杜平華-藥典附錄無菌檢查和微生物限度檢查方法增修定內(nèi)容省公開課金獎(jiǎng)全國(guó)賽課一等獎(jiǎng)微課獲獎(jiǎng)?wù)n件

藥典附錄無菌檢驗(yàn)和微生物

程度檢驗(yàn)方法增修定內(nèi)容杜平華1/87

起草指導(dǎo)思想

一、以科學(xué)發(fā)展觀為統(tǒng)領(lǐng)，服務(wù)于資源節(jié)約型社會(huì)、環(huán)境友好型社會(huì)要求；落實(shí)科學(xué)監(jiān)管理念，著力處理發(fā)展中問題。二、與時(shí)俱進(jìn)，廣泛吸納先進(jìn)技術(shù)與結(jié)果；堅(jiān)持自主與創(chuàng)新；主動(dòng)推進(jìn)藥品標(biāo)準(zhǔn)化戰(zhàn)略，提升我國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)總體水平，著力提升《中國(guó)藥典》在國(guó)際社會(huì)中地位和作用，提升綜合競(jìng)爭(zhēng)力，促進(jìn)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，為構(gòu)建社會(huì)主義友好社會(huì)作出貢獻(xiàn)。2/87

年版無菌檢驗(yàn)法增修訂內(nèi)容3/87

一、深入確定了無菌檢驗(yàn)法定義：無菌檢驗(yàn)法系用于檢驗(yàn)要求無菌藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其它品種是否無菌一個(gè)方法。

二、深入明確了無菌檢驗(yàn)保障

1、檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格恪守?zé)o菌操作，預(yù)防再污染

，但采取辦法不得影響微生物生長(zhǎng)。2、無菌檢驗(yàn)要進(jìn)行環(huán)境檢測(cè)增加了日常檢驗(yàn)還需進(jìn)行環(huán)境檢測(cè)。2、無菌檢驗(yàn)人員必須具備微生物專業(yè)知識(shí)，并經(jīng)過無菌技術(shù)培訓(xùn)。4/87

三、培養(yǎng)基增修訂內(nèi)容⒈刪去硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基使用范圍(用于培養(yǎng)好氧菌、厭氧菌及用于培養(yǎng)真菌)

⒉刪去選擇性培養(yǎng)基使用表面活性劑種類對(duì)氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等。理由經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)選擇適宜中和劑、滅活劑和表面活性劑

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培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)增修訂內(nèi)容

3、培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)

⑴刪除菌懸液制備中黑曲霉菌懸液制備“（用管口帶有薄無菌棉花或紗布能過濾菌絲無菌毛細(xì)吸管）”修改為“用適宜方法吸出孢子懸液”。

⑵增加在稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。

6/87

四、試驗(yàn)稀釋液、沖洗液增修訂為

⒈

增加依據(jù)供試品特征，可選取其它經(jīng)驗(yàn)證過適宜溶液作為稀釋液、沖洗液。⒉試驗(yàn)中使用中和劑、滅活劑和表面活性劑除證實(shí)其有效性外還應(yīng)證實(shí)對(duì)污染微生物無影響修改為無毒性。

7/87五、方法驗(yàn)證試驗(yàn)增修訂內(nèi)容⒈試驗(yàn)菌株

刪除銅綠假單胞菌增加大腸埃希菌及大腸埃希菌菌液制備(同金黃色葡萄球菌)。⒉薄膜過濾法供試品用量將要求量供試品按薄膜過濾法過濾

修改為取每種培養(yǎng)基要求接種供試品總量。

8/87六、供試品無菌檢驗(yàn)增修訂內(nèi)容⒈檢驗(yàn)量

直接接種法除另有要求外，每份培養(yǎng)基接種供試品量按表2、表3要求刪除采取直接接種法時(shí)要求。⒉陰性對(duì)照

無菌試驗(yàn)中若使用表面活性劑等應(yīng)證實(shí)其有效性且對(duì)微生物生長(zhǎng)無影響修改為無毒性。

9/87

⒊薄膜過濾法

①增加了抗生素供試品濾膜選擇指導(dǎo)應(yīng)選擇低吸附濾器及濾膜。②若需要沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量普通為100ml，且沖洗量不宜過大修改為總沖洗量不得超出1000ml。

⑴水溶液供試品含抑菌成份需用適量沖洗液沖洗膜修改為所用沖洗量、沖洗方法同方法驗(yàn)證試驗(yàn).

