農(nóng)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)-瘦肉精的快速檢測(cè)技術(shù)

獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)什么是獸藥殘留獸藥殘留的原因獸藥殘留的種類及危害獸藥殘留的檢測(cè)01020304主要內(nèi)容導(dǎo)語(yǔ)保證食品安全，助力健康中國(guó)！什么是獸藥殘留？一、什么是獸藥殘留獸藥：用于治療、診斷動(dòng)物疾病或者有目的的調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能的物質(zhì)（含藥物，飼料添加劑）。血清制品疫苗診斷制劑微生態(tài)制品中藥材中成藥化學(xué)藥品抗生素生化藥品放射性藥品及外用殺蟲劑消毒劑什么是獸藥殘留？獸藥殘留：指用藥后蓄積或存留于畜禽機(jī)體或產(chǎn)品（如肉、蛋、奶等）中原型藥物或其代謝產(chǎn)物，包括與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)的殘留。一般以μg/ml或μg/g計(jì)量。一、什么是獸藥殘留獸藥殘留的原因二、獸藥殘留的原因用藥劑量、途徑、部位、動(dòng)物種類不符合要求獸藥使用不規(guī)范休藥期過(guò)短不遵守休藥期動(dòng)物性食品保鮮動(dòng)物食品加工過(guò)程使用獸藥掩飾臨床癥狀、逃避屠宰檢查屠宰前用藥用法指示不當(dāng)藥物標(biāo)簽不規(guī)范獸藥殘留的種類和危害毒副作用大，因具有致癌和致突變作用，已禁止用作飼料添加劑硝基呋喃類鹽酸克倫特羅（瘦肉精）、萊克多巴胺β興奮劑類主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、胺二甲嘧啶磺胺類青霉素類、β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氯霉素類等抗生素類左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等抗寄生蟲藥獸藥殘留的種類三、獸藥殘留的種類和危害己烯雌酚、孕酮激素類抗菌譜廣、殺菌力強(qiáng)，如諾氟沙星、氧氟沙星等氟喹諾酮類毒性：急性中毒、慢性中毒三致：致癌、致畸、致突變誘導(dǎo)耐藥菌株過(guò)敏反應(yīng)激素樣作用破壞人體胃腸菌群平衡三、獸藥殘留的種類和危害20世紀(jì)50年代就建立了動(dòng)物食品檢驗(yàn)檢疫制度20世紀(jì)90年代開始開展獸藥殘留的基礎(chǔ)研究和監(jiān)控工作1999年，中國(guó)獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃建立例行監(jiān)測(cè)制度2001年，啟動(dòng)全國(guó)獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃，農(nóng)業(yè)部每年頒布《動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃》

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4GB31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留量》2020年4月1日起正式實(shí)施

5三、獸藥殘留的種類和危害獸藥殘留的檢測(cè)四、獸藥殘留的檢測(cè)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)目的：為加強(qiáng)獸藥殘留監(jiān)控工作，保證動(dòng)物性食品衛(wèi)生安全A.不需要制定最高殘留限量的藥物：88B.需要制定最高殘留限量的藥物：94C.可以使用，但不得在食品中檢出的藥物：9D.禁止使用，且不得在食品中檢出的藥物：31藥物食品推薦檢測(cè)方法體檢限（μg/kg或μg/l）殘留限量MRL(μg/kg)四環(huán)素肝肉、肝、腎GC、HPLCHPLC-MS-MS15≤100氯霉素類水產(chǎn)品、肌肉、牛奶GC、GC-MS、HPLCELISAHPLC-MS-MS0.30.1不得檢出磺胺類水產(chǎn)品、肌肉、牛奶HPLCHPLC-MS-MS205≤100硝基呋喃類及代謝物水產(chǎn)品、肌肉、牛奶HPLC-MS-MSGC-MSELISA0.510.1不得檢出Β-受體激動(dòng)劑豬肉、豬肝、豬肺、豬尿GC-MS、HPLC、HPLC-MS-MSELISA1?211不得檢出激素類魚肉、雞肉、肉、奶和蝦ELISAGC-MSHPLC-MS-MS0.610.4?2不得檢出四、獸藥殘留的檢測(cè)樣品處理分析檢測(cè)提取凈化濃縮衍生化分辨檢測(cè)采樣與樣品預(yù)處理固相萃取固相萃?。豪霉腆w吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品中的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。檢測(cè)步驟四、獸藥殘留的檢測(cè)酶聯(lián)免疫法（ELISA）：選擇性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)單、快速液相色譜法（HPLC）:常規(guī)分析法、最多采用儀器聯(lián)用法：LC-MS、GC-MS、TLC-MS常用方法氣相色譜法（GC）:常規(guī)分析法檢測(cè)方法四、獸藥殘留的檢測(cè)獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)瘦肉精簡(jiǎn)介ELISA法及檢測(cè)原理檢測(cè)方法演示介紹01020304主要內(nèi)容瘦肉精簡(jiǎn)介導(dǎo)語(yǔ)瘦肉精事件2021年，央視315特別節(jié)目曝光,河南孟州等地使用瘦肉精喂豬喂羊，幾乎成了公開的秘密，當(dāng)?shù)氐膭?dòng)物檢疫機(jī)構(gòu)形同虛設(shè)。早在2002年，我國(guó)就已嚴(yán)禁瘦肉精作為獸藥和飼料添加劑。一、瘦肉精簡(jiǎn)介

