北京市2023-2024學(xué)年高二下學(xué)期期中模擬卷生物試題（解析版）

高級(jí)中學(xué)名校試卷PAGEPAGE1北京市2023-2024學(xué)年高二下學(xué)期期中模擬卷（考試時(shí)間：75分鐘試卷滿分：100分）注意事項(xiàng)：1．答卷前，考生務(wù)必將自己的姓名、準(zhǔn)考證號(hào)等填寫(xiě)在答題卡和試卷指定位置上。2．回答選擇題時(shí)，選出每小題〖答案〗后，用鉛筆把答題卡上對(duì)應(yīng)題目的〖答案〗標(biāo)號(hào)涂黑。如需改動(dòng)，用橡皮擦干凈后，再選涂其他〖答案〗標(biāo)號(hào)?；卮鸱沁x擇題時(shí)，將〖答案〗寫(xiě)在答題卡上。寫(xiě)在本試卷上無(wú)效。3．考試結(jié)束后，將本試卷和答題卡一并交回。4．測(cè)試范圍：選擇性必修3。一、選擇題（本題共25小題，每小題2分，共50分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題意。）1．制備單克隆抗體所采用的細(xì)胞工程技術(shù)包括（）①細(xì)胞培養(yǎng)

②細(xì)胞融合③胚胎移植

④細(xì)胞核移植A．①② B．③④ C．①③ D．②④〖答案〗A〖祥解〗單克隆抗體的制備流程：人工誘導(dǎo)經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，通過(guò)培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞得到單克隆抗體，整個(gè)過(guò)程不涉及胚胎移植和細(xì)胞核移植這兩項(xiàng)技術(shù)。單克隆抗體主要涉及的細(xì)胞工程技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)等。【詳析】A、單克隆抗體主要涉及的細(xì)胞工程技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，A正確；B、單克隆抗體主要涉及的細(xì)胞工程技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，無(wú)胚胎移植，B錯(cuò)誤；C、單克隆抗體主要涉及的細(xì)胞工程技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，無(wú)胚胎移植，C錯(cuò)誤；D、單克隆抗體主要涉及的細(xì)胞工程技術(shù)包括動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，無(wú)胚胎移植，細(xì)胞核移植，D錯(cuò)誤。故選A。2．下列不屬于基因工程操作工具的是（

）A．限制性核酸內(nèi)切酶 B．DNA連接酶C．質(zhì)粒 D．DNA聚合酶〖答案〗D〖祥解〗基因工程的工具：（1）限制性核酸內(nèi)切酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒。【詳析】A、基因工程中，獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要限制性核酸內(nèi)切酶，A正確；B、基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要DNA連接酶，B正確；C、基因工程中，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí)需要運(yùn)載體，質(zhì)粒是常用的運(yùn)載體，C正確；D、DNA聚合酶催化DNA分子的合成，不是基因工程的工具，D錯(cuò)誤。故選D。3．下圖是科研人員培育矮稈抗病新品種小麥的兩種育種方法。其中①②③過(guò)程應(yīng)用的育種方法是（

）

A．雜交育種 B．誘變育種 C．單倍體育種 D．多倍體育種〖答案〗C〖祥解〗據(jù)圖分析，圖中①表示雜交，②表示花藥離體培養(yǎng)，③表示用秋水仙素處理單倍體幼苗，④表示自交，⑤表示連續(xù)自交?！驹斘觥繐?jù)圖分析可知，圖中①表示DDTT與ddtt雜交獲得DdTt的過(guò)程，②表示花藥離體培養(yǎng)獲得單倍體dT的過(guò)程，③表示用秋水仙素處理單倍體幼苗獲得ddTT的過(guò)程，因此①②③過(guò)程育種方法為單倍體育種，C正確，ABD錯(cuò)誤。故選C。4．如圖為某質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。某基因不含圖中限制酶識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的該基因與該質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒，則擴(kuò)增的該基因兩端需分別引入哪兩種限制酶的識(shí)別序列（）注：圖中限制酶的識(shí)別序列及切割形成的黏性末端均不相同。A．NdeⅠ和BamHⅠ B．NdeⅠ和XbaⅠC．XbaⅠ和BamHⅠ D．EcoRⅠ和KpnⅠ〖答案〗A〖祥解〗基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列?！