使用紫外-可見分光光2023年年度法鑒別藥品P

主講老師：陳郁生物制藥技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法及其應(yīng)用

紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質(zhì)溶液時，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin紫外-可見分光光度法及其應(yīng)用

因此，可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸光度比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度（朗伯-比爾定律A=lg(1/T)=Kbc）。含量測定一般有以下幾種方法：對照品比較法、吸收系數(shù)法、計算分光光度法、比色法。基本結(jié)構(gòu)圖紫外-可見分光光度計結(jié)構(gòu)圖比色皿須潔凈01手指拿毛玻璃面的兩側(cè)02透光面用擦鏡紙從上而下擦拭干凈03柔紅霉素使用多個比色皿時，需配對使用（透光率相差在0.3%以下）04氮芥比色皿注意事項波長小于300nm須使用石英比色皿05紫外-可見分光光度計的校正1.波長：由于環(huán)境因素對機械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用儀器進行全面校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長，常用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，儀器波長的允許誤差為：紫外光區(qū)±1nm，500nm附近±2nm2.吸光度的準確性：可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定，檢定要求見表格紫外-可見分光光度計的校正紫外-可見分光光度計的校正3.雜散光的檢查：可用1.0%碘化鈉，5.00%亞硝酸鈉，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定1.對溶劑的要求：含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220~240nm范圍內(nèi)不得超過0.40，在241~250nm范圍內(nèi)不得超過0.20，在251~300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05。注意事項01測定時，一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3~0.7之間為宜。02儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半高寬度的1/10，否則測得的吸光度會偏低。03吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。04當溶液的p