《獸醫(yī)實驗室診斷》課件-6血液學檢測血氣指數(shù)分析

百年生機為時養(yǎng)器血液學檢測，血氣指數(shù)分析血液處理，血氣指數(shù)分析CONTENTS01血液學檢測02血氣指數(shù)分析血液學檢測Part-1血液學檢測一（一）血液學檢測的臨床意義

目前，獸醫(yī)臨床與入醫(yī)臨床一樣，都致力于提高即時服務水平，這樣可以提供更好的客戶服務和提高獸醫(yī)醫(yī)療水平。

血液學檢測是獸醫(yī)技術員應掌握的一項重要技能，可為獸醫(yī)提供準確可信的臨床實驗室檢結果。理解各種血液學試驗和檢測方法的原理對于保證結果的準確性至關重要。通過血液學檢測，為獸醫(yī)技術員提供了進行額外診斷檢測的方法、改善動物的護理并且增加診所創(chuàng)收的機會。

血液中各種化學成分的測定有助于準確診斷，采取適宜的治療及判斷療效。所測定的化學成分一般與特定器官的功能有關，這些化學成分可能是與特定器官功能相關的酶或特定器官的代謝產物或代謝副產物。完整的血液學檢查適用于對疾病狀態(tài)的診斷評估、健康動物的體檢(如老年動物)和手術前的篩查。分析這些化學成分通常需要小心地采集血清樣品，一些病例可能需要血漿。一血液學檢測（二）血樣的采集

準備采血時，技術員應首先確定需要進行何種檢測。這在某種程度上決定采血所需的器具和采血的部位。樣本必須在沒有使用任何藥物治療前采集。如果已經(jīng)進行了治療，需在采血記錄上予以注明。一旦動物接受了某些藥物治療，一些檢測方法就無法得到準確的結果。

首選的血源是靜脈血。頸靜脈采血是常見動物最適合的采血途徑。有些動物可能沒有合適的采血靜脈或采集靜脈血可能會對其造成過度傷害。這時可能需要通過外周或毛細血管采血。右表列出了常用的采血部位。采血前采血部位必須用酒精擦拭清潔。酒精揮發(fā)后再進行采血操作。動物應保定，但應盡量減少入工保定。保定過程應盡量減少動物應激，動物應激通常會造成樣品結果誤差。犬頭靜脈頸靜脈隱靜脈貓頭靜脈頸靜脈牛尾靜脈乳房靜脈頸靜脈馬頸靜脈鳥類翅脈剪指甲兔耳靜脈剪指甲嚙齒類尾靜脈心臟穿刺動物常用采血部位血液學檢測一采血器具的選擇：傳統(tǒng)的采血工具是針頭和注射器。用這種方法采血時，應選擇適合動物的最大號針頭。注射器應選擇最接近采樣容量的型號。使用過大的注射器可能造成動物靜脈塌陷。最好的采血工具是真空采血系統(tǒng)。這種采血系統(tǒng)由一個針頭、持針器和采集管組成。采集管可能是不含或含有抗凝劑的無菌管。管的容量從幾微升至15

mL不等。采血時應選擇合適型號的采集管，以減少樣品的損傷并避免靜脈塌陷?；诠軆日婵諌毫Φ拇笮。杉軆葢杉m量的血液，以保證抗凝劑和血液成最佳比例。這種方法的優(yōu)點之一是可以用不同的采集管采集多份樣品，而不需要反復進行靜脈穿刺。使用真空管采血的操作正確時，所得樣品的質量最好。一血液學檢測（三）血液樣品的處理樣品的處理方式直接影響化驗結果的可信度，許多化學成分的分析需要采集血液并制備血清樣品，全血或血漿適用于某些檢測方法或某些特殊類型的儀器。一般化學分析儀都附有說明書指明所需樣品的類型。1.全血