10/87

⑵裝有藥品注射器供試品取要求量，刪去裝上無菌針頭….修改為排出注射器中內(nèi)容物至無菌容器中，若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所表示溶劑溶解，或非水溶性制劑供試品項(xiàng)下方法操作。

⑶無菌氣霧劑供試品供試液制備將供試品置冰室修改為置最少-20℃冷凍室約1小時(shí)。11/87

⒋直接接種法刪除β－內(nèi)酰胺類或磺氨類供試品。

12/87

表1、表2、表3增修訂表1（第3列）接種每種培養(yǎng)基改為所需最少檢驗(yàn)數(shù)量

表2

（表題）上市抽驗(yàn)樣品（液體制劑）最少檢驗(yàn)數(shù)量修改為液體制劑最少檢驗(yàn)量及上市抽驗(yàn)樣品最少檢驗(yàn)數(shù)量第二列每支樣品接入每管培養(yǎng)基最少樣品量修改為每支供試品接入每管培養(yǎng)基最少樣品量第三列最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）≤1全量２0①

修改為供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）１0①

注①每種培養(yǎng)基各接種１０支供試品修改為若供試品每個(gè)容器內(nèi)裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中最少檢驗(yàn)數(shù)量加倍。13/87

表3（表題）將上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）最少檢驗(yàn)量

修改為固體制劑最少檢驗(yàn)量及上市抽驗(yàn)樣品最少檢驗(yàn)數(shù)量”第三列最少檢驗(yàn)數(shù)量、≤1全量２0①

修改為供試品最少檢驗(yàn)數(shù)量（瓶或支）

１0①

注①每種培養(yǎng)基接種１０支培養(yǎng)基修改為若供試品每個(gè)容器內(nèi)裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中最少檢驗(yàn)數(shù)量加倍。14/87

微生物程度檢驗(yàn)增修定內(nèi)容15/87

修改內(nèi)容

1、培養(yǎng)條件控制菌培養(yǎng)溫度35℃～37℃修改為30℃～35℃(細(xì)菌、控制菌培養(yǎng)溫度相同)。

修改理由此溫度適于全部中溫菌生長(zhǎng)，一些高溫菌在該溫度下也能夠生長(zhǎng)。16/87

增修訂內(nèi)容

2、結(jié)果匯報(bào)特殊品種能夠最小包裝單位匯報(bào)特殊品種包含∶藥典要求微量包裝藥品檢驗(yàn)量能夠酌減。還有一些珍貴藥品也應(yīng)考慮檢驗(yàn)量。17/873、檢驗(yàn)量增修訂內(nèi)容

⑴中藥膜劑檢驗(yàn)量50cm2

修改為100cm2

。

⑵沙門菌檢驗(yàn)量修改為檢驗(yàn)量為20g或20ml并注明（其中10g用于陽(yáng)性對(duì)照）。18/87

4、供試液制備增修訂內(nèi)容

⑴供試品檢驗(yàn)時(shí)使用表面活性劑應(yīng)證實(shí)其對(duì)微生物生長(zhǎng)和存活無影響修改為無毒性。⑵供試液制備若需加溫時(shí)，可采取其他經(jīng)驗(yàn)證方法，但應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。19/87

⑶新增貼劑供試液制備

供試液制備

⑴經(jīng)驗(yàn)證方法制備成供試液在無菌環(huán)境進(jìn)行。⑵防止粘貼面粘合在一起。⑶置于含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋劑中，制成供試液。⑷充分振搖。⑸也可采取以其它適宜方法制備成供試液。20/87⑷具抑菌活性供試品增修訂內(nèi)容

刪除應(yīng)消除供試液抑菌活性修改為當(dāng)供試品含有抑菌活性時(shí)，應(yīng)盡可能選擇操作簡(jiǎn)便、快速方法，應(yīng)防止損傷供試品中污染微生物。在供試品溶液性狀允許情況下，應(yīng)盡可能選取薄膜過濾法。21/87

