實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法教案-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)動(dòng)物血液的采集方法

PAGEPAGE14第三篇?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)的常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)第一章動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)大鼠和小鼠的編號(hào)一般都用不同顏料涂染皮毛的方法來(lái)標(biāo)記，常用的涂染化學(xué)品如下①涂染黃色用3～5%苦味酸溶液;②涂紅色用0.5%品紅溶液等。前者最常用。在動(dòng)物固定的不同部位涂上苦味酸斑點(diǎn)表示不同號(hào)碼。一般習(xí)慣在左前腿上為1，腰部為2，在左后腿上為3，在頭部為4，在正中為5，在尾基部位6，在右前腿為7，在右側(cè)要不為8，在右后退上為9，不涂染鼠為10。如果試驗(yàn)時(shí)動(dòng)物編號(hào)超過(guò)10，可在動(dòng)物同一部位上再涂染另一種涂染劑。標(biāo)記方法如圖。第二節(jié)動(dòng)物的捉持和固定一、小白鼠的捉持：捉拿時(shí)可先用右手抓住并提起鼠尾，置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)或鼠籠上，并稍向后拉；用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后頸背部的皮膚，將鼠置于左手心中，拉直后肢，以無(wú)名指及小指按住鼠尾或小鼠的左后肢即可。二、大白鼠的持：大白鼠的捉拿時(shí)，可戴上手套。實(shí)驗(yàn)者可用右手捉住鼠尾，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)或鼠籠上，并稍向后拉；左手掌面向鼠背，食指和中指壓住鼠的頭頂，拇指和無(wú)名指分別從鼠的兩腋下插入，將鼠的兩前肢卡住；或拽緊鼠后頸及后背皮膚即可。三、家兔的捉持：用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢(shì)。第三節(jié)常用動(dòng)物的給藥方法一、小鼠、大鼠常用的給藥方法1、灌胃（ig）：左手將動(dòng)物固定后，右手持裝有灌胃針頭的注射器，自口角進(jìn)針，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。一般的給藥量小鼠為0.1～0.3ml／10g，大鼠為1～2.0ml／100g。2、皮下注射（sc）:常在背部皮下注射。一手固定動(dòng)物，另一只手注射給藥。一般給藥量小鼠為0.1～0.20ml／10g，大鼠為1ml／100g。3、腹腔注射（ip）:左手固定動(dòng)物，右手持注射器，從下腹部外側(cè)，呈45度角刺入腹腔，進(jìn)針約3～5mm，一般給藥量小鼠為0.1～0.3ml／10g，大鼠1～2.0ml／100g。4、肌內(nèi)注射（im）：多注射后肢股部肌肉。如一人單獨(dú)操作，以左手拇指和食指抓住小鼠頭部皮膚，小指、無(wú)名指和掌部夾住鼠尾及一側(cè)后肢，右手持注射器刺入后肢肌肉給藥。一般小鼠每側(cè)不超過(guò)0.1ml。5、尾靜脈注射（iv）：將動(dòng)物固定，鼠尾巴露在外面，用70%～75%的酒精棉球擦尾部，或?qū)⑹笪步?5～50℃溫水中。待尾部左右靜脈擴(kuò)張后，左手拉著尾，右手進(jìn)針。小鼠一般的給藥量為0.1～0.2ml／10g。二、家兔常用的給藥方法灌胃：（略）皮下、肌內(nèi)及腹腔注射：給藥方法基本上同小白鼠，為針頭稍大，給藥量可稍多（皮下與肌內(nèi)0.5～1.0ml／kg，腹腔1.0～5.0ml／kg）。靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，拔去耳克外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管暴露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖，以食指墊在兔耳擬進(jìn)針部位的下面，右手持注射器，從近耳尖處將針頭刺入血管。推注時(shí)如有阻力，局部出現(xiàn)腫脹，表明針頭部在血管內(nèi)，應(yīng)立即拔針重新穿刺。一般藥液為0.2～2.0ml／kg，等滲藥液可達(dá)10ml／kg。第四節(jié)動(dòng)物的性別鑒定一般情況下，哺乳類(lèi)動(dòng)物性別依據(jù)動(dòng)物的肛門(mén)與外生殖器(陰莖或陰道)之間的距離加以區(qū)分。