驹斘觥繕?gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，要將目的基因插入到啟動(dòng)子和終止子之間，而且不能破壞啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)，抗生素抗性基因等部位。故只能選用NdeⅠ和BamHⅠ切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段，因此在PCR擴(kuò)增的該基因的兩端需分別引入NdeⅠ和BamHI兩種限制酶的識(shí)別序列。故選A。5．關(guān)于培養(yǎng)基的配制說(shuō)法不正確的是()A．在配制培養(yǎng)乳酸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，需加入維生素B．微生物的適應(yīng)性強(qiáng)，配制培養(yǎng)基時(shí)可以不考慮pHC．雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽D．配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例〖答案〗B〖祥解〗培養(yǎng)基的概念、種類(lèi)及營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：（1）概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。（2）種類(lèi)：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。（3）營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。【詳析】AB、培養(yǎng)基除需要滿足碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽幾種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求，如培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，A正確；B錯(cuò)誤；C、在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)做選擇培養(yǎng)基，雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）和無(wú)機(jī)鹽，C正確；D、不同微生物的生長(zhǎng)對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例，D正確。故選B。6．下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)過(guò)程的敘述不正確的是（）A．愈傷組織是外植體再分化形成的B．愈傷組織是一種不定形的薄壁組織團(tuán)塊C．誘導(dǎo)生芽或生根時(shí)，需要生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例合適D．再生植株移栽前，需要打開(kāi)瓶蓋在培養(yǎng)箱中“鍛煉”數(shù)日〖答案〗A〖祥解〗1、植物組織培養(yǎng)的原理是植物細(xì)胞具有全能性，其具體過(guò)程：外植體脫分化形成愈傷組織，再分化形成胚狀體，進(jìn)而成新植體，其中脫分化過(guò)程要避光，而再分化過(guò)程需光。2、植物組織培養(yǎng)的條件：①細(xì)胞離體和適宜的外界條件（如適宜溫度、適時(shí)的光照、pH和無(wú)菌環(huán)境等）。②一定的營(yíng)養(yǎng)（無(wú)機(jī)、有機(jī)成分）和植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）。3、在植物的生長(zhǎng)發(fā)育和適應(yīng)環(huán)境變化的過(guò)程中，各種植物激素并不是孤立地起作用，而是多種激素相互作用共同調(diào)節(jié)．在植物組織培養(yǎng)時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值能影響愈傷組織分化出根或芽．生長(zhǎng)素用量比細(xì)胞分裂素用量，比值高時(shí)，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低時(shí)，有利于芽的分化、抑制根的形成．比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)。【詳析】A、外植體經(jīng)過(guò)脫分化可以形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)再分化形成胚狀體，A錯(cuò)誤；B、愈傷組織是一團(tuán)排列疏松而無(wú)規(guī)則、高度液泡化的、呈無(wú)定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細(xì)胞，B正確；C、生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值大時(shí)有利于根的形成，比值小時(shí)，則促進(jìn)芽的形成，C正確；D、再生植株移栽前，需要打開(kāi)瓶蓋在培養(yǎng)箱中“鍛煉”數(shù)日，以適應(yīng)環(huán)境，D正確。