①離心沉淀集菌法

兩次離心修改為一次離心；500轉(zhuǎn)/分離心，不超出3分鐘，取全部上清液用于檢查。

影響原因

供試品污染菌特征

適用范圍

⒈僅使用于微生物程度檢驗(yàn)供試液制備。⒉盡可能防止使用，不可使用快速離心。

22/87細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)增修訂內(nèi)容

⒈新增計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)

⑴菌種

大腸埃希菌（Escherichiacoli）〔CMCC（B）44102〕

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕

枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕

白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC（F）98001〕

黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC（F）98003〕

23/87①

增加了菌懸液制備及保留條件。菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保留在2～8℃能夠在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保留在2～8℃，在驗(yàn)證過貯存期內(nèi)使用，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，按要求條件培養(yǎng)計(jì)數(shù)，同時(shí)用對(duì)應(yīng)對(duì)照培養(yǎng)基替換被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。

②增加了對(duì)照培養(yǎng)。24/87

2.新增常見干擾物中和劑和滅活方法

參見表1常見干擾物中和劑或滅活方法

25/87

6、供試品檢驗(yàn)增修訂內(nèi)容

26/87

⑴平皿法刪去采取平皿法進(jìn)行菌數(shù)測(cè)定時(shí)，連續(xù)2～3個(gè)稀釋級(jí)供試液。

修改為按計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證試驗(yàn)確認(rèn)程序進(jìn)行供試液制備。

27/87

⑵培養(yǎng)時(shí)間修改內(nèi)容除另有要求外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時(shí)改為3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)改為5天，必要時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至7天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并匯報(bào)。28/87

菌數(shù)匯報(bào)規(guī)則增修訂內(nèi)容

⒈若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板菌落平均數(shù)大于15，則兩個(gè)平板菌落數(shù)不能相差1倍或以上。⒉細(xì)菌、酵母菌和霉菌平均菌落數(shù)在30～300、30～100之間稀釋級(jí)修改為選取菌落數(shù)小于300cfu和100cfu稀釋級(jí)作為菌數(shù)匯報(bào)依據(jù)。29/87

⑶薄膜過濾法增修訂內(nèi)容

新增內(nèi)容采取其它直徑濾膜，沖洗量應(yīng)對(duì)應(yīng)進(jìn)行調(diào)整（如使用膜直徑增大沖洗液量也應(yīng)對(duì)應(yīng)增加，可確保沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜）。

刪去每片濾膜總過濾量不宜過大，修改為總沖洗量不得超出1000ml。30/87

7、控制菌檢驗(yàn)增修訂

⑴增加控制菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)；

檢驗(yàn)項(xiàng)目包含促生長(zhǎng)、抑制及指示能力檢驗(yàn)參考表2

31/87

⑵新增培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)方法①液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢驗(yàn)。②固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢驗(yàn)。③培養(yǎng)基抑制能力檢驗(yàn)。④液體培養(yǎng)基指示能力檢驗(yàn)。⑤固體培養(yǎng)基指示能力檢驗(yàn)。

試驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照培養(yǎng)基比較32/87控制菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)控制菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)、抑制及指示能力檢驗(yàn)控制菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基特征試驗(yàn)菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌

MUG促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發(fā)酵促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌

33/87沙門菌營(yíng)養(yǎng)肉湯促生長(zhǎng)能力乙型付傷寒沙門菌四硫磺酸鈉亮綠促生長(zhǎng)能力乙型付傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂或沙門、志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型付傷寒沙門菌銅綠假單膽鹽乳糖促生長(zhǎng)能力銅綠假單胞菌胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌溴化十六烷基三促生長(zhǎng)能力銅綠假單胞菌甲銨瓊脂抑制能力大腸埃希菌綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力銅綠假單胞菌金黃色葡亞碲酸鹽肉湯促生長(zhǎng)能力金黃色葡萄球菌萄球菌抑制能力大腸埃希菌卵黃氯化鈉瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力金黃色葡萄球菌或甘露醇鹽瓊脂抑制能力大腸埃希菌梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力生孢梭菌哥倫比亞瓊脂促生長(zhǎng)能力生孢梭菌白色念沙氏葡萄糖肉湯促生長(zhǎng)能力白色念珠菌珠菌沙氏葡萄糖瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌吐溫80玉米瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力白色念珠菌34/87⑶控制菌檢驗(yàn)法增修訂內(nèi)容

