微生物快速檢測技術(shù)資料

8、微生物的快速檢測5/8/20241微生物快速檢測技術(shù)資料常見微生物檢測項目常規(guī)微生物項目：細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、酵母總數(shù)、霉菌總數(shù)。致病微生物項目：沙門氏菌、李斯特菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157：H7、彎曲桿菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志賀氏菌、假單胞菌等。5/8/20242微生物快速檢測技術(shù)資料國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T47891-40：食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗：菌落總數(shù)測定、大腸菌群計數(shù)、沙門氏菌檢驗、志賀氏菌檢驗、致泄大腸埃希氏菌檢驗、副溶血性弧菌檢驗、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗、空腸彎曲菌檢驗、金黃色葡萄球菌檢驗、溶血性鏈球菌檢驗、肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗、產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗、蠟樣芽孢桿菌檢驗、霉菌和酵母菌計數(shù)、常見產(chǎn)毒霉菌的鑒定、椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗、腸桿菌科噬菌體檢驗、大腸菌群快速測定、雙歧桿菌檢驗、乳酸菌檢驗、大腸埃希氏菌O157：H7/NM檢驗、阪崎腸桿菌檢驗等。5/8/20243微生物快速檢測技術(shù)資料政府檢測機構(gòu)為什么需要微生物快速檢測？提高檢測效率節(jié)約人力資源成本與國際接軌國內(nèi)外食品安全形勢嚴(yán)峻，惡性事件不斷發(fā)生。歐洲“二噁英”、“瘋牛病”（20世紀(jì)90年代）日本大腸桿菌O157:H7中毒（1996）中國SARS（2003）、東南亞國家禽流感（2004）美國菠菜大腸桿菌O157:H7污染事件（2006）日益嚴(yán)峻的食品安全局勢的需要5/8/20244微生物快速檢測技術(shù)資料企業(yè)為什么需要微生物快速檢測？市場銷售環(huán)節(jié)要求快速出貨。尤其是一些保質(zhì)期較短的產(chǎn)品。減少物流的壓力，盡可能減少倉存，加快資金周轉(zhuǎn)。節(jié)約人力資源成本（外資企業(yè)尤其突出）對于運行HACCP質(zhì)量保證體系的企業(yè)來說，快速檢測方法尤其重要?？梢钥焖贆z測原料及半成品的污染情況，以采取相應(yīng)的措施控制最終產(chǎn)品的微生物超標(biāo)情況。5/8/20245微生物快速檢測技術(shù)資料快速檢測方法勢在必行?。庠S多政府檢測機構(gòu)都在大量使用快速檢測方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和顯色培養(yǎng)基法在國外應(yīng)用相當(dāng)成功。國內(nèi)的許多政府檢測機構(gòu)也都已經(jīng)在使用或正在考慮使用國外先進(jìn)的快速檢測技術(shù)。從長遠(yuǎn)發(fā)展趨勢來說，快速方法是微生物檢測的一大方向。5/8/20246微生物快速檢測技術(shù)資料一、常規(guī)微生物快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀傳統(tǒng)計數(shù)改良法：1、螺旋平板計數(shù)法：螺旋接種儀＋菌落計數(shù)2、濾膜法：常用于一些可過濾樣品的檢測。3、紙片法：培養(yǎng)基固定在載體上。省去制做培養(yǎng)基的時間。主要用于細(xì)菌總數(shù)檢測。4、其它：如Simplate即用膠,改良MPN產(chǎn)品。5/8/20247微生物快速檢測技術(shù)資料螺旋平板法DWS螺旋平板接種儀aColyte自動菌落計數(shù)儀5/8/20248微生物快速檢測技術(shù)資料螺旋平板原理平皿旋轉(zhuǎn)接種針往外移動同時自動將樣品稀釋1000倍5/8/20249微生物快速檢測技術(shù)資料螺旋平板法的優(yōu)缺點優(yōu)點：與傳統(tǒng)方法相比，無需稀釋3個梯度，每個梯度倒2個平板，節(jié)省了大量人力物力。缺點：檢測時間并沒有縮短，菌落總數(shù)仍需要培養(yǎng)48小時。需要配合自動菌落計數(shù)儀，否則人工計數(shù)更麻煩。5/8/202410微生物快速檢測技術(shù)資料濾膜法濾膜法常用于可過濾樣品的微生物檢測。優(yōu)點：靈敏度增大，菌落無擴散情況，便于計數(shù)。缺點：需要額外的支出購買真空泵，多聯(lián)支架及一次性濾膜；如果抽濾過程空氣潔凈度不夠，有可能造成二次污染，尤其是對菌數(shù)要求特別嚴(yán)格的產(chǎn)品，如啤酒，澄清果汁，桶裝飲用水等。5/8/202411微生物快速檢測技術(shù)資料皿膜法—以紙片法為代表優(yōu)點：無需制備培養(yǎng)基，攜帶方便，非漫延菌落計數(shù)較方便。缺點：不能節(jié)省檢測時間。檢測成本相對偏高。大腸菌群紙片存在與MPN法無法對應(yīng)的問題，金黃色葡萄球菌紙片存在取樣量太低的問題。目前僅細(xì)菌總數(shù)紙片有一些用戶。紙片法是目前被廣泛接受的方法。國標(biāo)餐具大腸菌群采用的就是紙片法。5/8/202412微生物快速檢測技術(shù)資料其它即用膠，MPN改良法Simplatecolilert主要用于水樣或澄清樣品的大腸菌群或大腸桿菌檢測5/8/202413微生物快速檢測技術(shù)資料SimPlateTMTPC法：基于食源性細(xì)菌的蛋白質(zhì)有特異性酶類，TPC培養(yǎng)基內(nèi)含有多種細(xì)菌酶類所對應(yīng)的底物。檢樣被細(xì)菌污染時，只要具有一種酶的活性即能與底物作用生成4-甲基傘形酮，培養(yǎng)24h后，在紫外線照射下，發(fā)出藍(lán)色熒光。食源性細(xì)菌懸浮于TPC培養(yǎng)基表面，在分隔的小池內(nèi)能迅速進(jìn)行生化反應(yīng)，若有檢樣顆粒亦無干擾；它不是由48h形成的菌落來計數(shù)，而是24h后在紫外燈照射下記錄培養(yǎng)皿內(nèi)能發(fā)出藍(lán)色熒光的陽性池數(shù)，進(jìn)而由最大近似值(MPN)表查出細(xì)菌的MPN。陽性池數(shù)與MPN呈松泊分布。5/8/202414微生物快速檢測技術(shù)資料固定底物技術(shù)酶底物法，需要coliert試劑采用大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生D-半乳糖苷酶分解ONPG（鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）使培養(yǎng)液呈黃色，以及大腸埃希氏菌產(chǎn)生D-葡萄糖醛酸酶分解MUG（4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷）使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的原理，來判斷水樣中是否含有大腸菌群及大腸埃希氏菌。只需24小時即可同時定量出水樣中大腸菌群和大腸埃希氏菌的MPN值。5/8/202415微生物快速檢測技術(shù)資料二、常規(guī)微生物快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀快速檢測微生物數(shù)量的新方法：1、ATP法：目前產(chǎn)品較多，如CHARM，Biotrace,…..等。2、電化學(xué)法：Sy-Lab公司Bactrac4300，Tempo,…3、顏色變化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。4、流式細(xì)胞技術(shù)及激光掃描技術(shù)5、其它：熱量法，放射測量法5/8/202416微生物快速檢測技術(shù)資料表面潔凈的檢測方法微生物學(xué)法：紙片、瓊脂板、棉簽拭子、海綿拭子非微生物學(xué)法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白質(zhì),降解糖、NADP(輔酶II)，其它。5/8/202417微生物快速檢測技術(shù)資料ATP---三磷酸腺苷ATP來源于細(xì)菌酵母霉菌生物膜組織殘留廢棄物污染人的污染（一）ATP法5/8/202418微生物快速檢測技術(shù)資料1.

