磁珠分離細(xì)胞技術(shù)

磁珠分離細(xì)胞技術(shù)磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第1頁(yè)磁珠分選技術(shù)免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)基于抗體反抗原特異性識(shí)別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、OligodT磁珠在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中到達(dá)磁性分離目標(biāo)：分離細(xì)胞、蛋白、核酸、細(xì)菌等磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第2頁(yè)磁珠磁力架分離柱或分離試管

MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…磁珠分選系統(tǒng)磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第3頁(yè)管式分選Dynalbeads?Dynalbeads分離試管磁力架磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第4頁(yè)磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第5頁(yè)柱式分選磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第6頁(yè)未標(biāo)識(shí)細(xì)胞

先行流出MACS微珠進(jìn)行磁性標(biāo)識(shí)撤去磁場(chǎng)，將標(biāo)識(shí)細(xì)胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下形成強(qiáng)大磁場(chǎng)，使含磁珠細(xì)胞懸浮在磁場(chǎng)中磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第7頁(yè)MACSd≈50nm，多聚糖和氧化鐵組成超順磁化微粒；可被細(xì)胞生物降解而無(wú)需解離磁珠；分離豐度極小細(xì)胞(10-8);Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適合用于細(xì)胞活化；BDd≈200nm，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量BD抗體；StemCell

管式；柱式;R&Dd≈150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體.磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第8頁(yè)直標(biāo)間標(biāo)抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第9頁(yè)在沒(méi)有直接標(biāo)識(shí)微珠可選時(shí)使用自備抗體或配體磁性分選中分選或去除用多個(gè)抗體混合物標(biāo)識(shí)各種細(xì)胞分選稀有細(xì)胞和抗原弱表示細(xì)胞間標(biāo)擴(kuò)展了分選范圍磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第10頁(yè)分選策略陽(yáng)性分選去除分選多重分選磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第11頁(yè)用磁珠標(biāo)識(shí)目標(biāo)細(xì)胞目標(biāo)細(xì)胞滯留在分選柱內(nèi)目標(biāo)細(xì)胞被洗脫，搜集目標(biāo)細(xì)胞磁性標(biāo)識(shí)后，作為陽(yáng)性標(biāo)識(shí)組分直接分選出來(lái)。高純度，高回收率，操作簡(jiǎn)單，尤其是富集稀少細(xì)胞。磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第12頁(yè)分選前陰性組分(未滯留在分選柱上細(xì)胞)陽(yáng)性組分(滯留在分選柱上細(xì)胞)應(yīng)用anti-CD19磁珠分選人外周血中B細(xì)胞磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第13頁(yè)非目標(biāo)細(xì)胞磁性標(biāo)識(shí)后，作為陰性組分滯留在分選柱上，未標(biāo)識(shí)目標(biāo)細(xì)胞被分選出來(lái)。去除不需要細(xì)胞缺乏針對(duì)目標(biāo)細(xì)胞特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）不需要抗體和目標(biāo)細(xì)胞結(jié)合，即細(xì)胞不被刺激（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功效分析）需深入經(jīng)過(guò)陽(yáng)性選擇分選細(xì)胞亞群。標(biāo)識(shí)非目標(biāo)細(xì)胞非目標(biāo)細(xì)胞滯留在分選柱上，被去除磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第14頁(yè)生物素標(biāo)識(shí)CD2,CD14,CD16,CD36,CD43,CD235a;再加入鏈酶親和素標(biāo)識(shí)磁珠應(yīng)用去除法分選人外周血中B細(xì)胞磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第15頁(yè)先去除非目標(biāo)細(xì)胞，再進(jìn)行陽(yáng)性分選。非目標(biāo)細(xì)胞也表示用來(lái)陽(yáng)性選擇目標(biāo)細(xì)胞抗原；要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目標(biāo)細(xì)胞再行陽(yáng)性分選，可取得高純度目標(biāo)細(xì)胞。標(biāo)識(shí)去除非目標(biāo)細(xì)胞標(biāo)識(shí)目標(biāo)細(xì)胞洗脫目標(biāo)細(xì)胞磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第16頁(yè)應(yīng)用：分選人外周血中CD4+CD25+

T細(xì)胞分選前去除分選后陽(yáng)性分選后陰性組分陽(yáng)性分選后陽(yáng)性組分磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第17頁(yè)洗脫目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)識(shí)1標(biāo)識(shí)目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)識(shí)2標(biāo)識(shí)目標(biāo)細(xì)胞去除磁珠標(biāo)識(shí)洗脫目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行屢次連續(xù)陽(yáng)性分選，進(jìn)行新標(biāo)識(shí)前先去除原來(lái)磁珠標(biāo)識(shí)。可進(jìn)行多參數(shù)分選。磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第18頁(yè)應(yīng)用：分選人外周血中CD3+CD56+

T細(xì)胞分選前第一次陽(yáng)選第二次陽(yáng)選磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第19頁(yè)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，高效快捷，無(wú)菌和細(xì)胞狀態(tài)更有確保，回收率、純度高。缺點(diǎn)：不能在分選同時(shí)進(jìn)行分析，分選過(guò)程中極難去除死細(xì)胞團(tuán)塊干擾，難于同時(shí)進(jìn)行各種標(biāo)識(shí)物分選。磁珠分離細(xì)胞技術(shù)第20頁(yè)分選前標(biāo)本處理密度梯度離心(Ficoll,Percoll)（依據(jù)情況）溶血(溶解紅細(xì)胞)過(guò)濾(單個(gè)細(xì)胞)分選標(biāo)本：不含有死細(xì)胞或者碎片單細(xì)胞懸液