雄性要比雌性的距離更長(zhǎng)。大、小鼠雌雄動(dòng)物肛門(mén)與外生殖器間距離第五節(jié)動(dòng)物處死方法1、頸椎脫臼法：本法常用于小鼠的處死。左手拇指、食指用力向下按住鼠頭，同時(shí)右手抓住鼠尾用力向后上方拉，將脊髓與腦髓拉斷，鼠即死亡。2、斷頭法：用剪刀將鼠頭剪斷，由于腦髓與脊髓斷離且大量出血，動(dòng)物很快死亡。麻醉后的家兔也可采用此法。3、擊打法：提起鼠尾，用力棒擊頭部，或用小木棰打擊頭部，鼠痙攣立即死亡。家兔也可采用此法。家兔等大動(dòng)物常采用空氣拴塞法、放血法、窒息法處死。也可用過(guò)量麻醉藥注入法等方法處死動(dòng)物。第二章動(dòng)物血液的采集方法第一節(jié)大鼠、小鼠的血液采集方法一、眶靜脈叢（竇）采血小鼠為眶靜脈竇，大鼠為眶靜脈叢?？上葘?dòng)物側(cè)眼向上固定體位，左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，使眶靜脈叢（竇）充血。右手持注射器或硬質(zhì)毛細(xì)玻璃管，用采血管由眼內(nèi)角在眼瞼和眼球之間向喉頭方向刺入。若為針頭，其斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180°角使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入深度：小鼠約2mm～3mm，大鼠約4mm～5mm。然后將采血管保持水平位，稍加旋轉(zhuǎn)并后退吸引。二、眶動(dòng)脈和眶靜脈取血常用摘眼球法從眶動(dòng)脈和眶靜脈取血，多用于小鼠。操作時(shí)，用左手抓住動(dòng)物頸部皮膚，將動(dòng)物輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，取稍側(cè)臥位，左手拇食指盡量將動(dòng)物眼周?chē)つw往眼后壓，使其眼球突出充血后，用彎頭眼科鑷迅速夾去眼球，并將鼠倒置，頭向下，眼眶內(nèi)很快流出血液。一般取血量約為小鼠體重4％～5％。三、尾靜脈采血首先將動(dòng)物尾巴置于45℃～50℃熱水中，泡數(shù)分鐘，也可用酒精或二甲苯反復(fù)擦拭，使尾部血管擴(kuò)張，擦干，剪去尾尖（小鼠約1～2mm，大鼠5～l0mm），血自尾尖流出，讓血液滴入盛器或直接用吸管吸取。也可用試管等接住，自尾根部向尾尖按摩，血液會(huì)自尾尖流入試管。四、大血管采血大、小鼠可從頸動(dòng)（靜）脈、股動(dòng)（靜）脈等大血管采血。在這些部位取血均需麻醉后固定動(dòng)物，然后作動(dòng)（靜）脈分離手術(shù)，使其暴露清楚后，用注射器沿大血管平行方向刺入，抽取所需血量。小鼠、大鼠還可以從腹主動(dòng)脈采血。首先進(jìn)行深麻醉，仰臥位固定，打開(kāi)腹腔，將腸管推向一側(cè)，然后用手指輕輕分開(kāi)脊柱前的脂肪，暴露出腹主動(dòng)脈。針頭在向心端方向平行刺入，立即采血。大鼠和小鼠還可采用斷頭取血、心臟取血。第二節(jié)家兔、豚鼠的血液采集方法一、耳中央動(dòng)脈采血兔耳中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈。采血時(shí)，用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動(dòng)脈末端，沿著動(dòng)脈平行的方向刺入動(dòng)脈，刺入方向應(yīng)朝向近心端。不要在近耳根部進(jìn)針，因其耳根部組織較厚，血管游離，位置較深，不清晰，易刺透血管造成皮下出血。一般用6號(hào)針頭采血。取血完畢后注意止血。此法一次可抽取10ml～15ml。二、耳緣靜脈采血耳緣靜脈采血多用于家兔等動(dòng)物的中量采血，可反復(fù)采取。采血姿勢(shì)與耳緣靜脈注射給藥相同。操作時(shí)，將兔固定于兔盒內(nèi)或由助手固定，選靜脈較粗、清晰的耳朵，拔去采血部位的被毛，消毒。為使血管擴(kuò)張，可用手指輕彈或用二甲苯涂擦血管局部。用6號(hào)針頭沿耳緣靜脈遠(yuǎn)心端刺入血管。也可以用刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出即可。取血后，用棉球壓迫止血。此法一次可采血5ml～10ml。三、心臟采血將兔仰臥固定，用左手觸摸左側(cè)第3～4肋間，選擇心跳最明顯處穿刺。一般由胸骨左緣外3mm處將注射針頭插入第3～4肋間隙。當(dāng)針頭正確刺入心臟時(shí)，由于心搏的力量，血會(huì)自然進(jìn)入注射器。采血中回血不好或動(dòng)物躁動(dòng)時(shí)應(yīng)拔出注射器，重新確認(rèn)后再次穿刺采血。經(jīng)6天～7天后，可以重復(fù)進(jìn)行心臟采血。豚鼠的心臟采血亦較常用。