檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器

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化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器

1檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20242第一節(jié)

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

第二節(jié)

電化學(xué)發(fā)光免疫分析

第三節(jié)

時間分辨熒光免疫分析法

第四節(jié)

熒光偏振免疫分析法

第五節(jié)

化學(xué)發(fā)光免疫分析的臨床應(yīng)用

內(nèi)容概述:2檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20243教學(xué)目標(biāo)和要求

掌握化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的基本原理、反應(yīng)的底物和標(biāo)記方法以及反應(yīng)類型。

熟悉電化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理和標(biāo)記物，時間分辨熒光免疫分析法的基本原理及其標(biāo)記物和螯合物。

了解熒光偏振免疫分析法的基本原理和技術(shù)特點(diǎn)，化學(xué)發(fā)光免疫分析的臨床應(yīng)用

3檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20244第一節(jié)

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

?基本原理

?反應(yīng)的底物

?標(biāo)記方法

?反應(yīng)類型

?相關(guān)儀器

4檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20245一、基本原理

化學(xué)發(fā)光，是指伴隨化學(xué)反應(yīng)過程所產(chǎn)生的發(fā)光的發(fā)射現(xiàn)象。某些物質(zhì)在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時，吸收了反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，使反應(yīng)物分子形成電子激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài)返回到穩(wěn)定的基態(tài)時，多余的能量就以光子的形式發(fā)射出來。這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。

A+BC*+D,C*C+h?

5檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20246(一)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的條件和過程

?化學(xué)發(fā)光與熒光的區(qū)別:化學(xué)能

光能

?化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的條件:?反應(yīng)必須提供足夠的激發(fā)能焓變(△H)介于170～300kj·mol-1之間，才能在可見光范圍觀察到化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象

?吸收了化學(xué)能后處于激發(fā)態(tài)的分子或原子，必須以光子形式將能量釋放出來，或者將能量轉(zhuǎn)移到另一種物質(zhì)的分子上并使該分子激發(fā)，當(dāng)被激發(fā)的分子回到基態(tài)時，也以光子的形式釋放能量

6檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20247(二)化學(xué)發(fā)光效率

化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光效率(φCl)又稱為化學(xué)發(fā)光總能量的產(chǎn)生率

φCl取決于生成激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子的化學(xué)激發(fā)效率

(φCE)和激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子的發(fā)射效率(φEM)。

一般化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，φCl值約為10-6

7檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20248(三)強(qiáng)度與反應(yīng)物質(zhì)濃度之間的關(guān)系

反應(yīng)物的濃度

反應(yīng)速度

化學(xué)發(fā)光反應(yīng)所發(fā)出的光的強(qiáng)度

8檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20249(四)化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)類型

直接化學(xué)發(fā)光

間接化學(xué)發(fā)光

1．直接化學(xué)發(fā)光

化學(xué)反應(yīng)釋放的化學(xué)能激發(fā)的是反應(yīng)產(chǎn)物分子

A+BC*+D,C*C+h?

9檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024102．間接化學(xué)發(fā)光(敏化的化學(xué)發(fā)光)

在化學(xué)反應(yīng)中，激發(fā)能傳遞到另一個未參加化學(xué)反應(yīng)的分子上，使該分子達(dá)到電子激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)分子返回到基態(tài)時發(fā)光；或反應(yīng)首先生成一種高能量的中間體，此中間體再將能量轉(zhuǎn)移給另一個未參加化學(xué)反應(yīng)的分子，使該分子達(dá)到電子激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)分子躍遷回到基態(tài)時發(fā)光的過程。

A+BC*+D,C*+FF*+E,F*F+h?

10檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202411二、反應(yīng)的底物(發(fā)光劑或發(fā)光底物)

在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物

發(fā)光免疫技術(shù)中常用的化學(xué)發(fā)光底物:１．氨基苯二酰肼類

主要有魯米諾(3-氨基苯二甲酰肼，luminol)和異魯米諾(5-氨基苯二甲酰肼，isolumino1)及其衍生物。

2．瞇唑類化合物

較常用的是2，4，6-三苯基咪唑，即洛粉堿(lophine)。

3．吖啶酯類

典型代表是N，N-二甲基二吖啶硝酸酯，即光澤精(1ucigenin)。

4．苯酚類化合物

其中主要有鄰苯三酚，即焦性沒食子酸。

5．芳香草酸酯類

主要有雙-(2，4，6，-三氯苯基)-草酸酯(TCPO)和雙-(2，4-二硝基苯基)-草酸酯(DNPO)。

6．(金剛烷)-1，2-二氧乙烷及其衍生物

11檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20241212檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202413三、標(biāo)記方法