故選A。7．下表是培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）組分含量KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4-7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mLA．該培養(yǎng)基從功能上分屬于選擇培養(yǎng)基B．使用稀釋涂布平板法才能得到單菌落C．配制微生物培養(yǎng)基時(shí)，不一定含碳源D．在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性〖答案〗B〖祥解〗培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物?！驹斘觥緼、該培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，只有分解尿素的微生物才能生長(zhǎng)，所以是選擇培養(yǎng)基，A正確；B、使用稀釋涂布平板法和平板劃線法均可得到單菌落，B錯(cuò)誤；C、如果培養(yǎng)的微生物為自養(yǎng)微生物，培養(yǎng)基中不需要添加碳源，C正確；D、在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性，D正確。故選B。8．下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)室制作果酒的敘述，正確的是（）A．發(fā)酵液中葡萄糖含量持續(xù)下降，pH先增大后減小最后維持相對(duì)穩(wěn)定B．果酒制作的過(guò)程也是微生物生長(zhǎng)、繁殖和代謝的過(guò)程C．果酒變酸可能是醋酸菌將乙醇直接轉(zhuǎn)化為醋酸D．將葡萄汁制成果酒后，有機(jī)物總量增多而種類(lèi)減少〖答案〗B〖祥解〗參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類(lèi)型為異養(yǎng)兼性厭氧型。參與果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陳代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型?！驹斘觥緼、果酒發(fā)酵過(guò)程中有二氧化碳的產(chǎn)生，故pH先減小后維持穩(wěn)定，A錯(cuò)誤；B、果酒制作的過(guò)程也是微生物生長(zhǎng)、繁殖和代謝的過(guò)程，如發(fā)酵初期有酵母菌大量繁殖，后期酵母菌無(wú)氧呼吸代謝產(chǎn)生酒精，B正確；C、在缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿幔珻錯(cuò)誤；D、將葡萄汁制成果酒后，有機(jī)物總量減少（細(xì)胞呼吸不斷消耗有機(jī)物）而種類(lèi)（中間產(chǎn)物的產(chǎn)生）增加，D錯(cuò)誤。故選B。9．研究人員以蘋(píng)果為原料，先接種酵母菌，發(fā)酵96小時(shí)再接種老陳醋的醋醅（含醋酸菌）進(jìn)行發(fā)酵，釀造蘋(píng)果醋。如圖為發(fā)酵液中酒精含量隨發(fā)酵時(shí)間變化的曲線。下列相關(guān)分析正確的是（

）A．發(fā)酵0~96小時(shí)內(nèi)酵母菌只進(jìn)行無(wú)氧呼吸B．96小時(shí)后發(fā)酵溫度應(yīng)適度升高C．發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)物的能量全部留在發(fā)酵產(chǎn)品中D．當(dāng)氧氣和糖源都不充足時(shí)，醋酸菌能將乙醇分解成醋酸〖答案〗B〖祥解〗1、依圖可知，接種酵母菌前24h無(wú)酒精產(chǎn)生，釀母菌進(jìn)行有氧呼吸增加其數(shù)量。釀酒過(guò)程中，酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和CO2。2、后期接種醋酸菌進(jìn)行醋酸發(fā)酵，醋酸菌進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生醋酸?！驹斘觥緼、發(fā)酵0～24小時(shí)沒(méi)有酒精產(chǎn)生，說(shuō)明酵母菌進(jìn)行了有氧呼吸，24-96小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)了酒精，酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸，A錯(cuò)誤；B、醋酸發(fā)酵的最適溫度是30℃～35℃，酒精發(fā)酵的最適溫度18℃～25℃，96小時(shí)后進(jìn)行醋酸發(fā)酵，因此由產(chǎn)酒到產(chǎn)醋應(yīng)適度升高溫度，B正確；C、發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)物作為呼吸底物釋放的能量，大部分以熱能散失，少部分轉(zhuǎn)化為ATP中活躍的化學(xué)能，還有部分留在發(fā)酵產(chǎn)品中，C錯(cuò)誤；D、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌可將糖分解成醋酸，當(dāng)氧氣充足，缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，氧氣不充足時(shí)醋酸菌不能將乙醇分解成醋酸，因?yàn)榇姿峋呛醚蹙?