人接觸設(shè)備或器具2.設(shè)備或器具被污染3.清洗不正常4.非正常的敏感物污染5.微生物污染ATP存在表明什么？5/8/202419微生物快速檢測技術(shù)資料檢測原理熒光素?zé)晒馑孛赶佘找涣姿嵫鹾蠠晒馑責(zé)晒?/8/202420微生物快速檢測技術(shù)資料ATP法兩大用途1、用于食品、化妝品和藥品企業(yè)對生產(chǎn)線和管道進(jìn)行快速清潔程度檢測。政府檢測機構(gòu)用ATP方法缺乏法律依據(jù)。ATP法與微生物數(shù)量沒有必然的聯(lián)系。2、改良后用于食品、化妝品的商業(yè)無菌檢測或終產(chǎn)品檢驗。5/8/202421微生物快速檢測技術(shù)資料LUM－T清潔程度快速檢測1)將水樣在玻璃纖維過濾器上過濾以便富集微生物；2)用適當(dāng)?shù)娜芙鈩┤芙饧?xì)胞；3)用適當(dāng)?shù)妮腿┹腿TP；4)將ATP的萃取液加到盛有螢光素、螢光素酶的試管中，并用光度計記錄下所產(chǎn)生光的量，將此讀數(shù)和ATP濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，就可得到待測樣品中ATP含量；用得到的ATP含量確定水樣中細(xì)菌數(shù)量。5/8/202422微生物快速檢測技術(shù)資料LUM-T的獨特優(yōu)勢CHEF熟肉制品成熟度檢驗MicroQ水中微生物污染程度檢測Cidelite殺蟲劑殘留初篩Paslite牛奶巴氏消毒效果Somalite體細(xì)胞計數(shù)SL/MRLtest抗生素殘留檢測（連接ROSAimager)5/8/202423微生物快速檢測技術(shù)資料CharmATP檢測5/8/202424微生物快速檢測技術(shù)資料基于ATP原理的用于成品檢測的