“瘦肉精”是指能促進(jìn)動(dòng)物瘦肉生長(zhǎng)的一類藥物的總稱。主要包括鹽酸克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、西巴特羅、鹽酸多巴胺7種腎上腺類神經(jīng)興奮劑。一、瘦肉精簡(jiǎn)介又名克喘素、氨哮素、氨必妥、氨雙氯喘通。鹽酸克倫特羅的特點(diǎn)不溶于乙醚，微溶于氯仿或者丙酮，易溶于水、乙醇。在人體內(nèi)分布快、消除慢白色或者接近白色的結(jié)晶體粉末，味苦，無(wú)臭?；瘜W(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。一、瘦肉精簡(jiǎn)介急性中毒頭暈、頭痛、多汗、肌肉酸痛、四肢震顫、胸悶以及心悸。慢性中毒神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)疾病。三致效應(yīng)

致癌、致畸、致突變鹽酸克倫特羅的危害ELISA法及檢測(cè)原理二、ELISA法及檢測(cè)原理酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、速度快、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低。缺點(diǎn)：在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)時(shí)不適用，假陽(yáng)性率高?？蓪?duì)待檢樣品進(jìn)行定量檢測(cè)。在酶標(biāo)板孔條上預(yù)包被克倫特羅抗原，樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)抗克倫特羅抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物（標(biāo)記物為辣根過(guò)氧化物酶）顯色，樣本吸光值與其殘留物克倫特羅呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，再乘以其相對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中克倫特羅的含量。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的檢測(cè)原理二、ELISA法及檢測(cè)原理檢測(cè)方法三、檢測(cè)方法儀器、耗材和試劑儀器:微孔板酶標(biāo)儀450/630nm、電子秤、漩渦混合振蕩器、離心機(jī)（15ml管和1.5mlep管）、恒溫培養(yǎng)箱耗材:小號(hào)研缽、15ml離心管、1.5mlep管、（10-50μl、50-250μl)微量移液器及配套槍頭、3ml一次性吸管、酶標(biāo)板架、濾紙三、檢測(cè)方法儀器、耗材和試劑試劑：1MNaOH、組織樣本提取液(80ml25%甲醇+20ml0.1M鹽酸)克倫特羅酶標(biāo)物、克倫特羅抗試劑、洗滌液（1:9體積稀釋)底物A、底物B、終止液、標(biāo)準(zhǔn)品:濃度為0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb(十億分之一、10-9)，對(duì)照品:濃度為100ppb三、檢測(cè)方法4000r/min，10min1ml上清+20μl1MNaOH,混勻,4000r/min，5min20μl上清液用于分析樣品前處理2g肉，剪刀剪碎，研缽內(nèi)研成勻漿6ml組織樣本提取液，振蕩器混勻三、檢測(cè)方法微孔板編號(hào)：如1-6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，8號(hào)樣品等加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品:微孔中加入20μl樣品或標(biāo)準(zhǔn)品+50μl克倫特羅酶標(biāo)物+80μl克倫特羅抗試劑，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25℃避光30min。洗板:孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300μl/孔，充分洗滌5次每次間隔30s，用吸水紙拍干（若有未拍干的氣泡用槍頭戳破)。顯色:每孔加入50μl底物A+50ul底物B，輕輕振蕩混勻，蓋板膜蓋板后，25℃避光15-20min(藍(lán)色)。測(cè)定:加入50μl終止液（黃色），輕輕振蕩混勻。酶標(biāo)儀450/630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)（可在加入終止液前目測(cè)含量)。分析三、檢測(cè)方法結(jié)果判定酶標(biāo)儀采用對(duì)數(shù)回歸計(jì)算法，得出樣品液中瘦肉精含量，最后通過(guò)計(jì)算得出樣品中瘦肉精的含量豬肉中克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)：加拿大和WHO是40ppb,而聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織則是10ppb。中國(guó)、日本和新西蘭規(guī)定該國(guó)生產(chǎn)不許使用，但進(jìn)口豬肉中則允許有小于10ppb的殘留。三、檢測(cè)方法注意事項(xiàng)①試劑使用前要回復(fù)到室溫否則影響結(jié)果（室溫放置30min以上)②洗板拍干后要立即進(jìn)行下一步否則影響結(jié)果③每加一種試劑前需輕輕搖勻④終止液為2M濃硫酸，避免接觸皮膚.⑤0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)的吸光值小于0.5時(shí)，試劑可能變質(zhì).⑥加入底物A和B顯色放應(yīng),若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到30min，反之則減少反應(yīng)時(shí)間7.最佳反應(yīng)溫度是25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致結(jié)果誤差。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)萊克多巴胺簡(jiǎn)介速測(cè)卡法及檢測(cè)原理檢測(cè)方法演示介紹01020304主要內(nèi)容萊克多巴胺簡(jiǎn)介一、萊克多巴胺簡(jiǎn)介