①疑似致病菌確實(shí)證微生物控制菌檢驗(yàn)中沒有要求深入確證疑似致病菌方法。選擇已被認(rèn)可菌種判定方法。如《伯杰氏細(xì)菌判定手》。

②控制菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證刪去陰性菌對(duì)照組。

35/87

③大腸菌群檢驗(yàn)用膽鹽乳糖培養(yǎng)基改為乳糖膽鹽。

④改梭菌檢驗(yàn)用庖肉培養(yǎng)基為梭菌增菌培養(yǎng)基。⑤改梭菌培養(yǎng)時(shí)間72～96小時(shí)為48小時(shí)。

36/87

增加了白色念珠菌檢驗(yàn)方法

增菌培養(yǎng)沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上。37/87

判定試驗(yàn)

經(jīng)典菌落⒈沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基菌落呈乳白色偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。⒉念珠菌顯色培養(yǎng)基

菌落呈綠色或翠綠色菌落生長(zhǎng)。

38/87⒋確認(rèn)試驗(yàn)取1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)物進(jìn)行染色，鏡檢及芽管試驗(yàn)。

結(jié)果判斷非革蘭陽(yáng)性菌，顯微鏡下未見厚膜孢子、假菌絲、芽管判未檢出白色念珠菌。39/87

新增微生物程度檢驗(yàn)法指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)一、抑菌劑效力檢驗(yàn)法指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)二、藥品微生物檢驗(yàn)替換方法驗(yàn)證指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)三、微生物程度檢驗(yàn)法應(yīng)用指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)四、藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)40/87一、抑菌劑效力檢驗(yàn)法指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)⒈指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)⑴是為測(cè)定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑活性，以評(píng)價(jià)最終產(chǎn)品抑菌效力及生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑確實(shí)定提供指導(dǎo)。⑵為預(yù)防藥品因?yàn)槲⑸镂廴径l(fā)變質(zhì)，對(duì)服用者造成不良反應(yīng)，在藥品生產(chǎn)過程中加入一定劑量抑菌劑。⑶抑菌劑不能用于替換藥品生產(chǎn)GMP管理，不能作為非滅菌制劑降低微生物污染唯一路徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前生物負(fù)載伎倆。41/87⒉使用范圍及標(biāo)準(zhǔn)

⑴使用范圍假如藥品本身不含有充分抗菌活性，應(yīng)依據(jù)制劑特征添加適宜抑菌劑，以預(yù)防制劑在正常貯藏和使用過程中可能發(fā)生微生物污染和繁殖，對(duì)患者造成傷害。42/87

⑵使用標(biāo)準(zhǔn)

全部抑菌劑都含有一定毒性，添加抑菌劑時(shí)應(yīng)注意以下標(biāo)準(zhǔn):

①抑菌劑用量應(yīng)為最低有效量。②具有抗菌活性制劑應(yīng)確認(rèn)其抗菌效力。43/87

③應(yīng)驗(yàn)證最終容器中抑菌劑效力在效期內(nèi)不因貯藏條件而降低。④本試驗(yàn)方法和抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)用于包裝未啟開成品制劑。44/87

⒊抑菌劑抑菌效力測(cè)定

⑴供試品分類

分為四類，但對(duì)于一些抗酸性制劑和含活生物制劑應(yīng)考慮會(huì)降低有益菌生物活性。見表145/87表1產(chǎn)品分類

類別藥品

1類注射劑、其它非腸道制劑，包含乳劑、耳用制劑、無菌鼻用制劑及眼用制劑

2類局部給藥制劑、非滅菌鼻用制劑及用于黏膜乳劑

3類口服非固體制劑（非抗酸制劑）

4類非固體抗酸制劑46/87

⑵培養(yǎng)基①培養(yǎng)基制備胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

②培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)同控制菌培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)

47/87

⑶抑菌劑效力測(cè)定方法

①菌種菌液制備

菌種

同培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)，制劑中常見污染微生物也可作為試驗(yàn)菌。

菌液制備

制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu菌懸液。

②供試品接種影響原因給予指導(dǎo)