第三章動(dòng)物實(shí)驗(yàn)手術(shù)基本操作技術(shù)切開(kāi)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求確定手術(shù)切口的部位及大小。切開(kāi)時(shí)先繃緊皮膚，將刀刃與皮膚垂直，用力要得當(dāng)，一般將切開(kāi)皮膚全層，切口整齊不偏斜。切開(kāi)皮及皮下組織時(shí)，一定要求按解剖層次逐層切開(kāi)，注意止血，避免損傷深層的重要組織器官。組織分離1、銳性分離：用刀、剪等銳性器械作直接切割的方法，該法用于皮膚、粘膜、各種組織的精細(xì)解剖和緊密粘連的分離。使用刀柄、止血鉗、剝離器或手指等分離肌肉、筋膜間隙的疏松；結(jié)締組織的方法。四、止血止血是手術(shù)操作中的重要環(huán)節(jié)。手術(shù)過(guò)程中止血完美與否，不僅直接影響手術(shù)部位的顯露和手術(shù)操作，而且關(guān)系到手術(shù)后動(dòng)物的安全、切口愈合的好壞以及是否造成并發(fā)癥等。術(shù)中止血必須準(zhǔn)確、迅速、可靠。術(shù)中止血方法有：1、壓迫止血：手術(shù)中出血一般可先用無(wú)菌紗布或擰干的溫?zé)猁}水紗布按壓片刻，切勿用紗布擦拭，以減少組織損傷。2、鉗夾止血：用止血鉗與血流方向垂直夾住血管斷端，停留一段時(shí)間后取下止血鉗。3、結(jié)扎止血：出血點(diǎn)用紗布?jí)浩日何?，用止血鉗夾住血管斷端，再用絲線結(jié)扎止血。結(jié)扎時(shí)，先豎起止血鉗，將結(jié)扎線繞過(guò)鉗夾點(diǎn)之下。第四章動(dòng)物尸檢的方法動(dòng)物尸檢是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要方法，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行病理解剖觀察，可對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判定，也可分析死亡原因等。具體尸檢方法時(shí)，應(yīng)首先復(fù)查動(dòng)物編號(hào)、性別和實(shí)驗(yàn)分組，記錄死亡或活殺時(shí)間、解剖時(shí)間。然后檢查動(dòng)物外形：年齡、胖瘦、毛色、皮膚出血情況，生殖器官病變情況等。在完成尸體外部檢查之后，為了全面而系統(tǒng)地檢查尸體內(nèi)外所呈現(xiàn)的病理變化，需要采出臟器檢查，而必須要按照一定的順序進(jìn)行。雖然各種動(dòng)物大小不一，解剖結(jié)構(gòu)不同，某些疾病的特殊要求，以及剖檢者的習(xí)慣不同，剖檢順序有一定的靈活性，但常規(guī)臟器采出與檢查一般遵循下列順序：剝皮和皮下檢查一腹腔的剖開(kāi)和腹腔臟器的視查→胸腔的剖開(kāi)和胸腔臟器的視查→腹腔臟器的采出→胸腔臟器的采出→口腔和頸部器官的采出→骨盆腔臟器的采出和檢查→顱腔剖開(kāi)和腦的采出與檢查→鼻腔的剖開(kāi)和檢查→脊椎管的剖開(kāi)和脊髓的采出與檢查→肌肉和關(guān)節(jié)的檢查→骨和骨髓的檢查。第五章動(dòng)物各種體液的采集方法一、尿液的采集方法1．代謝籠采集尿液將動(dòng)物放在特制的籠內(nèi)飼養(yǎng)，動(dòng)物排便時(shí)，可通過(guò)籠子底部的大小便分離漏斗，將尿液與糞便分開(kāi)，達(dá)到采集尿液的目的。2．輸尿管插管采集尿液在動(dòng)物輸尿管內(nèi)插一根塑料套管收集尿液。適用于兔、貓、犬等。3．膀胱手術(shù)插管采集尿液一般用于犬等較大動(dòng)物。4．穿刺膀胱采集尿液二、膽汁、胰液、腸液的收集方法(—)膽汁的收集方法一般采取手術(shù)收集。以大鼠為例，手術(shù)前禁食16小時(shí)～18小時(shí)，飲2.5％葡萄糖鹽水。將動(dòng)物腹腔麻醉后，仰臥于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，從背至腹中線去毛、消毒。自劍突下及腹中線做3cm～5cm的切口。肌肉鈍性分離，切開(kāi)腹膜，暴露腹腔，將肝臟向上翻起。在門(mén)靜脈一側(cè)，找出肝、膽總管。分離出膽總管，在膽總管靠近十二指腸的膨大后端剪開(kāi)小切口，用剪成斜口的聚乙烯管尖端由此插入，一直向上插入至肝總管后，結(jié)扎固定，可收取膽汁。注意：若插管前端插在膽總管處，收集到的將是膽汁和胰液混合液。為準(zhǔn)確起見(jiàn)，可在肝總管處剪切口插入。(二)胰液的收集方法大鼠的胰液收集麻醉大鼠，在固定板上仰臥固定。上腹部劍狀突部位下作3cm左右腹正中切口，找出十二指腸和胃的交界處，用線在交界處穿線備用。然后找到膽總管。大鼠胰管很多，包括前大胰腺管、后大胰腺管，以及許多小胰腺管。大鼠的所有胰腺管均不直接開(kāi)口于十二指腸而都開(kāi)口于膽總管