動物實驗概述

動物實驗一、實驗動物的編號與標(biāo)記編號與標(biāo)記通常是動物實驗開始時進(jìn)行的第一項工作。編號的目的是使個體易于識別，便于實驗者觀察每個動物的變化，為清楚記錄結(jié)果做好準(zhǔn)備。無論何種編號方法，良好的標(biāo)記方法都應(yīng)滿足號碼清晰、耐久、簡便和適用的要求。（一）染色法常用的染液有3%～5%的苦味酸溶液（黃色）、2%的硝酸銀溶液（咖啡色）、0.5%的中性品紅溶液（紅色）。染色法編號的原則是“先左后右，先上后下”。（二）穿耳孔法（三）剪趾法（四）掛牌法（五）掛腿圈法（六）烙印法（七）針刺法（八）剪尾法剪尾法是將動物尾尖部剪去，一般用于大鼠、小鼠的分組，但僅限于將兩組動物區(qū)分開，無法給每只動物編號。如果若需進(jìn)行尾尖取血，此法不適用。（九）剪毛法剪毛法是將動物背部的被毛用剪刀剪去，用于標(biāo)記，此法編號標(biāo)記清楚、可靠，便于試驗人員觀察，常用于大中型動物的編號。二、實驗動物的分組（一）隨機(jī)分組的原則及方法動物編號后，通常需要根據(jù)實驗要求進(jìn)行分組。動物隨機(jī)分組一般使用隨機(jī)數(shù)字表或用計算器產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字來進(jìn)行。（二）分組的注意事項動物隨機(jī)分組的目的在于使某實驗中的某主要指標(biāo)平均分配到各個組中，為確保實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義，實驗分組時應(yīng)注意各組動物的數(shù)量不可太少，一般需進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理的實驗數(shù)據(jù)，各組動物至少不可少于6只，若再考慮到實驗過程中出現(xiàn)意外等情況，動物數(shù)量還需適當(dāng)增加。實驗分組時還應(yīng)考慮到動物性別的影響。如果條件允許，可選擇雌雄各半進(jìn)行實驗，但應(yīng)保證雌雄動物的實驗數(shù)據(jù)均應(yīng)具有統(tǒng)計學(xué)意義；若條件不允許，考慮到雌性動物的生理因素，選擇雄性動物進(jìn)行實驗為好。三、實驗動物的抓取和固定小鼠的捉取與固定小白鼠正常體溫37℃左右，小鼠性情比較溫順，一般不會主動咬人。在小鼠較安靜時打開鼠籠蓋，一般情況下用右手在靠近鼠尾尾根部捏住并將其提起，放在較粗糙的平面或鼠籠蓋上，輕輕地向后拉鼠尾，當(dāng)其向前爬行時，用右手拇指和食指捏住小鼠頸部皮膚和兩耳，捏住的皮膚要適量，太多太緊小鼠會窒息，太少太松小鼠會回頭咬傷實驗者。捏住后翻轉(zhuǎn)右手，掌心向上，將鼠體置于右手掌心中，左手拉住小鼠尾部，用左手無名指或小指壓緊尾根，使小鼠身體成一條直線（圖2）。此種抓取固定方法適用于肌肉注射、腹腔注射、灌胃等操作。圖1小鼠的抓取圖2小鼠固定豚鼠的抓取與固定豚鼠正常體溫38.6(37.8～39.5)℃，豚鼠性情溫順，一般不咬人。抓取時，不能粗暴，更不能抓腰腹部，這樣易造成肝破裂而引起死亡。抓取幼小的豚鼠時，可用雙手捧起。抓取較大的豚鼠時，可將手輕輕地伸進(jìn)籠子，先用手掌扣住豚鼠的背部，抓住其肩胛上方，將左手張開，用手指抓住頸部慢慢將其提起。懷孕或體重較大的豚鼠，應(yīng)用右手托起臀部（圖4）。圖3大鼠的抓取圖4豚鼠的抓取及固定四、注射免疫方法(一)皮下注射皮下注射一般選取皮下組織疏松的部位，大鼠、小鼠和豚鼠可在頸后肩胛問、腹部兩側(cè)作皮下注射，豬的皮下注射部位為耳根部皮下。牛的皮下注射部位是頸部的兩側(cè)或者肩胛后方的胸側(cè)皮膚容易移動的部位。皮下注射時，先用酒精棉球消毒需注射部位的皮膚，再將皮膚提起，進(jìn)針時，從頭部方向刺入皮下，再沿體軸方向?qū)⒆⑸溽樛七M(jìn)5～10mm，若針尖易左右擺動，表明已刺入皮下。然后輕輕抽吸，如無回流物可緩慢注射藥液。