，D錯(cuò)誤。故選B。10．我國(guó)科學(xué)家成功克隆出世界首例體細(xì)胞克隆猴。體細(xì)胞克隆猴的成功將有效縮短我國(guó)基于克隆猴疾病模型的藥物的研發(fā)周期，助力“健康中國(guó)2030”目標(biāo)實(shí)現(xiàn)。通過(guò)體細(xì)胞核移植技術(shù)培育克隆猴的過(guò)程中，沒(méi)有涉及的操作是（

）A．用顯微操作等技術(shù)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核B．用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚C．選擇合適時(shí)期的胚胎進(jìn)行移植D．在胚胎移植前對(duì)代孕母猴進(jìn)行超數(shù)排卵處理〖答案〗D〖祥解〗細(xì)胞核包括核膜（將細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)分開(kāi)）、染色質(zhì)（DNA和蛋白質(zhì)）、核仁（與某種RNA（rRNA）的合成以及核糖體的形成有關(guān)）、核孔（核膜上的核孔的功能是實(shí)現(xiàn)核質(zhì)之間頻繁的物質(zhì)交換和信息交流）?！驹斘觥緼、通過(guò)顯微操作技術(shù)可以去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核和第一極體，A正確；B、體細(xì)胞核移植技術(shù)中，可以用物理或化學(xué)方法激活重組細(xì)胞，使其完成發(fā)育進(jìn)程，屬于體細(xì)胞核移植技術(shù)培育克隆猴的一個(gè)步驟，B正確；C、選擇合適時(shí)期的胚胎進(jìn)行移植，使其發(fā)育成完整個(gè)體，屬于體細(xì)胞核移植技術(shù)培育克隆猴的一個(gè)步驟，C正確；D、胚胎移植前還需對(duì)代孕母猴進(jìn)行同期發(fā)情處理，這樣可以使移植的胚胎獲得相同的生理環(huán)境，以保證胚胎能夠繼續(xù)發(fā)育，D錯(cuò)誤。故選D。11．科學(xué)史資料：弗萊明發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中長(zhǎng)出了青霉菌落，青霉周?chē)霈F(xiàn)透明圈（如圖），最終發(fā)現(xiàn)青霉素?？股啬軌蛞种萍?xì)菌的生長(zhǎng)與繁殖，因此在抗生素環(huán)境周?chē)霈F(xiàn)了透明的抑菌圈。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．是否有抑菌圈可判斷抗生素對(duì)細(xì)菌是否有抑制效果B．抑菌圈直徑與菌落直徑比值的大小可判斷抗生素對(duì)細(xì)菌抑制效果強(qiáng)弱C．要選擇能抗青霉素的細(xì)菌應(yīng)從抑菌圈邊緣獲取目的菌D．抑菌圈邊緣存活的細(xì)菌一定產(chǎn)生了耐藥性〖答案〗D〖祥解〗在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)為選擇培養(yǎng)基?！驹斘觥緼、若抗生素對(duì)細(xì)菌有抑制效果，則存在抗生素的部位不會(huì)生長(zhǎng)細(xì)菌菌落，故是否有抑菌圈可判斷抗生素對(duì)細(xì)菌是否有抑制效果，A正確；B、抑菌圈直徑與菌落直徑比值的大小可判斷抗生素對(duì)細(xì)菌抑制效果強(qiáng)弱，一般而言比值越大，抑菌效果越好，B正確；C、由于抑菌圈邊緣的菌落直接與青霉素接觸，耐藥性強(qiáng)，所以連續(xù)培養(yǎng)時(shí)應(yīng)從抑菌圈邊緣的菌落挑取細(xì)菌，從而獲取目的菌，C正確；D、抗生素能夠殺死細(xì)菌，抑菌圈邊緣抗生素濃度較低，故抑菌圈邊緣菌落中的細(xì)菌可能產(chǎn)生了耐藥性，但有可能也存在能利用耐藥菌產(chǎn)物的其它菌存在，D錯(cuò)誤。故選D。12．下圖表示利用棉花葉肉細(xì)胞的原生質(zhì)體進(jìn)行遺傳改良的過(guò)程，據(jù)圖分析下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．①過(guò)程需在適宜條件下用纖維素酶和果膠酶的混合物處理B．②過(guò)程能定向誘導(dǎo)原生質(zhì)體產(chǎn)生優(yōu)良性狀的突變C．③過(guò)程中葉肉細(xì)胞失去了其特有的結(jié)構(gòu)和功能D．