T-SHRH 015-2018 化妝品-酪氨酸酶活性抑制實驗方法

71.100.70C2682Y42上海日用化學(xué)品行業(yè)協(xié)會團體標準T/SHRH

015-2018_________________________________________________________________________________________化妝品-酪氨酸酶活性抑制實驗方法Cosmetics

Method

前言…………… 21.范圍………………………… 32.原理………………………… 33.儀器………………………… 34.試劑………………………… 35

實驗方法…………………… 36.結(jié)果計算…………………… 47.試驗有效性驗證…………… 48.結(jié)果報告…………………… 5 本標準按照GB/T1.1-2009給出規(guī)則起草。本標準由上海日用化學(xué)品行業(yè)協(xié)會提出和歸口。資）有限公司、廣東博溪生物科技有限公司、上海日用化學(xué)品行業(yè)協(xié)會。本標準主要起草人：陳媛祺、陳志濤、范倩文、廖峰、吳建銘、呂智、孫培文、林藝青、周澤琳、萬向紅、李瓊、高宏旗、金堅、陳亦華1．范圍抑制酪氨酸酶活性而達到美白效果的水溶性原料的功效評價。2.原理pH6.8475nm處可測值的變化，評估原料對酪氨酸酶活性的抑制作用。3.儀器分析天平：感量

0.1mg；試管：10mL；可調(diào)節(jié)移液槍：1.00mL；紫外可見分光光度計。4.試劑除有另外說明外，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T

6682規(guī)定的一級水。Na2HPO4·2O；一水合檸檬酸；pH6.8

的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液① 0.2mol/L

24·2O：14.33g

溶于

水，用玻棒攪拌至溶解；② 0.1

mol/L

一水合檸檬酸：2.1g

100mL

水，用玻棒攪拌至溶解；③ pH6.8

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液：0.2mol/L

Na2HPO4·12H2O

154.5

mL，加入

mol/L

一水合檸檬酸

45.5

mL，配制成

的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液；酪氨酸酶，活力≥1000unit/mg

固體；左旋多巴，純度≥；酪氨酸酶溶液：用

pH6.8

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液配制，100u/mL左旋多巴溶液：用

pH6.8

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液配制，1mg/mL陽性對照：曲酸，純度≥98.5%5.實驗方法T-0C-DPPH

0溶劑本底mLmL0.51.5mL0.50.5mL3/1/3/1/陽性對照物用

pH6.8

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液稀釋成：1mg/mL、0.2mg/mL、0.04mg/mL、系列濃度梯度用以驗證試驗系統(tǒng)。受試物處理：受試物用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液稀釋為多級濃度樣品。參照表

1

10mL

TT0CC0樣品的每個受試濃度的樣品管（T）需設(shè)立

3

支平行管，同時酶反應(yīng)管（C

3

支平行管。在樣品管（TT0）中各加入

1mL

相同濃度的樣品溶液，酶反應(yīng)管（C）和溶劑本底（C0）則分別加入

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。TC

0.5mL

T0C0

磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液代替，將樣品和酪氨酸酶充分混勻，置

℃水浴槽孵育

分鐘。依次在各管中加入

5

中，在

475nm

處測定吸光值。

樣品加液要求6.結(jié)果計算計算酪氨酸酶抑制率：抑制率（%）（1

-

T

-

T0C

C

0

)

100%…………（1）（1）式中：T—樣品管吸光值，即樣品與酪氨酸酶反應(yīng)后溶液吸光值；T0—樣品本底吸光值；C—酶反應(yīng)管吸光值

3

次平均值，即未加樣品時酪氨酸酶和多巴反應(yīng)的吸光值；C0—溶劑本底吸光值。7.試驗有效性驗證

IC50（達到

抑制效果時對應(yīng)的樣品受試濃度）應(yīng)在

，則認為試驗系統(tǒng)有效。應(yīng)用擬合公式（

R

應(yīng)用擬合公式（

R

≥0.9）計算各樣品的

IC50，IC50越小代表活性越強。準差（Standard

，SD），

值須≤3%，則認為試驗平行性有效。8.

結(jié)果報告樣品在某一受試濃度下的對酪氨酸酶的抑制率應(yīng)表述為：抑制率平均值±抑制率間的標準差（SD）。對于樣品抑制酪