獸醫(yī)技術員采集全血樣品后，將其裝入含適當抗凝劑的容器內防止凝集。血液采集后要盡快與抗凝劑混合，搖動手法應輕柔。劇烈晃動可造成溶血，紅細胞內的化學物質釋放入血漿，從而影響分析結果的準確性。2.血漿血漿是全血的液體組分，細胞則懸浮于其中。它主要由近90%的水和10%的溶質組成，如蛋白質、碳水化合物、維生素、激素、酶、脂肪、鹽類、廢物、抗體及其他離子和分子。離心后，吸收樣品時嚴禁吸入試管下層的細胞，以確保樣品內無任何細胞。如果樣品不能在1h之內離心，則須冷藏保存。如果肝素沉凝的血漿在分離后保存過夜或冷凍保存，在檢測前應將樣品再次離心，以除去可能存在的纖維蛋白團塊。冷凍會影響某些檢測結果，因此應詳細閱讀檢測說明，以確定哪些檢測需在樣品冷凍前完成。

血漿樣品的制備：（1）.采集血液樣品，置于含有適量抗凝劑的試管內。（2）.緩慢搖動試管12次，以混勻血液。（3）.確定試管已密封，避免樣品在離心過程中蒸發(fā)。（4）.以2000～3000rpm離心（血樣采集后1h之內進行)10min。（5）.小心地用毛細移液管將血漿層移出。（6）.將血漿置于標記有日期、采集時間、動物名稱和病歷號的試管內。（7）.立即操作、冷藏或冷凍樣品。一血液學檢測3.血清血清就是除去纖維蛋白原(一種血漿蛋白)的血漿。凝血過程中，血漿中可溶性的纖維蛋白原轉變?yōu)椴豢扇苄缘睦w維蛋白。血液凝集時，凝血塊周圍析出的液體即為血清。離心時，轉速超過2000~3000rpm或離心時間過長都可能造成溶血。離心分離時，血清分離管(SST)內的一種凝膠會在血清或血漿和血細胞之間形成物理屏障。此外，試管內壁還含有能促進凝血的二氧化硅顆粒。血液采集入SST試管后，應緩緩將試管上下倒置幾次混勻，然后在離心前使血液凝集30min。任何測定延遲時，都應將血清從SST試管中移出并置于無菌試管中，然后將樣品冷藏或冷凍保存。冷凍會影響一些檢測結果，因此應詳閱檢測說明，以確定哪些檢測須在樣品冷凍前完成。

血清樣品的制備過程：（1）.采集血液樣品，并將其置于不含抗凝劑的試管內。（2）.室溫下自然凝集20～30min。（3）.輕輕地用木棉棒沿著試管壁分離血凝塊。（4）.密封試管，以2000～3000rpm的速度離心10min。（5）.用毛細移液管將血清移出。（6）.將血清置于標記有日期、采集時間、動物名稱和病歷號的試管內。（7）.合理冷藏或冷凍樣品。一血液學檢測（四）抗凝劑的選擇需要用全血或血漿進行檢測時應使用抗凝劑?？鼓齽┦羌尤胙簶悠分蟹乐够蜓泳徠淠幕瘜W物質。特定抗凝劑的選擇應基于待檢項目而定。有些抗凝劑會影響分析，因此應了解檢測項目以選取適當?shù)目鼓齽?。有的抗凝劑會干擾特定的凝集試驗。除了選擇抗凝劑之外，檢測前血樣和抗凝劑必須完全混勻(輕柔地倒轉)。1

h內不進行檢測的樣品應冷藏。分析前應先取出恢復到室溫，并輕柔地倒轉混勻。全血不能冷凍，因為在冷凍和解凍過程中血細胞會發(fā)生溶解。血液學檢測一1.草酸鹽和檸檬酸鹽