容器材質(zhì)、形狀、體積、封口方式及容器PH等分別給予了指導(dǎo)。

48/87

③接種菌量接種菌液體積不得超出供試品體積0.5%～1%。

④放置20～25℃，避光貯存，貯存溫度改變應(yīng)盡可能控制在最小范圍，并預(yù)防被污染。49/87

⑷存活菌數(shù)測(cè)定

采取經(jīng)驗(yàn)證方法進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算1ml(g)供試品各試驗(yàn)菌所得菌數(shù)及各間隔時(shí)間菌數(shù)，并換算成lg值。50/87

⑸結(jié)果判斷結(jié)果符合表3要求，可判斷該產(chǎn)品抑菌效力符合要求。51/87

表3抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)

1類供試品

細(xì)菌7天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天菌數(shù)下降不少于

3.0lg,14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，7、14、28天菌數(shù)均不增加。

2類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于2.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

3類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

4類供試品細(xì)菌，真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

注：1、表中“不增加”是指對(duì)前一個(gè)測(cè)定時(shí)間，試驗(yàn)菌增加數(shù)量不超出0.5lg。

2、0時(shí)菌數(shù)(初試值)供試品加入試驗(yàn)菌，搖勻，馬上取樣檢查，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，為0時(shí)菌數(shù)。52/87二、藥品微生物檢驗(yàn)替換方法驗(yàn)證指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)⒈目標(biāo)

⑴是為所采取試驗(yàn)方法能否替換藥典要求方法用于藥品微生物檢驗(yàn)提供指導(dǎo)。⑵在控制藥品微生物質(zhì)量中，需要采取替換方法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法驗(yàn)證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典方法。53/87

⒉微生物檢驗(yàn)類型及驗(yàn)證參數(shù)

藥品微生物檢驗(yàn)方法主要分兩種類型

定性試驗(yàn)定量試驗(yàn)⒊生物試驗(yàn)特殊性抽樣誤差操作誤差稀釋誤差培養(yǎng)誤差計(jì)量誤差計(jì)數(shù)誤差藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)不完全宜于微生物替換方法驗(yàn)證。54/87

表1、不一樣微生物檢驗(yàn)類型驗(yàn)證參數(shù)表參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測(cè)限＋－定量限－＋線性－＋范圍－＋耐用性＋＋重現(xiàn)性＋＋注：＋表示需要驗(yàn)證參數(shù)－表示不需要驗(yàn)證參數(shù)逐項(xiàng)按替換方法驗(yàn)證要求進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)方便操作者了解方法關(guān)鍵操作點(diǎn)55/87⒋替換方法驗(yàn)證普通要求

⑴適用性驗(yàn)證前，對(duì)替換方法有一個(gè)全方面了解；

由替換方法研發(fā)者提供，或由方法使用者完成。⑵驗(yàn)證應(yīng)最少使用2個(gè)批號(hào)樣品，每批樣品應(yīng)平行進(jìn)行最少3次獨(dú)立試驗(yàn)。⑶在開展各參數(shù)驗(yàn)證時(shí)，除要求菌株外，還應(yīng)依據(jù)替換方法及樣品特點(diǎn)增加對(duì)應(yīng)菌株。

56/87三、藥品微生物程度檢驗(yàn)法應(yīng)用指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)目標(biāo)為更加好應(yīng)用微生物程度檢驗(yàn)法及程度標(biāo)準(zhǔn)合理執(zhí)行提供指導(dǎo)。

用途用于判斷非要求滅菌制劑及原料、輔料是否符合藥典要求，也可用于指導(dǎo)制劑、原料、輔料微生物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂，及指導(dǎo)生產(chǎn)過程中間產(chǎn)品微生物質(zhì)量監(jiān)控。本指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)將對(duì)標(biāo)準(zhǔn)和方法中特定內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用做深入說明。57/87

1.微生物程度檢驗(yàn)過程中，如需要使用表面活性劑、滅活劑及中和劑，應(yīng)對(duì)其用量、有效性、無毒性進(jìn)行確認(rèn)，無毒性確認(rèn)，試驗(yàn)菌株應(yīng)包含產(chǎn)品中可能污染微生物。58/87

2.檢驗(yàn)方法選擇

供試液制備應(yīng)盡可能選擇微生物程度檢驗(yàn)法中操作簡(jiǎn)便、快速方法，且應(yīng)防止損傷供試品中污染微生物。對(duì)于抑菌作用較強(qiáng)供試品，在供試品溶液性狀允許情況下，應(yīng)盡可能選取薄膜過濾法進(jìn)行試驗(yàn)。59/873.供試液制備