微生物檢測系統(tǒng)CharmLUM-96（用于UHT產(chǎn)品-高溫瞬間滅菌）BiotraceCelsis（主要用于化妝品）Millipore公司的MicroScan5/8/202425微生物快速檢測技術(shù)資料Celsis和LUM-96保溫2天，檢測30分鐘（96個樣）5/8/202426微生物快速檢測技術(shù)資料ATP法檢測成品的優(yōu)缺點優(yōu)點：LUM-96通常用于進(jìn)行商業(yè)無菌檢測?？纱蟠罂s短庫存時間，減少物流壓力和成本。缺點：ATP方法需要消耗大量的較昂貴的試劑，對儀器的清洗保養(yǎng)要求特別高。另外，客戶通常懷疑假陰性的可能，特別是用ATP單個檢測代替常規(guī)微生物和致病微生物檢測，其風(fēng)險是一定存在的。(如保溫增菌時間不夠，菌數(shù)未達(dá)到一定數(shù)量，取樣量太小，由于培養(yǎng)基原因，目標(biāo)致病菌未大量增菌等原因)5/8/202427微生物快速檢測技術(shù)資料Millipore公司最新推出的MicroStar5/8/202428微生物快速檢測技術(shù)資料MicroStar的原理及局限性MicroStar快速微生物檢測系統(tǒng)是結(jié)合了生物熒光、膜過濾及CCD熒光照相檢測等技術(shù)的新型檢測系統(tǒng).可過濾樣品經(jīng)膜過濾后，將菌截留在特殊的濾膜上，濾膜放置在培養(yǎng)基表面增菌后取出，加ATP釋放劑，然后加熒光素和熒光素酶，顯示的熒光信號在熒光顯微鏡或熒光檢測器下觀察并計數(shù)。5/8/202429微生物快速檢測技術(shù)資料MicroStar的優(yōu)缺點優(yōu)點：縮短培養(yǎng)時間，提高靈敏度。適合于菌數(shù)較低的可過濾產(chǎn)品使用。缺點：儀器較昂貴，運行成本也非常貴。不能用于檢測未知的可能菌數(shù)較高的樣品(不知稀釋多少倍，因菌數(shù)必須稀釋至80個左右)。整個檢測時間還不夠快，通常需16小時以上。5/8/202430微生物快速檢測技術(shù)資料（二）電化學(xué)方法(電導(dǎo)率法或電阻抗法)奧地利Sylab公司的Bactrac4300和Biotrac4200梅里埃公司的Bactometer和Tempo英國Multhus公司(已倒閉)英國DWS公司的Rabit……5/8/202431微生物快速檢測技術(shù)資料外觀比較Bactrac4300梅里埃的BactoMeterDWS公司的Rabit馬色斯1205/8/202432微生物快速檢測技術(shù)資料世界上最好的電化學(xué)微生物快速檢測產(chǎn)品

