HJ 897-2017 水質(zhì) 葉綠素a的測定 分光光度法（正式版）

中華人民共和國國家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法2017-12-21發(fā)布2018-02-01實(shí)施 1適用范圍 12規(guī)范性引用文件 3方法原理 14試劑和材料 5儀器和設(shè)備 16樣品 27分析步驟 38結(jié)果計(jì)算與表示 39精密度和準(zhǔn)確度 410質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 411廢物處理 4為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國水污染防治法》,保護(hù)環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范水中葉綠素a的測定方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定地表水中葉綠素a的分光光度法。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由環(huán)境保護(hù)部環(huán)境監(jiān)測司和科技標(biāo)準(zhǔn)司組織制訂。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼寧省環(huán)境監(jiān)測實(shí)驗(yàn)中心。本標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證單位：上海市環(huán)境監(jiān)測中心、大連市環(huán)境監(jiān)測中心、丹東市環(huán)境監(jiān)測中心站、遼陽市環(huán)境監(jiān)測站、朝陽市環(huán)境監(jiān)測中心站和遼寧北方環(huán)境檢測技術(shù)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境保護(hù)部2017年12月21日批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)自2018年2月1日起實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由環(huán)境保護(hù)部解釋。1水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法警告：丙酮對人體健康有一定危害，操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，佩戴防護(hù)器具，避免接觸皮膚和衣物。1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中葉綠素a的分光光度法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水中葉綠素a的測定。本標(biāo)準(zhǔn)測定丙酮提取液中葉綠素a的檢出限為0.04mg/L。當(dāng)取樣體積為200ml,丙酮提取液體積為10ml時(shí)，本方法的檢出限為2μg/L,測定下限為8μg/L。2規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3方法原理將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類，研磨破碎藻類細(xì)胞，用丙酮溶液提取葉綠素，離心分離后分別于750nm、664nm、647nm和630nm波長處測定提取液吸光度，根據(jù)公式計(jì)算水中葉綠素a的濃度。4試劑和材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為新制備的去離子水或蒸餾水。4.2碳酸鎂(MgCO?)。4.3丙酮溶液：9+1。在900ml丙酮(4.1)中加入100ml實(shí)驗(yàn)用水。4.4碳酸鎂懸濁液。稱取1.0g碳酸鎂(4.2),加入100ml實(shí)驗(yàn)用水，攪拌成懸濁液(使用前充分搖勻)。4.5玻璃纖維濾膜：直徑47mm,孔徑為0.45～0.7μm。5儀器和設(shè)備5.1采樣瓶：1L或500ml具磨口塞的棕色玻璃瓶。5.2過濾裝置：配真空泵和玻璃砂芯過濾裝置。25.3研磨裝置：玻璃研缽或其他組織研磨器。5.4離心機(jī)：相對離心力可達(dá)到1000×g(轉(zhuǎn)速3000～4000r/min)。5.5玻璃刻度離心管：15ml,旋蓋材質(zhì)不與丙酮反應(yīng)。5.6可見分光光度計(jì)：配10mm石英比色皿。5.7針式濾器：0.45μm聚四氟乙烯有機(jī)相針式濾器。5.8一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。6.1樣品采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集。樣品的采集一般使用有機(jī)玻璃采水器或其他適當(dāng)?shù)牟蓸悠鞑杉嫦?.5m樣品，湖泊、水庫根據(jù)需要可進(jìn)行分層采樣或混合采樣，采樣體積為1L或500ml。如果樣品中含沉降性固體(如泥沙等),應(yīng)將樣品搖勻后倒入2L量筒，避光靜置30min,取水面下5cm樣品，轉(zhuǎn)移至采樣瓶(5.1)。在每升樣品中加入1ml碳酸鎂懸濁液(4.4),以防止酸化引起色素溶解。6.2樣品保存樣品采集后應(yīng)在0～4℃避光保存、運(yùn)輸，24h內(nèi)運(yùn)送至檢測實(shí)驗(yàn)室過濾(若樣品24h內(nèi)不能送達(dá)檢測實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)現(xiàn)場過濾，濾膜避光冷凍運(yùn)輸),樣品濾膜于-20℃避光保存，14d內(nèi)分析完畢。6.3試樣的制備在過濾裝置(5.2)上裝好玻璃纖維濾膜(4.5)。根據(jù)水體的營養(yǎng)狀態(tài)確定取樣體積，見表1,用量筒量取一定體積的混勻樣品，進(jìn)行過濾，最后用少量蒸餾水沖洗濾器壁。過濾時(shí)負(fù)壓不超過50kPa,在樣品剛剛完全通過濾膜時(shí)結(jié)束抽濾，用鑷子將濾膜取出，將有樣品的一面對折，用濾紙吸干濾膜水分。表1參考過濾樣品體積營養(yǎng)狀態(tài)富營養(yǎng)中營養(yǎng)將樣品濾膜放置于研磨裝置(5.3)中，加入3～4ml丙酮溶液(4.3),研磨至糊狀。補(bǔ)加3～4ml丙酮溶液(4.3),繼續(xù)研磨，并重復(fù)1～2次，保證充分研磨5min以上。將完全破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至玻璃刻度離心管(5.5)中，用丙酮溶液(4.3)沖洗研缽及研磨杵，一并轉(zhuǎn)入離心管中，定容至6.3.3浸泡提取將離心管中的研磨提取液充分振蕩混勻后，用鋁箔包好，放置于4℃避光浸泡提取2h以上，不超3過24h。在浸泡過程中要顛倒搖勻2～3次。將離心管放入離心機(jī)(5.4),以相對離心力1000×g(轉(zhuǎn)速3000～4000r/min)離心10min。然后用針式濾器(5.7)過濾上清液得到葉綠素a的丙酮提取液(試樣)待測。6.4空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水按照與試樣的制備(6.3)相同的步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白試樣的制備。7.1試樣測定將試樣移至比色皿中，以丙酮溶液(4.3)為參比溶液，于波長750nm、664nm、647nm、630nm處測量吸光度750nm波長處的吸光度應(yīng)小于0.005,否則需重新用針式濾器(5.7)過濾后測定。按照與試樣測定(7.1)相同的步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白試樣(6.4)的測定。8結(jié)果計(jì)算與表示試樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度(mg/L),按照式(1)進(jìn)行計(jì)算：P?=11.85×(A??-A?)-1.54×(A?-A?)-0.08×(A?o-A)A?64——試樣在664nm波長下的吸光度值；A7so——試樣在750nm波長下的吸光度值。樣品中葉綠素a的質(zhì)量濃度(μg/L),按照式(2)進(jìn)行計(jì)算：P?——試樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度，mg/L;8.2結(jié)果表示當(dāng)測定結(jié)果小于100μg/L時(shí)，保留至整數(shù)位；當(dāng)測定結(jié)果大于等于100μg/L時(shí)，保留3位有效數(shù)字。49精密度和準(zhǔn)確度六家實(shí)驗(yàn)室對葉綠素a質(zhì)量濃度為5μgL、11μg/L、25μg/L的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.6%～11%、3.1%～6.0%、1.8%～5.0%;實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.2%、8.9%、5.9%;重復(fù)性限分別為2μg/L、2μg/L、3μgL。再現(xiàn)性限分別為2μg/L、4μg/L、六家實(shí)驗(yàn)室對含葉綠素a質(zhì)量濃度為11μg/L、25μg/L的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行葉綠素a純品溶液加標(biāo)測定，加標(biāo)量為9μg/L、28μg/L,加標(biāo)回收率范圍為83.6%～95.9%和79.9%～92.0%,加標(biāo)回收率最終值為89.2%±10.8%,86