人6酮前列腺素（6-K-PG）ELISA試劑盒簡介說明

第第頁人6酮前列腺素（6—K—PG）ELISA試劑盒簡介說明人6酮前列腺素（6KPG）ELISA試劑盒[試驗原理]試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人6酮前列腺素（6KPG）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人6酮前列腺素（6KPG）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。[樣本處理及要求]1.血清：將收集于血清分別管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)避開反復(fù)凍融。2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑手記標本，并將標本在手記后的30分鐘內(nèi)于28℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)避開反復(fù)凍融。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS（0.01M,pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，譬如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，實在體積可依據(jù)試驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。介紹在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲碎裂，或反復(fù)凍融。最終將勻漿液于5000×g離心5～10分鐘，取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)避開反復(fù)凍融。注：標本溶血會影響最終檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。[需要而未供應(yīng)的試劑和器材]1.酶標儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱4.蒸餾水或去離子水[注意事項]1.嚴格依照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。全部試劑都必需在使用前實現(xiàn)室溫2025℃。使用后立刻冷藏保管試劑。2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3.除去板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。5.避開試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。6.在儲存和溫育時避開強光直接照射。7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝集在冷板條上。8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的猛烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。9.不能使用過期產(chǎn)品。10.假如可能傳播疾病，全部的樣品都應(yīng)管理好，依照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。[試劑準備]試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。[操作步驟]1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。[試驗結(jié)果計算]以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。[試劑盒性能]1.檢測范圍：12.5pg/mL–400