人工抗體的制備

關(guān)于人工抗體的制備第一節(jié)多克隆抗體一、概念：采用傳統(tǒng)免疫方法，將抗原物質(zhì)經(jīng)不同途徑注入動(dòng)物體內(nèi)，數(shù)次免疫后采血，分離血清，由此獲得抗血清即為多克隆抗體。簡稱多抗。第2頁,共17頁，2024年2月25日，星期天二、多克隆抗體用途1.用于抗原物質(zhì)的鑒別、定位、分析和提純。2.作為疾病的診斷、檢疫試劑。3.作為人和動(dòng)物的某些疾病的治療制劑。第3頁,共17頁，2024年2月25日，星期天三、多克隆抗體制備過程第4頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)單克隆抗體一、概念：

是指由一個(gè)B細(xì)胞分化增殖的子代細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的針對(duì)單一抗原決定簇的抗體，簡稱單抗。

特點(diǎn)：高特異性、高均一性第5頁,共17頁，2024年2月25日，星期天二、單抗與多抗的比較

特性多抗

單抗

對(duì)免疫原的要求免疫原純度高，不純的抗原即可抗體純度才高產(chǎn)生高純度抗體

抗體產(chǎn)生細(xì)胞多克隆性單克隆性

同質(zhì)性高度異質(zhì)高度同質(zhì)

特異性較高，與抗原上高，與特定多種決定簇結(jié)合決定簇結(jié)合

穩(wěn)定性較好較差

標(biāo)準(zhǔn)化較難簡單

交叉反應(yīng)很常見不常見

沉淀反應(yīng)有大多數(shù)沒有第6頁,共17頁，2024年2月25日，星期天二、單抗與多抗的比較

特性多抗

單抗

適用的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)適用大多數(shù)需適當(dāng)選擇抗體純度才高產(chǎn)生高純度抗體

供應(yīng)量有限無限

有效抗體含量

0.1~1.0懸浮培養(yǎng)：0.01~0.05

（mg/mL）中空纖維：1.0~5.0

小鼠腹水：1.0~5.0

無關(guān)Ig含量

10~15體外培養(yǎng)液：無

（mg/mL）小鼠腹水：0.5~1.0

其他血清蛋白有體外培養(yǎng)：少量牛血清白蛋白小鼠腹水：少量雜蛋白第7頁,共17頁，2024年2月25日，星期天三、建立B細(xì)胞雜交瘤與單克隆抗體生產(chǎn)基本過程第8頁,共17頁，2024年2月25日，星期天四、單克隆抗體的優(yōu)勢

高度均一性：純度很高的均一性抗體

高度專一性：只對(duì)抗原分子上某一抗原決定簇起反應(yīng)。

大量產(chǎn)生及穩(wěn)定性：雜交瘤細(xì)胞能在體內(nèi)外無限繁殖之傳代。

第9頁,共17頁，2024年2月25日，星期天五、單克隆抗體的應(yīng)用（一）在血清學(xué)技術(shù)方面。（二）在免疫學(xué)基礎(chǔ)研究方面。（三）在腫瘤治療方面。如生物導(dǎo)彈。（四）在抗原純化方面。（五）用于制備抗獨(dú)特型抗體疫苗。第10頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)基因工程抗體一、概念：利用基因工程技術(shù)制備的抗體分子，稱為基因工程抗體。這是分子水平的抗體。優(yōu)勢：去除或減少無關(guān)結(jié)構(gòu)，保留或增加天然抗體特異性和生物學(xué)活性。

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基本制備過程：第12頁,共17頁，2024年2月25日，星期天

是指在同一抗體分子中含有不同種屬來源抗體分子片段的抗體。

嵌合抗體多為“鼠-人”類型。一、嵌合抗體：

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將鼠抗體超變區(qū)基因嵌入人抗體Fab骨架區(qū)編碼基因中，再將此DNA片段與人Ig恒定區(qū)基因相連，轉(zhuǎn)染雜交瘤細(xì)胞，并表達(dá)嵌合的V區(qū)抗體。

二、重構(gòu)抗體：

三、單鏈抗體：

是將Ig的H鏈和L鏈的V區(qū)基因相連，轉(zhuǎn)染大腸桿菌表達(dá)的抗體分子，又稱單鏈FV分子。

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如:Ig相關(guān)分子：將抗體分子部分片段連接到與抗體無關(guān)的序列上得到。

噬菌體抗體：將已知特異性的抗體分子的所有V區(qū)基因在噬菌體中構(gòu)建基因庫，用噬菌體感染細(xì)菌，模擬免疫選擇過程，使具有相應(yīng)特異性的重鏈和輕鏈可變區(qū)在噬菌體表面呈現(xiàn)出來。四、其他基因工程抗體：

五、全套抗體基因庫

第15頁,共17頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)催化抗體一、概念：