④過(guò)程需用適宜配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素處理〖答案〗B〖祥解〗圖示表示利用棉花葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體培養(yǎng)進(jìn)行遺傳改良的過(guò)程，其中①表示采用酶解法去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體的過(guò)程；②表示紫外線誘導(dǎo)原生質(zhì)體基因突變；③表示脫分化形成愈傷組織的過(guò)程；④表示再分化過(guò)程；圖表示植物組織培養(yǎng)過(guò)程，其原理是植物細(xì)胞的全能性?！驹斘觥緼、植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，①表示獲得原生質(zhì)體的過(guò)程，需要在適宜條件下使用纖維素酶和果膠酶處理除去細(xì)胞壁，A正確；B、基因突變是不定向的，②過(guò)程不能定向誘導(dǎo)原生質(zhì)體產(chǎn)生優(yōu)良性狀的突變，B錯(cuò)誤；C、③表示脫分化形成愈傷組織的過(guò)程，葉肉細(xì)胞失去了原來(lái)特有的結(jié)構(gòu)和功能，C正確；D、④表示再分化過(guò)程，決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）的種類(lèi)和比例，D正確。故選B。13．《詩(shī)經(jīng)》中有“中田有廬，疆場(chǎng)有瓜，是剝是菹，獻(xiàn)之皇祖”的詩(shī)句。“剝”和“菹”是腌漬加工的意思。許慎在《說(shuō)文解字》中解釋“菹菜者，酸菜也”。下列敘述正確的是（）A．泡菜壇內(nèi)液體表面可能出現(xiàn)一層由酵母菌繁殖形成的白膜B．為保證泡菜壇內(nèi)的無(wú)氧環(huán)境，腌制時(shí)應(yīng)盡量將泡菜壇裝滿C．為了降低雜菌污染的風(fēng)險(xiǎn)，發(fā)酵前需要對(duì)器具和蔬菜進(jìn)行消毒D．腌制過(guò)程中乳酸和亞硝酸鹽的含量會(huì)先增加后減少再趨于穩(wěn)定〖答案〗A〖祥解〗泡菜的制作原理：泡菜的制作離不開(kāi)乳酸菌。在無(wú)氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。【詳析】A、在泡菜壇內(nèi)液體表面有時(shí)會(huì)出現(xiàn)一層白膜，這層白膜是由酵母菌大量繁殖所致，A正確；B、泡菜腌制時(shí)應(yīng)裝至八成滿，以防止發(fā)酵液溢出，B錯(cuò)誤；C、為了降低雜菌污染的風(fēng)險(xiǎn)，發(fā)酵前需要對(duì)器具進(jìn)行消毒，對(duì)蔬菜不需要消毒，C錯(cuò)誤；D、腌制過(guò)程中亞硝酸鹽的含量會(huì)先增加后減少再趨于穩(wěn)定，乳酸含量會(huì)一直增加后穩(wěn)定，D錯(cuò)誤。故選A。14．孝感米酒是湖北省的傳統(tǒng)美食，其制作流程為：糯米清洗蒸煮+酒曲（含霉菌、酵母菌等微生物）→發(fā)酵→高溫煮制→灌裝保存。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．蒸煮好的糯米需冷卻后再加入酒曲，以防影響酒曲中微生物的活性B．制備好的糯米與酒曲充分混合，裝滿容器后進(jìn)行密封發(fā)酵C．發(fā)酵時(shí)，霉菌先分泌淀粉酶進(jìn)行糖化后，酵母菌才能大量繁殖D．高溫煮制的目的是使糯米停止發(fā)酵并消毒殺菌〖答案〗B〖祥解〗酵母菌既可以在有氧的條件下生活，也可以在無(wú)氧的條件下生活。有氧時(shí)它將有機(jī)物分解成二氧化碳和水，無(wú)氧時(shí)將有機(jī)物分解成酒精和二氧化碳。制作米酒利用的是酵母菌的無(wú)氧呼吸，所以在操作過(guò)程中要注意做好密封工作，同時(shí)也要注意溫度的控制，溫度太低，酵母菌的代謝太過(guò)緩慢從而影響發(fā)酵速度，溫度太高，容易燙死酵母菌，一般發(fā)酵溫度應(yīng)控制在30℃左右。【詳析】A、溫度過(guò)高，會(huì)將酵母菌等微生物殺死（避免高溫殺死酵母菌），故蒸煮好的糯米需冷卻后再加入酒曲，以防影響酒曲中微生物的活性，A正確；B、釀酒過(guò)程中利用酵母菌的無(wú)氧呼吸會(huì)產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w，為防止發(fā)酵液溢出，不會(huì)裝滿容器后進(jìn)行密封發(fā)酵，會(huì)留有一段空間（一方面利于早期酵母菌有氧呼吸繁殖增加數(shù)量，一方面防止發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵液溢出），B錯(cuò)誤；C、發(fā)酵時(shí)，霉菌先分泌淀粉酶進(jìn)行糖化后，產(chǎn)生大量的葡萄糖，供酵母菌分解利用，C正確；D、煮制的作用主要有兩個(gè)，一是通過(guò)高溫使糯米停止發(fā)酵，二是通過(guò)高溫煮制達(dá)到殺菌消毒的目的，D正確。故選B。15．下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述，正確的是（