注射完畢，緩慢拔出注射針，用干棉球壓針刺部位，以防止藥液外漏。(二)肌肉注射肌肉注射一般選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位。大鼠、小鼠、豚鼠可注射大腿外側(cè)肌肉。豬的肌肉注射部位為頸部肌肉或者耳后肌肉。牛的肌肉注射部位是頸部三角區(qū)（項韌帶下緣，胸頭肌后緣，肩胛骨前方圍成的）、后臀的前外側(cè)（髖結(jié)節(jié)后面的）。(三)腹腔注射給大鼠、小鼠進(jìn)行腹腔注射時，以左手固定動物，使腹部向上，為避免傷及內(nèi)臟，應(yīng)盡量使動物頭處于低位，使內(nèi)臟移向上腹，右手持注射器從下腹兩側(cè)向頭方刺入皮下，針頭稍向前，再將注射器沿45℃角斜向穿過腹肌進(jìn)入腹腔，此時有落空感，回抽無回血或尿液，即可注入藥液。（四）皮內(nèi)注射皮內(nèi)注射用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反應(yīng)。大鼠、小鼠、豚鼠、家兔等動物皮內(nèi)注射常選擇背部脊柱兩側(cè)的皮膚。豬的皮內(nèi)注射一般選取耳殼外面或腹側(cè)皮膚注射。操作時需先將動物注射部位脫毛，酒精棉球消毒局部，用左手將皮膚捏成皺襞，右手持注射針，將針頭與皮膚大約呈30℃角刺入皮下，然后使針頭向上挑起并稍刺入，即可注射。注射后，皮膚表面可見鼓起一小丘，停留片刻拔出針頭。五、采血方法（一）大鼠、小鼠的采血方法：1、尾尖采血：此種采血方法血量很少，約1～2滴，可以做血涂片、試紙檢測血糖等實驗。動物固定露出尾巴，用酒精擦拭尾尖，使血管擴(kuò)張，然后剪去尾尖1mm～2mm(小鼠)或3mm～5mm(大鼠)，血液即可流出。若剪尾后，未見血，可用手沿尾根部至尾尖部捋尾巴，血液即可流出，取血后用干棉球壓迫止血。2、眼眶后靜脈叢采血：是以采血管刺破后眼眶靜脈叢進(jìn)行采血的方法。操作者一手固定小鼠或大鼠，食指和拇指輕輕壓迫頸部兩側(cè)，使眶后動靜脈充血，另一只手持玻璃制的毛細(xì)采血管（小鼠采血管直徑約1mm，大鼠采血管直徑約2mm）以大約45℃角從內(nèi)眼角刺入，并向下旋轉(zhuǎn)，感覺刺入血管后，再向外邊退邊吸，使血液順取血管自由流入小管中，當(dāng)?shù)玫剿柩亢螅潘杉佑陬i部的壓力，并拔出采血器，以防穿刺孔出血。采血后，用消毒紗布壓迫眼球止血30s。若技術(shù)熟練，此方法在短期內(nèi)可重復(fù)采血，小鼠一次可取血0.2ml～0.3ml左右,大鼠可取血約0.5ml～1ml。3、摘眼球采血：若一次性采血可選擇摘眼球法從眶動脈或眶靜脈采血。取血時左手固定動物，將動物頭部皮膚繃緊，眼球突出，右手持眼科彎鑷夾住眼球根部，將眼球迅速摘出，并立即將鼠倒置，頭朝下使眼眶內(nèi)動靜脈血液流入容器。(二)豚鼠采血方法1、耳緣切口采血：先將豚鼠耳消毒，用刀片割破耳緣，則血可自動流出而進(jìn)入容器。此法能采血約0.5ml。2、背中足靜脈采血：將豚鼠后肢關(guān)節(jié)伸直，提到實驗者面前。實驗者將動物腳背面用酒精消毒，找出背中是靜脈后，用左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手持注射針刺入靜脈，抽出注射針后即有血液滲出。豬采血方法耳靜脈采血：適用于40Kg以上的中大豬或種豬。采用站立保定，由1名助手用豬保定器套住豬的上頜骨、收緊，用力向前方牽引，另一助手在豬耳根處用力壓住耳靜脈近心端，采血員左手拉伸豬耳，右手用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張后，右手持連接9號針頭的注射器，沿血管走向刺入，針頭與豬耳水平面呈10～15℃角進(jìn)針，回血后，緩慢抽取所需血液量后，用干棉球或棉簽按壓止血。前腔靜脈采血法：20～30Kg的小豬。一般用仰臥保定法，由一名助手抓握兩后肢，盡量向后牽引，另一助手用手將下頜骨下壓，使頭部貼地，并使兩前肢與體中線基本垂直。