Bactrac4300系統(tǒng)Sy-lab—Bactrac4300常規(guī)微生物項目快速檢測技術(shù)5/8/202433微生物快速檢測技術(shù)資料MicroFoss(Biosys)微生物自動監(jiān)測儀微生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值發(fā)生變化，由光學(xué)檢測器檢測底部瓊脂層的顏色變化，記錄達(dá)到突變點的時間。5/8/202434微生物快速檢測技術(shù)資料Microfoss的特點與阻抗法類似，可以實現(xiàn)快速檢測。缺點：需要購買原廠的預(yù)裝培養(yǎng)基，應(yīng)用范圍受限制，成本高昂。因此在我國目前還沒有用戶。5/8/202435微生物快速檢測技術(shù)資料梅里埃的BacT/Alert微生物檢測儀基于微生物生成產(chǎn)生CO2的原理。CO2積累越多，底部的CO2傳感器變黃，由LED發(fā)射一束光至底部，探頭檢測反射光的強度。光強度與微生物數(shù)量有一定關(guān)系。方法較新，用戶還需要一個過程了解。5/8/202436微生物快速檢測技術(shù)資料流式細(xì)胞計數(shù)技術(shù)用于非過濾產(chǎn)品流式細(xì)胞:

線性流體

單細(xì)胞分析

靈敏的檢測頭流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是對于處在快速直線流動狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)的、快速的定量分析和分選的技術(shù)（三）流式細(xì)胞技術(shù)及激光掃描技術(shù)5/8/202437微生物快速檢測技術(shù)資料FOSS公司

BactoScanFC牛奶中總菌數(shù)快速檢測儀采用流式細(xì)胞原理。對微生物進(jìn)行核酸染色，用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行計數(shù)5/8/202438微生物快速檢測技術(shù)資料BactoScanFC的優(yōu)缺點優(yōu)點：速度快(50-150樣品/小時)缺點：死活細(xì)胞一起檢測，消耗成本較高，儀器比較難保養(yǎng)。靈敏度不夠高。適合牛奶企業(yè)檢測原奶中細(xì)菌總數(shù)。5/8/202439微生物快速檢測技術(shù)資料美國Chemunex公司

微生物快速檢測系統(tǒng)美國Chemunex公司將流式細(xì)胞技術(shù)與活細(xì)胞熒光探針標(biāo)記及激光掃描技術(shù)相結(jié)合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的ScanRDI和D-count微生物快速檢測儀。其最大的特點是只檢測活細(xì)胞數(shù)，速度極快，處理量大。與FOSS的BactoScanFC檢測死活細(xì)胞都檢測不同。是目前國際上正在認(rèn)可的生物熒光定量檢測微生物數(shù)量的兩種方法之一。另一種是Millipore的一款叫MicroStar的基于ATP檢測的產(chǎn)品。5/8/202440微生物快速檢測技術(shù)資料熒光酶標(biāo)記原理

直接單細(xì)胞標(biāo)記

(包括孢子)細(xì)胞無增菌要求標(biāo)記在90分鐘內(nèi)完成直接對活細(xì)胞和酵母進(jìn)行標(biāo)記5/8/202441微生物快速檢測技術(shù)資料標(biāo)記的細(xì)菌5/8/202442微生物快速檢測技術(shù)資料標(biāo)記后的酵母5/8/202443微生物快速檢測技術(shù)資料標(biāo)記后的霉菌5/8/202444微生物快速檢測技術(shù)資料ChemScanRDI5/8/202445微生物快速檢測技術(shù)資料三個簡單的步驟2.標(biāo)記3.激光掃描1.過濾5/8/202446微生物快速檢測技術(shù)資料檢測步驟-TVC