化學(xué)標(biāo)記

生物標(biāo)記

化學(xué)標(biāo)記:用于化學(xué)發(fā)光(酶)免疫測定

?直接用發(fā)光物質(zhì)(如魯米諾、吖啶酯類等)標(biāo)記抗體或抗原

?以催化劑(如HRP、GOD等)和／或協(xié)同因子(如ATP、NAD等)標(biāo)記抗體或抗原

?按照標(biāo)記物的應(yīng)用:13檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202414?按照被標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)或性質(zhì):對小分子物質(zhì)(如甾體激素、藥物等)的標(biāo)記

對大分子抗原、抗體的標(biāo)記(如蛋白質(zhì)、核酸等)以及對某些配基和載體的標(biāo)記

14檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202415?按照標(biāo)記反應(yīng)的過程和形成結(jié)合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn):直接偶聯(lián)

間接偶聯(lián)

通過偶聯(lián)反應(yīng)，使標(biāo)記物分子中的反應(yīng)基團(tuán)直接連接在被標(biāo)記分子的反應(yīng)基團(tuán)上。

在標(biāo)記物與被標(biāo)記物之間插入一條鏈或一個基團(tuán)，使兩種物質(zhì)通過這種引入的“橋”連結(jié)成結(jié)合物

碳二亞胺縮合法、過碘酸鹽氧化法、重氮鹽偶聯(lián)法和混合酸酐法

琥珀酰亞胺活化法、O-(羧甲基)羥胺法、異硫氰酸酯衍生物和戊二醛法

15檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/20241616檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202417常用的標(biāo)記方法

1．碳二亞胺（EDC）縮合法

此法可用于蛋白質(zhì)分子中的游離羧基或游離氨基的標(biāo)記。常用的縮合劑有l(wèi)-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)直接偶聯(lián)

17檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024182．重氮鹽偶聯(lián)法(又稱重氮化法)

此法簡易、成本低、重復(fù)性好，但不適用于脂肪伯胺基發(fā)光劑，因其生成的重氮鹽不穩(wěn)定，即使在０℃也會生成氮?dú)狻４送?，ABEI等伯胺基位于側(cè)鏈者也不適用此法。

芳香伯胺

直接偶聯(lián)

18檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024193．過碘酸鹽氧化法

標(biāo)記物可用發(fā)光劑或催化劑，適用于芳香伯胺或脂肪伯胺發(fā)光劑，標(biāo)記方法穩(wěn)定標(biāo)記物不易脫落，但此法不適用于無糖基的蛋白質(zhì)和含有糖基但氧化后會影響免疫學(xué)活性的蛋白質(zhì)。

直接偶聯(lián)

19檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024204．戊二醛法

間接偶聯(lián)

芳香伯胺基

氨基

由于戊二醛在溶液中以單體和聚合體形式存在，后者占多數(shù)，所以在標(biāo)記反應(yīng)中雙方分子間構(gòu)成較大的距離，減少了在抗原抗體反應(yīng)時的空間位阻；但因偶聯(lián)不易定量控制且缺乏特異性等而未得到廣泛應(yīng)用

雙功能偶聯(lián)劑

20檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024215．琥珀酸酐法(環(huán)內(nèi)酸酐法)間接偶聯(lián)

此法沒有雙功能交聯(lián)劑的不良反應(yīng)，能實(shí)現(xiàn)標(biāo)記物和蛋白質(zhì)分子間的單向定量縮合，標(biāo)記效率高，已有商品化試劑供應(yīng)。

21檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024226．異硫氰酸酯衍生物法

此法標(biāo)記溫和、穩(wěn)定，獲得的標(biāo)記物不易脫落，且不損失蛋白質(zhì)等的生物活性

發(fā)光標(biāo)記物

標(biāo)記物

間接偶聯(lián)

22檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024237．O-(羧甲基)羥胺法

O--羧甲基衍生物

8．混合酸酐法

23檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202424四、反應(yīng)類型

?化學(xué)發(fā)光免疫分析

?化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

?微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析

根據(jù)發(fā)光免疫分析中發(fā)光反應(yīng)的不同體系和標(biāo)記方法不同

24檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024251.化學(xué)發(fā)光免疫分析

(chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)

用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體,免疫反應(yīng)后生成標(biāo)記的免疫復(fù)合物,通過啟動發(fā)光試劑(NaOH-H2O2)作用于AE而發(fā)光，發(fā)光強(qiáng)度依賴于免疫反應(yīng)物中化學(xué)發(fā)光劑的濃度。

?原理:?常用化學(xué)發(fā)光劑:吖啶酯(acridiniumester，AE)類化合物

?反應(yīng)特點(diǎn):