萊克多巴胺(ractopamine）是一種腎上腺受體激動(dòng)劑，屬于第二代瘦肉精，可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。萊克多巴胺，豬肉中的“三聚氰胺”！一、萊克多巴胺簡(jiǎn)介

過(guò)量攝入萊克多巴胺，人體會(huì)出現(xiàn)不同程度的中毒反應(yīng)，其癥狀與動(dòng)物中毒癥狀相似，表現(xiàn)為肌肉震顫、四肢麻痹、心動(dòng)過(guò)速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、惡心眩暈等癥狀，重者可引發(fā)高血壓、心臟病甚至死亡。因此，我國(guó)政府禁止在飼料中使用萊克多巴胺。速測(cè)卡法及檢測(cè)原理二、速測(cè)卡法及檢測(cè)原理萊克多巴胺快速檢測(cè)卡的特點(diǎn)檢測(cè)靈敏度高，結(jié)果直觀：飼料樣品靈敏度為10ppb，組織、肉樣、肝臟樣品靈敏度為5ppb，準(zhǔn)確率大于95%。樣本量需要少簡(jiǎn)單快速無(wú)需特殊的儀器設(shè)備二、速測(cè)卡法及檢測(cè)原理萊克多巴胺快速檢測(cè)卡的結(jié)構(gòu)二、速測(cè)卡法及檢測(cè)原理檢測(cè)原理動(dòng)畫二、速測(cè)卡法及檢測(cè)原理檢測(cè)原理

采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析法，在硝酸纖維素膜（NC膜）上包被檢測(cè)線（T線）和對(duì)照線（C線），T線包被Rac-BSA，C線包被羊抗鼠IgG，樣品孔加入樣本后，在層析的過(guò)程中，樣本中的萊克多巴胺（Rac）與膠體金標(biāo)記的鼠抗萊克多巴胺單抗結(jié)合，抑制了膠體金標(biāo)記的鼠抗萊克多巴胺單抗和NC膜T線上的Rac-BSA的結(jié)合，由此判斷樣本中是否含有萊克多巴胺（Rac）。檢測(cè)方法三、檢測(cè)方法耗材和試劑（1）膠體金快速檢測(cè)卡（2）吸管（3）干燥劑（4）PBST緩沖液三、檢測(cè)方法樣品制備

肉:裝入大約4克碎的豬肉樣本(肉泥)于5ml的離心管中(醬豬牛肉加2ml水或PBS)，蓋緊管蓋；

在80℃左右的水浴鍋中水浴10分鐘，吸取煮出的溶液到1.5ml的離心管中。如有明顯黃色渾濁請(qǐng)離心(3000rpm,5min)，取上清檢測(cè)。

如果檢測(cè)牛肉，應(yīng)吸出肉湯離心(3000rpm,5min)，取上清檢測(cè)。三、檢測(cè)方法檢測(cè)步驟1.在進(jìn)行測(cè)試前先完整閱讀使用說(shuō)明書，使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。2.從原包裝中取出試劑，打開后平放在桌面上，請(qǐng)?jiān)?小時(shí)內(nèi)盡快使用。3.吸取待檢樣品溶液，緩慢滴加80~100ul(約2~3滴)于加樣孔中，加樣后開始計(jì)時(shí)。4.將試紙平放1分鐘，等待紅色條帶出現(xiàn)。5.在5分鐘內(nèi)讀取結(jié)果，超過(guò)5分鐘的結(jié)果判讀無(wú)效。三、檢測(cè)方法結(jié)果判定陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶。在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無(wú)紫紅色條帶出現(xiàn)。陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測(cè)