草酸鹽有鈉、鉀、銨或鋰鹽制劑。檸檬酸鹽有鈉鹽或鋰鹽制劑。鈣是形成血凝塊的必要物質，草酸鹽和檸檬酸鹽通過與鈣形成不溶性復合物而陽凝血。草酸鉀是最常用的草酸鹽制劑，每毫升血防中加入1~2mg可防止凝血。檸檬酸鈉也很常用，特別是輸血時。目前市場上有商品化的含有適量為酸鹽和檸檬酸鹽抗凝劑的真空采集管。但是，草酚鹽還可結合酶發(fā)揮活性所必需的金屬離子。草酸鋼鹽可抑制乳酸脫氫酶和堿性磷酸酶的活性。因為是鉀鹽，不能用于分析鉀離子濃度的血樣。檸檬酸鈉也可干擾鈉離子的分析和許多常見的血液化學檢測。2.乙二胺四乙酸二鈉

乙二胺四乙酸(EDTA)不改變細胞形態(tài)，因此是血液學檢查的首選。當血漿樣品要用于化學分析，則不能使用。EDTA有鈉鹽或鉀鹽制劑，通過與鈣形成不溶的復合物而阻止凝血，而鈣是形成血凝塊的必要物質。EDTA

管有含液體和粉末兩種。液體的會對樣品造成一定程度的稀釋。為防止凝集，每毫升血液就加入1~2

mg

EDTA。商品化真空管內含有適量的EDTA。過量EDTA可造成細胞收縮，用自動分析儀進行細胞計數(shù)時造成結果無效。血液學檢測一3.氟化鈉

作為葡萄糖防腐劑的氟化鈉，也有抗凝血的作用。作為抗凝劑時，每毫升血液應加入6~10

mg氟化鈉。目前市場上有商品化的含適量氟化鈉的真空采集管。即使存在其他抗凝劑，氟化鈉還可作為葡萄糖防腐劑加入樣品中。作為葡萄糖防腐劑，每毫升血液中加入2.5

mg氟化鈉即可。氟化鈉可干擾許多項血清酶檢測。4.肝素

對于大部分需用血漿的檢測，特別是血液化學分析，肝素是最適合的抗凝劑。肝素不可用于血涂片的分類計數(shù)，因為抗愛劑會干擾白細胞套色。肝素有鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽或銨鹽制劑。肝素通過阻止凝血過程中凝血酶原向凝血酶轉化而發(fā)揮作用。由于肝素可造成白細胞凝集和干擾白細胞正常著色，因此肝素不可用于白細胞分析。每毫升血液中應加入20∪的肝素。商品化真空采集管內含有適量肝素。這些真空管在需要采集多個樣品時最適用。血液學檢測一（五）樣品量

采血量是由用于檢測所需的血清或血漿量和動物的水合狀態(tài)決定。例如，水合狀態(tài)良好的動物，細胞壓積(PCV)為50%，則血樣中含50%的細胞和50%的液體。10

mL的血樣可提供5

mL的液體。對于脫水動物，血液濃縮會引起液體和細胞的比值縮小。PCV為70%的脫水動物，血樣中含有70%的細胞和30%的液體，這意味著10mL血樣中只有3

mL液體。

根據(jù)經(jīng)驗，采集的血樣須為全部檢測項目所需量的3倍，從而在技術員失誤、儀器故障或需稀釋樣品時，不必重復采樣。

在進行任何檢測前，血樣必須充分混勻，混合不充分會造成錯誤的結果。一血液學檢測（六）影響結果的因素1.溶血

使用濕注射器采血、采集后劇烈地混合血樣、施壓使樣品經(jīng)針頭注入試管或將全血樣品冷凍都可能造成溶血。由于注射器內貯留的水會導致溶血，因此，用于采血的注射器必須干燥。將血液注入試管內之前，必須將注射器的針頭拔掉，因為迫使血液從小針孔通過時會造成血細胞破裂，將血樣移入試管時，獸醫(yī)技術入員必須緩慢地將血液從注射器內推出，且要避免產生氣泡。用過量的酒精擦拭皮膚且皮膚未干時便采樣也會導致溶血。2.化學污染