CLIA檢測小分子抗原采用競爭法；大分子抗原則采用夾心法。與大分子的結(jié)合不會減小所產(chǎn)生的光量，從而增加靈敏度。

強(qiáng)烈的直接發(fā)光在1s內(nèi)完成，為快速的閃爍發(fā)光。

?應(yīng)用:25檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024261)直接化學(xué)發(fā)光使用吖啶酯(AE)作為標(biāo)記物，無需附加催化劑。AE氧化直接發(fā)光，氧化反應(yīng)在430nm處快速發(fā)光并在1s內(nèi)達(dá)到峰值。發(fā)光強(qiáng)度是I125在1min內(nèi)發(fā)光強(qiáng)度的十萬倍，因此系統(tǒng)該具有高速度、產(chǎn)光強(qiáng)等特點(diǎn)。

2)AE有甲基，增加了試劑的穩(wěn)定性，使試劑的穩(wěn)定性好，有效期更長。

3)AE作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，對溫度及pH等外界環(huán)境的變化不敏感，故其具有很高的精密度。

4)AE相對分子質(zhì)量水常小(MW：481)，使其對結(jié)合反應(yīng)的空間位阻作用減少，增加擴(kuò)散率，提高了靈敏度，可達(dá)l0-15mol·L-1。

5)AE是以共價鍵結(jié)合抗體而不影響抗體結(jié)合抗原的反應(yīng)，故不影響發(fā)光。

6)AE加堿后，發(fā)光是在一暗盒中進(jìn)行，其光量值與濃度有著良好的線性關(guān)系，且本底較低。

吖啶酯的特點(diǎn)

26檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024272．化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

(chemiluminescentenzymeimmnunoassay，CLEIA)

采用參與發(fā)光效應(yīng)的酶作為標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原，免疫反應(yīng)后形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，利用魯米諾作為發(fā)光底物在酶和啟動發(fā)光試劑(NaOH-H2O2)的催化下，產(chǎn)生發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光強(qiáng)度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。

?原理:

底物

產(chǎn)物

發(fā)光

Ag+Ab*Ag-Ab**27檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202428?常用標(biāo)記物:辣根過氧化物酶(HRP)或ALP?反應(yīng)特點(diǎn):

①標(biāo)記物常標(biāo)記抗體；

②標(biāo)記物作為發(fā)光反應(yīng)的催化劑，本身不發(fā)光

。

28檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024293．微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析

(microparticlechemiluminescenceimmunoassay，MLIA?

以順磁性微粒作為載體包被抗體，利用磁性微粒能被磁場吸引，在磁力的作用下發(fā)生力學(xué)移動的特性，迅速捕捉到被測抗原。

?

加入堿性磷酸酶標(biāo)記的第二抗體，形成磁性微粒包被抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物

?

經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合的抗體后，加入ALP的發(fā)光底物AMPDD，AMPDD被復(fù)合物上ALP催化發(fā)光,發(fā)射光所釋放的光子能量被光量子閱讀系統(tǒng)記錄，通過計算機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上轉(zhuǎn)換為待測抗原的濃度。

?原理:29檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202430AMPDD一側(cè)的芳香基團(tuán)上的磷酸酯被水解，失去一個磷酸基而生成一個中等穩(wěn)定的中間體AMPPD(半衰期2～30min)，此中間體通過內(nèi)部電子轉(zhuǎn)移而裂解為一分子的金剛烷酮和一分子激發(fā)態(tài)的間氧苯甲酸甲酯陰離子，當(dāng)回到基態(tài)時發(fā)出波長為470nm的光)30檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202431?常用標(biāo)記物:ALP?反應(yīng)特點(diǎn):

①可采用競爭法和夾心法,多采用雙抗體夾心法

②采用磁性微粒作為固相載體，以堿性磷酸酶作為標(biāo)記物，固相載體的應(yīng)用擴(kuò)大了測定的范圍,檢測水平可茯Pg·mL-1，重復(fù)性好。

31檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202432五、相關(guān)儀器介紹

ADVIACENTAUR全自動免疫分析儀

32檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202433(一)ADVIACENTAUR檢測原理

利用化學(xué)發(fā)光和磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法，用高敏感性的吖啶酯作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，以極細(xì)的磁性顆粒(PMP)作為固相載體，提供最大的包被面積

。

1．液相

吖啶酯(AE)。

2．固相

氧化鐵(Fe2O3)。

包被面積大,減少了擴(kuò)散時間,增加了捕獲效率

33檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202434(二)ADVIACENTAUR的反應(yīng)類型

