具體工作任務分解任務3：提取液凈化任務2：樣品制備與提取任務4：液相色譜測定任務5：數(shù)據(jù)記錄與計算任務1：主要儀器設備任務一：主要儀器設備離心機漩渦振蕩器液相色譜儀固相萃取儀固相萃取柱任務二、樣品制備與提取樣品，切成小塊，放入攪拌機中，打漿準確稱取2±0.05g樣品于50mL具塞離心管中旋渦振蕩器上中速振蕩5min

準確加入20.0mL磷酸鹽緩沖液離心管配平離心，10000轉/min，離心5min將上清液倒入50mL燒杯中，以備過柱用任務三、提取液凈化將固相萃取柱在固相萃取儀上安裝好加2.0mL甲醇于固相萃取柱中當水快要滴干時加5.0mL上清液，流速控制在1-2mL/min當甲醇快要滴干時，再加2.0mL水快要滴干時，加2.0mL水淋洗，滴完后，擠干將5mL試管安裝于固相萃取儀上，用于接收用2.0mL流動相洗脫，收集洗脫液，滴完后，擠干用0.2um濾膜過濾至樣瓶中固相萃取柱填料上面不能完全干，除非要求擠干任務四、液相色譜測定儀器：液相色譜儀色譜條件：（1）色譜柱：C18250mm×4.6mm，粒徑5μm，或者相當者；（2）流動相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺：乙腈（82：18，v/v）；（3）流速：0.8mL/min；（4）進樣量：20μL；（5）柱箱溫度：25℃；（6）熒光檢測器：激發(fā)波長280nm，發(fā)射波長450nm。色譜柱任務四、液相色譜測定色譜分析：由自動進樣器分別吸取20μL對照品標準工作溶液及試樣凈化液注入液相色譜儀中，記錄色譜峰，以保留時間定性，以試樣和標準工作液的峰面積（或峰高）比較定量。100μg/L環(huán)丙沙星、恩諾沙星標準溶液譜圖任務五、定性與定量計算項目名稱樣品名稱接樣日期設備檢驗日期檢驗依據(jù)農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008樣品質(zhì)量M（g）提取用磷酸鹽緩沖溶液的總體積V1（mL）過C18固相萃取柱所用備用液體積V2（mL）洗脫用流動相體積V3（mL）樣品溶液中相應藥物的峰面積A對照溶液中藥物的濃度Cs（ng/mL）對照溶液中相應藥物的峰面積As計算公式X（μg/㎏）=試樣中氟喹諾酮

的殘留量X（μg/㎏）試樣中氟喹諾酮

殘留量平均值（μg/㎏）標準規(guī)定分析結果的精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。本次實驗分析結果的精密度X（μg/㎏）=式中：X——樣品中環(huán)丙沙星或恩諾沙星的殘留量，單位為微克每千克（μg/㎏）；A——樣品溶液中相應藥物的峰面積；As——對照溶液中相應藥物的峰面積；Cs——對照溶液中藥物的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸鹽緩沖溶液的總體積，單位為毫升（mL）；V2——過C18固相萃取柱所用備用液體積，單位為毫升（mL）；V3——洗脫用流動相體積，單位為毫升（mL）M——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）。測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。計算公式：知識拓展1、液相色譜儀液相色譜法（liquidchromatography，LC）初期發(fā)展比較慢，到了20世紀60年代后期，液相色譜得到了迅速的發(fā)展。特別是填料制備技術、檢測技術和高壓輸液泵性能的不斷改進，使液相色譜分析實現(xiàn)了高效化和高速化。從此，這種分離效率高、分析速度快的液相色譜法就被稱為高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。沃特世（Waters）液相色譜儀安捷倫氣相色譜儀2、液相色譜儀原理高效液相色譜是以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。液相色譜流程圖1、儲液罐；2輸液泵；3、進樣器；4、色譜柱；5、檢測器；6、工作站；7、廢液灌輸液泵2將儲液罐1的流動相抽入泵內(nèi)加壓后，從泵頭以一定的流速輸出，經(jīng)壓力表計量后，樣品從進樣器3帶入色譜柱4，樣品在色譜柱4內(nèi)被分離成單一組分后立即進入檢測器5，利用樣品與流動相在電學、光學、熱學或電化學性質(zhì)上的差別，檢測器5能給出一個表達物質(zhì)濃度或量的信號，此信號經(jīng)放大系統(tǒng)放大并記錄下來。3、液相色譜儀的組成液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和記錄系統(tǒng)五部分組成。流動相高壓輸液泵柱箱自動進樣器檢測器記錄系統(tǒng)3、液相色譜儀的組成（1）高壓輸液系統(tǒng)：由儲液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動阻力器等組成，高壓輸液泵是核心部件，作用是輸送流動相，由于色譜柱的阻力大，所以高壓泵必須能克服阻力以恒定流速輸送流動相。（2）進樣系統(tǒng)：常用的進樣系統(tǒng)有3種：直接進樣、停留進樣和六通閥進樣。其中最常用的是六通閥進樣，采用這種方法，耐高壓，進樣量的可變范圍大，而且易于自動化。（3）分離系統(tǒng)：由柱箱、色譜柱組成。色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。（4）檢測系統(tǒng)：檢測器是色譜儀的重要部件，用來檢測分離出的組分。在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器：一類是溶質(zhì)型檢測器，它僅對被分離組分的物理或化學特性有響應，屬于這類檢測器的有紫外檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器等。另一類是總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理或化學性質(zhì)有響應，屬于這類檢測器的有示差折光檢測器，電導檢測器等（5）記錄系統(tǒng)：記錄系統(tǒng)也稱輸出系統(tǒng)，是將檢測器轉化成的電信號以譜圖的形式輸出，描繪出各組份的色譜峰。（1）紫外檢測器：根據(jù)被分析試樣對特定波長的紫外光或可見光的選擇性吸收，試樣的濃度與吸光度的關系來完成檢驗。紫外檢測器應用最廣，對大部分有機化合物都有響應。特點：靈敏度高、線性范圍高、對流動相的流速和溫度變化不敏感、波長可選，易于操作，只對樣品組分有響應，而對流動相基本沒有響應。（2）熒光檢測器：用紫外光照射某些化合物時它們可受激發(fā)而發(fā)出熒光，測定發(fā)出的熒光能量即可定量