此時，兩側(cè)第一對肋骨與胸骨結(jié)合處的前側(cè)方呈兩個明顯的凹窩。采血員用酒精棉球消毒皮膚后，手持連接7～9號針頭的一次性注射器（10～40Kg小豬，選擇9×25毫米針頭；10Kg以下乳豬，選擇7×20毫米針頭），向右側(cè)凹窩處，由上而下，稍偏向中央及胸腔方向刺入，見有回血，即可采血，采血完畢，左手拿酒精棉球緊壓針孔處，右手迅速拔出采血針管，稍壓片刻止血后，解除保定。40Kg以上的中大豬，采用站立式保定，由一名助手用豬保定器套住豬的上頜骨、收緊，用力向前上方牽引，使豬的上頜骨稍稍吊起，兩前肢剛剛著地，讓豬的胸前凹窩充分暴露，采血員用酒精棉球消毒皮膚后，手持連接12×38毫米針頭的一次性注射器，朝右側(cè)胸前凹窩最低處，由下而上，且垂直凹窩方向進(jìn)針，見回血后，標(biāo)志已刺入血管，輕輕抽動注射器活塞，采取血液。采血完畢，拔出針頭，術(shù)部用酒精棉球壓迫片刻止血后，解除保定。牛采血方法1、牛、羊靜脈采血：將動物保定，稍抬頭頸，于經(jīng)脈溝上1/3與中1/3交界部剪毛消毒，一手拇指按壓采血部位下方頸靜脈溝血管，促使靜脈怒張，另一手執(zhí)針頭，與皮膚呈45℃角，由下向上方刺入，血液順器壁流入容器內(nèi)，防止氣泡產(chǎn)生。待血量達(dá)到要求后，拔下針頭，用消毒棉球按壓針眼，輕按止血。2、牛尾靜脈采血：固定動物，使牛尾往上翹，手離尾根部約30cm。在離尾根10cm左右中點凹陷處，先用酒精棉球消毒，然后將采血針垂直刺入（約1cm深）。針頭觸及尾骨后再退出1mm進(jìn)行抽血。采血結(jié)束，消毒并按壓止血。3、乳房靜脈采血：奶牛、奶山羊可選乳房靜脈采血，奶牛腹部可看到明顯隆起的乳房靜脈，消毒后在靜脈隆起處，針頭向后肢方向快速刺入，見有血液回流，緩慢抽取所需量血液或接入真空采血管。六、不同動物感染FMDV后的癥狀：（一）豬口蹄疫的癥狀與病變：潛伏期為24h至7天，少數(shù)可達(dá)到14天，開始時，病豬發(fā)熱，可達(dá)到41℃，精神萎頓，打盹，豬蹄底部或蹄冠部皮膚潮紅、腫脹，繼而出現(xiàn)水泡，行走呈跛行，有明顯的痛感，行走發(fā)出凄厲的尖叫聲，很快蹄殼脫落，蹄部不敢著地，病豬跪行或臥地不起，鼻頸部出現(xiàn)一個或數(shù)個水泡，黃豆大或乒乓球大小不等，水泡很快破裂，露出鮮色潰瘍面，如無細(xì)菌感染，傷口可在一周左右逐漸結(jié)痂愈合。哺乳母豬的乳頭常出現(xiàn)水泡，引起疼痛而拒絕哺乳；哺乳仔豬出現(xiàn)急性胃腸炎、急性心肌炎或四肢麻痹，衰弱死亡，死亡率可達(dá)80%以上；大豬解剖一般特征性病變，少數(shù)可見胃腸出血性炎癥。仔豬呈現(xiàn)典型的“虎斑心”，心肌外出現(xiàn)黃色條紋斑，心外膜有不同程度的出血點，個別肺有氣腫現(xiàn)象。（二）?？谔阋叩陌Y狀與病變：口蹄疫病毒侵入動物體內(nèi)后，經(jīng)過2～3日，有的則可達(dá)7～21日的潛伏時間，才出現(xiàn)癥狀。癥狀表現(xiàn)為口腔、鼻、舌、乳房和蹄等部位出現(xiàn)水泡，12～36h后出現(xiàn)破潰，局部露出鮮紅色糜爛面；體溫升高達(dá)40～41℃；精神沉郁，食欲減退，脈搏和呼吸加快；流涎呈泡沫狀；乳頭上水泡破潰，擠乳時疼痛不安；蹄水泡破潰，蹄痛跛行，蹄殼邊緣潰裂，重者蹄殼脫落。犢牛常因心肌麻痹死亡，剖檢可見心肌出現(xiàn)淡黃色或灰白色、帶狀或點狀條紋，似如虎皮，故稱“虎斑心”。有的牛還會發(fā)生乳房炎、流產(chǎn)癥狀。牛的潛伏期2～7天，可見體溫升高40～41℃，流涎，很快在唇內(nèi)、齒齦、舌面、頰部粘膜、蹄趾間及蹄冠部柔軟皮膚以及乳房皮膚上出現(xiàn)水泡，水泡破裂后形成紅色爛斑，之后糜爛逐漸愈合，也可能發(fā)生潰瘍，愈合后形成斑痕。病畜大量流涎，少食或拒食；蹄部疼痛造成跛行甚至蹄殼脫落。該病在成年牛一般死亡率不高，在1%～3%之間，但在犢牛，由于發(fā)生心肌炎和