1．雙抗體夾心法

34檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024352．競爭法

包括AE標(biāo)記抗原法和AE標(biāo)記抗體法。

35檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/2024363．捕獲法

常用來檢測樣本中的特異性抗體，又稱為抗體捕獲法。

試劑中使用了一種抗人免疫球蛋白的抗體?？贵w捕獲法通常使用兩次溫育和洗滌，第一次溫育和洗滌是為了除去樣品中過多的干擾物質(zhì)；第二次溫育和洗滌是為了檢測樣品中的抗體。

36檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202437第二節(jié)

電化學(xué)發(fā)光免疫分析

電化學(xué)發(fā)光

(electrochemiluminescence，ECL)

是對電極施加一定電壓進(jìn)行的電化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)的產(chǎn)物之間或體系中某種組分發(fā)生化學(xué)發(fā)光，用普通化學(xué)手段測量發(fā)光光譜及強(qiáng)度從而對物質(zhì)進(jìn)行痕量分析的一種方法。

電化學(xué)發(fā)光免疫分析

(electrochemiluminescenceimmunoassay，ECLIA)

是將ECL和免疫反應(yīng)(抗原抗體反應(yīng))融為一體的標(biāo)記免疫分析技術(shù),是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng).37檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202438一、基本原理

38檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202439技術(shù)特點(diǎn)

1．ECLIA為非核素方法，可避免核素的放射性污染

2．為均相免疫測定技術(shù)，檢測中不需要分離結(jié)合相和游離相，操作簡便

3．磁性微珠包被技術(shù)的應(yīng)用使檢測的靈敏度更高、線性范圍更寬、反應(yīng)時間更短。

4．標(biāo)記物Ru

穩(wěn)定性好，室溫下半衰期大于1年，所標(biāo)記的蛋白活性在2～4℃也可保持1年：以上。

5．標(biāo)記物可進(jìn)行化學(xué)修飾，以形成易于和蛋自、半抗原及核酸等分子結(jié)合的活性NHS酯或磷酰胺基團(tuán)，可用于各種分析物的檢測。

6．標(biāo)記物相對分子質(zhì)量小，在一個抗體分子上可同時標(biāo)記許多標(biāo)記物分子而不影響抗體的免疫學(xué)活性，也可用于核酸的標(biāo)記而不影響探針的雜交活性。

7．標(biāo)記物的再循環(huán)利用使發(fā)光反應(yīng)的時間更長、發(fā)光強(qiáng)度更高，更易于測定。

8．儀器的沒計使操作較為簡便，更易于實(shí)現(xiàn)自動化。

?23(byp)39檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202440二、標(biāo)記物

釕的衍生物，分子結(jié)構(gòu)簡單、穩(wěn)定、相對分子質(zhì)量小、水溶性強(qiáng)、空間位阻小等特點(diǎn)，可與待測物質(zhì)進(jìn)行全量反應(yīng)．使得ECLIA的測定具有高效性與穩(wěn)定性且沒有噪聲干擾。

三聯(lián)吡啶釕

40檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202441第三節(jié)

時間分辨熒光免疫分析法

一、基本原理

抗原抗體反應(yīng)

熒光物質(zhì)標(biāo)記

時間分辨技術(shù)

++?原理：

41檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202442

用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物(代替熒光物質(zhì)、放射核素或酶)，通過雙功能基團(tuán)的螯合劑與蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細(xì)胞以共軛雙鍵結(jié)合進(jìn)行標(biāo)記，待反應(yīng)體系(如抗原抗體免疫反應(yīng)、生物素親和素反應(yīng)、核酸探針雜交反應(yīng)、靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的殺傷反應(yīng)等)發(fā)生后，三價稀土離子螫合物可以在紫外光激發(fā)下，發(fā)出強(qiáng)度高(波長為613nm左右)、持續(xù)時間長(10～l000μs)的熒光，利用延緩測量時間，待樣品中蛋白質(zhì)等背景熒光完全淬滅后，再測量三價稀土離子螯合物的特異熒光，根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度的比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度，達(dá)到定量分析的目的

42檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202443?時間分辨技術(shù)消除背景熒光:

在檢測樣品中，含有各種蛋白質(zhì)和其他化合物，這些物質(zhì)在較大波長范圍內(nèi)都可產(chǎn)生自發(fā)熒光,壽命短.

鑭系離子熒光壽命很長（10us～1.0ms），比背景熒光長3～4個數(shù)量級。所以應(yīng)用熒光的時間分辨技術(shù)在背景熒光已經(jīng)降到很低時再開始檢測稀土鰲合物的熒光，從而消除了非特異性熒光的干擾。

?解離-增強(qiáng)原理:

?較大的Stocks位移（即激發(fā)光波長與發(fā)射光波長之差）

和較窄的發(fā)射峰等都增大了檢測的信噪比;?特點(diǎn)：

43檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器5/8/202444二、標(biāo)記物和螯合劑

1．TRFIA標(biāo)記物——三價