1.過濾2.標(biāo)記3.激光掃描樣品過濾預(yù)標(biāo)記60min濾膜轉(zhuǎn)移ChemScanRDI

?儀器分析標(biāo)記30min5/8/202447微生物快速檢測技術(shù)資料ChemScanòRDI

主機激光掃描分析儀3分鐘分析時間結(jié)果直接顯示細(xì)胞個數(shù)5/8/202448微生物快速檢測技術(shù)資料Laserscanning5/8/202449微生物快速檢測技術(shù)資料MicroscopeConfirmation5/8/202450微生物快速檢測技術(shù)資料Bactiflow適合實驗室或研究用日處理量不大于40個樣品5/8/202451微生物快速檢測技術(shù)資料D－Count適合實驗室或生產(chǎn)現(xiàn)場使用日處理量大于40個樣品的場合5/8/202452微生物快速檢測技術(shù)資料標(biāo)記和檢測原理EnzymeViabilitysubstrateFreefluorochromeMicro-organismDetectorDetectorLaserFlowCell細(xì)胞標(biāo)記12minutes細(xì)胞計數(shù)1minute5/8/202453微生物快速檢測技術(shù)資料自動吸樣

無需預(yù)處理

每批可做64個樣，含陰性和陽性質(zhì)控最小的人力要求全自動標(biāo)記和過濾

加所有要求的標(biāo)記試劑

控制溫育時間和溫度

去除大的顆粒(25μm尼龍網(wǎng)過濾)快速敏感的分析

每小時50個樣品

直接按個/mL顯示結(jié)果5/8/202454微生物快速檢測技術(shù)資料

數(shù)據(jù)處理

區(qū)分微生物和顆粒的功能強大產(chǎn)品應(yīng)用范圍廣增強靈敏度直接顯示細(xì)胞數(shù)無需數(shù)據(jù)解釋直觀易讀完整的數(shù)據(jù)追溯性易于確證5/8/202455微生物快速檢測技術(shù)資料三種型號的差異√√5/8/202456微生物快速檢測技術(shù)資料哪些類型客戶可以使用？大型食品、化妝品、藥品企業(yè)，對快速檢測速度及樣品處理量要求高。目前儀器非常貴，運作成本與免疫法相似。5/8/202457微生物快速檢測技術(shù)資料三、致病菌快速檢測方法顯色培養(yǎng)基法：技術(shù)成熟，產(chǎn)品很多。免疫學(xué)方法：產(chǎn)品最多，特異性和敏感性都很高，但有假陽性存在，陽性結(jié)果需要確認(rèn)。通常的原理有EIA（酶聯(lián)免疫），ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗），GLISA（夾心酶聯(lián)免疫吸附法