本指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)離心沉淀法使用范圍、方法及對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響原因進(jìn)行了分析和指導(dǎo)

4.驗(yàn)證試驗(yàn)存在問題及處理方法自藥典收載方法驗(yàn)證以來在實(shí)施過程中存在一些詳細(xì)問題，對(duì)這些存在問題進(jìn)行了指導(dǎo)；進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)時(shí)，因沒有適宜方法消除供試品中抑菌作用而造成微生物回收失敗。60/87

⑴處理方法

①應(yīng)采取能使微生物生長(zhǎng)更高稀釋級(jí)供試液進(jìn)行方法驗(yàn)證試驗(yàn)。②若采取允許最高稀釋級(jí)供試液進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)還存在一株或多株試驗(yàn)菌回收率達(dá)不到要求。

處理方法應(yīng)選擇回收情況最靠近要求方法進(jìn)行供試品檢測(cè)。61/87③在以上情況下，生產(chǎn)單位或研制單位應(yīng)進(jìn)行全方面風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定以確保檢驗(yàn)方法可靠性，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量。

62/87５.控制菌確實(shí)證沒有要求深入確證疑似致病菌方法。僅要求若供試品檢出疑似致病菌，確證方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可菌種判定方法。63/87⒍微生物程度標(biāo)準(zhǔn)

該指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行中存在問題進(jìn)行了分析和指導(dǎo)；

⑴明確了微生物程度標(biāo)準(zhǔn)使用范圍

⑵標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行①必檢項(xiàng)目②原則性要求（丸劑、口服片劑、膠囊劑、顆粒劑），應(yīng)對(duì)其被微生物污染風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)定。

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⑶用于手術(shù)、燒傷及嚴(yán)重創(chuàng)傷局部給藥制劑應(yīng)符合無菌檢驗(yàn)法要求。

⑷用于創(chuàng)傷程度難以判斷局部給藥制劑，若沒有證據(jù)證實(shí)藥品不存在安全性風(fēng)險(xiǎn)則應(yīng)符合無菌檢驗(yàn)法要求。⑸眼用制劑應(yīng)符合無菌檢驗(yàn)法要求。65/87

⑹含動(dòng)物類原藥材粉口服中藥制劑要求不得檢出沙門菌。其中動(dòng)物類原藥材粉是指除蜂蜜、王漿、動(dòng)物角、阿膠外全部動(dòng)物類原藥材粉，如牡蠣、珍珠等貝類，海蜇、冬蟲夏草、人工牛黃等。

⑺制訂合理、安全和嚴(yán)格微生物程度標(biāo)準(zhǔn)

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四、藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)

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⒈目標(biāo)該指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)試驗(yàn)室質(zhì)量控制。

⒉藥品微生物檢驗(yàn)對(duì)象具特殊性；活生物、分布不均勻、重現(xiàn)性差

必須使用經(jīng)驗(yàn)證檢測(cè)方法并嚴(yán)格按照藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范要求進(jìn)行試驗(yàn)。68/87⒊藥品微生物試驗(yàn)室規(guī)范包含以下幾個(gè)方面人員、培養(yǎng)基、菌種、試驗(yàn)室布局和運(yùn)行、設(shè)備、文件、試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)、結(jié)果判斷等。⑴人員從事藥品微生物試驗(yàn)工作人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識(shí)教育背景

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①檢驗(yàn)人員和管理人員培訓(xùn)

進(jìn)行崗前培訓(xùn)檢驗(yàn)人員技能培訓(xùn)熟悉相關(guān)檢測(cè)

方法、程序、檢測(cè)目標(biāo)和結(jié)果評(píng)價(jià)。70/87

管理人員

①其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們職責(zé)范圍相符。不停接收系統(tǒng)教育與職責(zé)范圍相關(guān)培訓(xùn)。

②客觀評(píng)定檢驗(yàn)人員能力，必要時(shí)對(duì)其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評(píng)定。

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⒉培養(yǎng)基

培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基保證。

該指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)培養(yǎng)基制備、儲(chǔ)存、滅菌及質(zhì)量控制進(jìn)行了指導(dǎo)。72/87

⒊菌種

試驗(yàn)室菌種處理和保藏程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，⑴使盡可