磁珠分離細胞技術(shù)

磁珠分離細胞技術(shù)磁珠分離細胞技術(shù)第1頁磁珠分選技術(shù)免疫學+細胞生物學+磁力學基于抗體反抗原特異性識別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、OligodT磁珠在高強度、梯度磁場中到達磁性分離目標：分離細胞、蛋白、核酸、細菌等磁珠分離細胞技術(shù)第2頁磁珠磁力架分離柱或分離試管

MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…磁珠分選系統(tǒng)磁珠分離細胞技術(shù)第3頁管式分選Dynalbeads?Dynalbeads分離試管磁力架磁珠分離細胞技術(shù)第4頁磁珠分離細胞技術(shù)第5頁柱式分選磁珠分離細胞技術(shù)第6頁未標識細胞

先行流出MACS微珠進行磁性標識撤去磁場，將標識細胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下形成強大磁場，使含磁珠細胞懸浮在磁場中磁珠分離細胞技術(shù)第7頁MACSd≈50nm，多聚糖和氧化鐵組成超順磁化微粒；可被細胞生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小細胞(10-8);Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適合用于細胞活化；BDd≈200nm，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量BD抗體；StemCell

管式；柱式;R&Dd≈150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體.磁珠分離細胞技術(shù)第8頁直標間標抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠磁珠分離細胞技術(shù)第9頁在沒有直接標識微珠可選時使用自備抗體或配體磁性分選中分選或去除用多個抗體混合物標識各種細胞分選稀有細胞和抗原弱表示細胞間標擴展了分選范圍磁珠分離細胞技術(shù)第10頁分選策略陽性分選去除分選多重分選磁珠分離細胞技術(shù)第11頁用磁珠標識目標細胞目標細胞滯留在分選柱內(nèi)目標細胞被洗脫，搜集目標細胞磁性標識后，作為陽性標識組分直接分選出來。高純度，高回收率，操作簡單，尤其是富集稀少細胞。磁珠分離細胞技術(shù)第12頁分選前陰性組分(未滯留在分選柱上細胞)陽性組分(滯留在分選柱上細胞)應(yīng)用anti-CD19磁珠分選人外周血中B細胞磁珠分離細胞技術(shù)第13頁非目標細胞磁性標識后，作為陰性組分滯留在分選柱上，未標識目標細胞被分選出來。去除不需要細胞缺乏針對目標細胞特異性抗體（如腫瘤細胞）不需要抗體和目標細胞結(jié)合，即細胞不被刺激（如T細胞、B細胞、NK細胞功效分析）需深入經(jīng)過陽性選擇分選細胞亞群。標識非目標細胞非目標細胞滯留在分選柱上，被去除磁珠分離細胞技術(shù)第14頁生物素標識CD2,CD14,CD16,CD36,CD43,CD235a;再加入鏈酶親和素標識磁珠應(yīng)用去除法分選人外周血中B細胞磁珠分離細胞技術(shù)第15頁先去除非目標細胞，再進行陽性分選。非目標細胞也表示用來陽性選擇目標細胞抗原；要分選非常稀有細胞，先去除非目標細胞再行陽性分選，可取得高純度目標細胞。標識去除非目標細胞標識目標細胞洗脫目標細胞磁珠分離細胞技術(shù)第16頁應(yīng)用：分選人外周血中CD4+CD25+

T細胞分選前去除分選后陽性分選后陰性組分陽性分選后陽性組分磁珠分離細胞技術(shù)第17頁洗脫目標細胞用標識1標識目標細胞用標識2標識目標細胞去除磁珠標識洗脫目標細胞進行屢次連續(xù)陽性分選，進行新標識前先去除原來磁珠標識。可進行多參數(shù)分選。磁珠分離細胞技術(shù)第18頁應(yīng)用：分選人外周血中CD3+CD56+

T細胞分選前第一次陽選第二次陽選磁珠分離細胞技術(shù)第19頁優(yōu)點：操作簡單，高效快捷，無菌和細胞狀態(tài)更有確保，回收率、純度高。缺點：不能在分選同時進行分析，分選過程中極難去除死細胞團塊干擾，難于同時進行各種標識物分選。磁珠分離細胞技術(shù)第20頁分選前標本處理密度梯度離心(Ficoll,Percoll)（依據(jù)情況）溶血(溶解紅細胞)過濾(單個細胞)分選標本：不含有死細胞或者碎片單細胞懸液