），熒光酶免、免疫磁分離等方法。市場上的產(chǎn)品多，如BioMeriux,Tecra,Neogen,Biocontrol,Matrix等。分子生物學(xué)方法：以基因探針檢測法和PCR法為主。基因芯片：研究熱點。5/8/202458微生物快速檢測技術(shù)資料致病微生物快速檢測產(chǎn)品免疫磁分離法—Matrix公司的Pathatrix致病菌快速檢測系統(tǒng)ELISA方法—澳洲TECRA公司的免疫捕獲快速檢測分子生物學(xué)方法(基因探針及PCR方法)GLISA---膠體金免疫層析致病菌快速檢測條熒光酶免—Vidas系列產(chǎn)品(略)顯色培養(yǎng)基–法國AES公司5/8/202459微生物快速檢測技術(shù)資料GLISA－膠體金免疫層析檢測條氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金標(biāo)記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。膠體金檢測條在臨床診斷中廣泛使用。方法成熟，使用簡便。關(guān)鍵是制備單克隆抗體，然后與膠體金交聯(lián)，在親水紙層析條上固定。膠體金微生物檢測條在國內(nèi)已經(jīng)有不少產(chǎn)品，但用戶并不多，主要是質(zhì)量不穩(wěn)定。外來的膠體金微生物檢測產(chǎn)品比較多。（一）免疫學(xué)方法5/8/202460微生物快速檢測技術(shù)資料常見的膠體金檢測條舉例大腸桿菌O157李斯特氏菌沙門氏菌5/8/202461微生物快速檢測技術(shù)資料膠體金檢測條的優(yōu)缺點膠體金檢測方法屬于免疫檢測法，檢測的是死菌和活菌。一般需要增菌過夜。增菌后的檢測非常簡單，約10分鐘一般能完成。無需專門的檢測儀器。進(jìn)口的檢測條的價格比較高，通常要30－90元。5/8/202462微生物快速檢測技術(shù)資料（二）分子生物學(xué)方法基因探針法及PCR方法在國外已經(jīng)有相當(dāng)成熟的表現(xiàn)。有普通PCR，熒光PCR，實時熒光PCR（定量PCR）等多種方法?；蛱结樂ㄒ话阋残枰鼍?，然后加探針試劑雜交，然后在熒光顯微鏡熒光檢測器下獲得結(jié)果。PCR方法一般不需增菌太長時間，通過PCR方法對待測微生物的特征片斷進(jìn)行擴增，然后通過凝膠電泳或熒光PCR技術(shù)判斷結(jié)果。5/8/202463微生物快速檢測技術(shù)資料分子生物學(xué)方法應(yīng)用前景試劑盒開發(fā)相對比較容易。只要找出特征的基因片斷，合成出引物即可。目前客戶比較關(guān)注的致病菌，包括沙門氏、李斯特氏、大腸桿菌O157、副溶血弧菌、霍亂弧菌、志賀氏菌等均有PCR試劑盒供應(yīng)。5/8/202464微生物快速檢測技術(shù)資料常見的基因探針方法或儀器BAXGene-trakGen-probeVermicon……5/8/202465微生物快速檢測技術(shù)資料分子生物學(xué)方法病原菌檢測系統(tǒng)的優(yōu)缺點分子生物學(xué)方法檢測致病菌，特異性較強，技術(shù)較為前沿，特別是相對國標(biāo)方面來說。但國外用戶反映其假陽性概率仍然較高，因此只能作為一種初篩方法。速度方面：仍然需要增菌，一般是第二天出結(jié)果，與免疫法比沒有速度優(yōu)勢目前不少產(chǎn)品已經(jīng)通過AOAC的認(rèn)證。5/8/202466微生物快速檢測技術(shù)資料（三）顯色培養(yǎng)基技術(shù)用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是一種新的微生物快速檢測技術(shù)。該技術(shù)以生化反應(yīng)為基礎(chǔ),通過在培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物直接根據(jù)菌落顏色對菌種作出鑒定。常見食源性致病菌檢測中,李斯特菌顯色培養(yǎng)基(BCMTMListeriamonocytogenes,Rapid’LMONOagar,CHROMagarTMListeria)、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基(CHROMagarTMEcoli)、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基(Rambachagar)、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基(CHROMagarStaphylococcusaureus)等已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域,極大提高了微生物檢測的效率。但是,顯色培養(yǎng)基也存在一些假陽(陰)性等問題,其設(shè)計尚待優(yōu)化。5/8/202467微生物快速檢測技術(shù)資料大腸桿菌顯色培養(yǎng)基利用大腸桿菌(Escherichiacoli)特異性酶檢測鑒定大腸桿菌已十分普遍,大約96%～98%的大腸桿菌產(chǎn)生β2D2葡萄糖苷酸酶(β2D2Gud),絕大部分沙門氏菌、志賀氏菌和耶爾森氏菌不能產(chǎn)生Gud,因此利用Gud酶底物可以有效的檢測大腸桿菌。目前開發(fā)的顯色培養(yǎng)基常用酶底物有:52溴242氯232吲哚2β2D2葡萄糖苷酸(X2Gluc)、鄰硝基酚β2D葡萄糖苷酸(PNPG),底物被Gud水解后產(chǎn)生顯色物質(zhì)使菌落呈現(xiàn)特殊的藍(lán)色或黃色。法國科瑪嘉CHROMagarEcoli是目前應(yīng)用較廣泛的大腸桿菌顯色培養(yǎng)基,在這種培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,大腸桿菌呈現(xiàn)藍(lán)色菌落。5/8/202468微生物快速檢測技術(shù)資料沙門氏菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌(Salmonellaspp.)也是一類重要的食源性致病菌,常規(guī)分離鑒定需要非選擇性預(yù)增菌、選擇增菌、選擇分離平板鑒定等步驟,操作十分繁瑣。德國Merck公司生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基Rambachagar以丙烯乙二醇和52溴242氯232吲哚2β2D半乳糖吡喃糖苷酸(X2GAL)為底物檢測沙門氏菌,沙門氏菌能水解乙二醇產(chǎn)酸,不能水解X2GAL,在培養(yǎng)基上產(chǎn)生特殊的紅色菌