稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化

一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握活菌計(jì)數(shù)基本原理及方法掌握從樣品中分離目標(biāo)微生物原理及方法稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第1頁二、試驗(yàn)原理---稀釋平皿計(jì)數(shù)法將微生物細(xì)胞充分稀釋到單個(gè)分散，把這些單個(gè)分散細(xì)胞均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后長出菌落肉眼可見，每個(gè)菌落都由原液中單個(gè)細(xì)胞發(fā)育而來，計(jì)算菌落數(shù)，經(jīng)過公式能夠求出單位原樣品中活菌數(shù)。每ml(g)樣品中活菌數(shù)=（每皿菌落數(shù)平均值/取樣體積）×稀釋倍數(shù)稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第2頁二、試驗(yàn)原理---土壤中真菌分離純化馬丁孟加拉紅---鏈霉素培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基孟加拉紅鏈霉素稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第3頁三、試驗(yàn)器材（一）培養(yǎng)基1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2、馬丁孟加拉紅---鏈霉素培養(yǎng)基（二）其它1、無菌培養(yǎng)皿2、無菌吸管3、無菌水（三）儀器1、超凈工作臺(tái)2、玻璃刮鏟3、酒精棉球稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第4頁四、試驗(yàn)步驟---稀釋平板計(jì)數(shù)法1、熔化培養(yǎng)基2、倒平皿3、梯度稀釋法稀釋原菌樣品稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第5頁四、試驗(yàn)步驟4、涂平皿：選取1/106,1/107,1/108三個(gè)稀釋度計(jì)數(shù)，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻，每個(gè)稀釋度做一個(gè)重復(fù)。5、37℃倒置培養(yǎng)2天6、計(jì)數(shù)：每ml原菌樣品中微生物活細(xì)胞數(shù)（菌落形成數(shù)，CFU＝（同一稀釋度平板上菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)）/原菌樣品體積（ml）稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第6頁菌落計(jì)數(shù)規(guī)則：（一）選擇平均菌落數(shù)在30~300間平板1、只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)匯報(bào)；2、有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度菌落數(shù)除以低稀釋度菌落數(shù)值）：

1）若0.5≤比值≤2，以兩稀釋度菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得值均值匯報(bào)。

2）若2≤比值或比值≤0.5，則取其中較少菌落總數(shù)進(jìn)行匯報(bào)。（二）全部菌落數(shù)均不在30~300間以最靠近30或300平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)1、若全部稀釋度菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)匯報(bào)；2、若全部稀釋度菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)匯報(bào)；稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第7頁四、試驗(yàn)步驟---從土壤里分離真菌1、熔化培養(yǎng)基2、倒平皿3、捻碎土樣，將土樣溶解在90ml無菌水三角瓶中4、梯度稀釋法稀釋土樣10g90ml10-110-210-310-410-5稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第8頁4、涂平皿：每個(gè)稀釋度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml，用玻璃刮鏟涂布均勻。5、28℃倒置培養(yǎng)3~7天6、觀察并描述真菌菌落特征稀釋平板計(jì)數(shù)法和土壤中真菌的分離純化第9頁五、試驗(yàn)結(jié)果及分析稀釋平皿計(jì)數(shù)法：稀釋倍數(shù)106107108菌落數(shù)每ml原菌樣品中微生物活細(xì)胞數(shù)（菌落