常規(guī)化學測定所需的樣品試管無須無菌，但必須是化學純的。重復使用的試管必須將洗滌劑完全清洗干凈，以免影響試驗結果。3.不合理的標記

樣品采集后，如果未立即在試管上做標記，可能會導致嚴重的錯誤。試管上必須標明日期、采集時間，動物名你和病歷號。送檢前，獸醫(yī)技術入員應核對樣品標記和送檢表兩次，制備樣品和檢測時也是如此。4.不適當?shù)臉悠诽幚?/p>

理想情況下，所有的化學測定都應在樣品采集后1h內完成，但實際中并不總是如此。在這種情況下，必須正確處理和保存樣品，從而使它們的化學成分接近采集時動物體內的水平。樣品溫度不能過高，因為高溫會破壞樣品的些化學成分及活化某些物質。如果血清或血漿樣品被冷凍保存，解凍后必須混勻，避免產生濃度差。5.動物的影響

臨床中，血樣采集前動物應禁食。采食后，血糖水平立刻升高，無機磷水平則會下降。餐后脂血癥可導致血漿或血清呈混濁或云絮狀。進食后腎小球濾過率一過性地升高也會影響腎功能指標的檢測。采集血液前，不用限制飲水。血氣指數(shù)分析Part-2血氣指數(shù)分析二（一）概念血氣分析（BG）是應用血氣分析儀，通過測定動物血液的H+濃度和溶解在血液中的氣體（主要指CO2、O2），來了解動物呼吸功能與酸堿平衡狀態(tài)的一種手段，它能直接反映肺換氣功能及其酸堿平衡狀態(tài)。采用的標本常為動脈血。適用于：低氧血癥和呼吸衰竭的診斷；呼吸困難的鑒別診斷；昏迷的鑒別診斷；手術適應證的選擇；呼吸機的應用、調節(jié)、撤機；呼吸治療的觀察；酸堿失衡的診斷等。血氣分析儀可直接測定的有動脈氧分壓（PO2）、動脈二氧化碳分壓（PCO2）、動脈氫離子濃度（pH），并推算出一系列參數(shù)，發(fā)展到今天可測定50多項指標。血氣指數(shù)分析二（二）各檢測指標解讀1、酸堿度(pH)

參考值7.35～7.45。<7.35為酸血癥，>7.45屬堿血癥。但pH正常并不能完全排除無酸堿失衡。2、二氧化碳分壓(PCO2)

參考值(各種動物有差異)乘0.03即為H2CO3含量。超出或低于參考值稱高、低碳酸血癥。是判斷各型酸堿中毒主要指標。3、二氧化碳總量(TCO2)

代表血中CO2和HCO3之和，在體內受呼吸和代謝二方面影響。代謝性酸中毒時明顯下降，堿中毒時明顯上升。4、氧分壓（PO2）

為物理溶解于血液中的氧所產生的張力。檢測指標二5、動脈血氧含量（O2ct）

是指每100ml血液中實際帶氧量的毫升數(shù)，包括物理溶解在血液中的氧和以化學結合形式存在的氧。O2ct能真實地反映動脈血液中氧的含量，是較可靠的診斷缺氧和低氧血癥的客觀指標。6、氧飽和度(SatO2)

95℅～98℅是指動脈血液中Hb在一定氧分壓下和氧結合的百分比，即氧合Hb占Hb的百分比。O2sat僅僅表示血液中氧與Hb結合的比例，雖然多數(shù)情況下也作為缺氧和低氧血癥的客觀指標，但與PO2不同的是它在某些情況下并不能完全反映機體缺氧的情況，尤其當合并貧血或Hb減低時，此時雖然O2sat正常，但卻可能存在著一定程度的缺氧。7、實際碳酸氫根（AB）

AB是體內代謝性酸堿失衡重要指標，在特定條件下計算出SB也反映代謝因素。二者正常為酸堿內穩(wěn)正常。二者皆低為代謝性酸中毒（未代償），二者皆高為代謝性堿中毒AB>SB為呼吸性酸中毒，AB<SB為呼吸性堿中毒。檢測指標二8、剩余堿（BE）

BE(B)和BE(ecf)代表體內堿儲備的增加或減少，是判斷代謝性酸堿失衡的重要指標。9、