）A．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后即可成功表達(dá)B．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體C．限制酶能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列D．基因工程具有較大危害性，所以應(yīng)該禁止進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)〖答案〗C〖祥解〗基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲??；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。其中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心?！驹斘觥緼、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，不一定能成功表達(dá)，需要進(jìn)行檢測(cè)和鑒定，A錯(cuò)誤；B、基因工程中常用的工具酶有限制酶、DNA連接酶，運(yùn)載體不屬于工具酶，B錯(cuò)誤；C、限制酶的作用是識(shí)別特定核苷酸序列，并在特定的位點(diǎn)切割DNA片段并切開(kāi)特定部位的磷酸二酯鍵，C正確；D、基因工程具有一定的危害性，所以應(yīng)該注意轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性，但不是禁止進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)，D錯(cuò)誤。故選C。16．下圖是利用微生物制作果酒、果醋的流程示意圖，下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．為提高果酒的品質(zhì)，可在果汁中加入人工培養(yǎng)的菌種B．挑選葡萄時(shí)，去除腐爛的籽粒和枝梗后再?zèng)_洗C．家庭釀酒時(shí)加入的少量白砂糖，酵母菌并不能利用D．A過(guò)程后僅需提高一定的環(huán)境溫度就能產(chǎn)生果醋〖答案〗A〖祥解〗1.果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，在無(wú)氧條件下，酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵。溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件，20℃左右，酒精發(fā)酵時(shí)，一般將溫度控制在18~25℃，在葡萄酒自然發(fā)酵過(guò)程當(dāng)中，其主要作用的是附著在葡萄皮上的野生酵母菌。2.醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷４姿峋淖钸m生長(zhǎng)溫度為30~35℃。題圖分析，圖中A是酒精發(fā)酵?！驹斘觥緼、為了提高果酒的品質(zhì)，可在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌，以提供純凈的菌種，這樣可提高酒精的產(chǎn)量，A正確；B、挑選葡萄時(shí)，應(yīng)該先用清水沖洗掉污物，再去除腐爛的籽粒和枝梗，可防止雜菌污染，B錯(cuò)誤；C、家庭釀酒時(shí)加入的少量白砂糖來(lái)增加糖分，供酵母菌利用，C錯(cuò)誤；D、由于參與果醋制作的醋酸菌是嗜氧菌、也是嗜溫菌，因此A過(guò)程結(jié)束后要生產(chǎn)果醋，除了需要提高一定的環(huán)境溫度，還要通入氧氣，D錯(cuò)誤。故選A。17．甘薯由于能增強(qiáng)免疫功能、防癌抗癌、抗衰老、防止動(dòng)脈硬化等越來(lái)越被人們喜愛(ài)。但甘薯屬無(wú)性繁殖作物，同時(shí)又是同源六倍體，具有自交不育和雜交不親和性，這使甘薯生產(chǎn)和育種存在諸多常規(guī)方法難于解決的問(wèn)題。下列相關(guān)操作不合理的是（

）A．利用培養(yǎng)的愈傷組織進(jìn)行誘變育種，可以顯著提高變異頻率，加速育種進(jìn)程B．利用組織培養(yǎng)形成的胚狀體制作人工種子，解決種苗用量大、成本高的問(wèn)題C．利用原生質(zhì)體融合實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，可以克服雜交不親和，充分利用遺傳資源D．利用莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒苗，使植株具備抗病毒的能力，產(chǎn)品質(zhì)量得到提高〖答案〗D〖祥解〗1.植物組織培養(yǎng)過(guò)程是：離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后再分化生成根、芽，最終形成植物體．植物組織培養(yǎng)依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性，屬于無(wú)性生殖；2.植物的體細(xì)胞雜交是將不同植物的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)形成雜種細(xì)胞，進(jìn)而利用植物的組織培養(yǎng)將雜種細(xì)胞培育成多倍體的雜種植株，植物體細(xì)胞雜交依據(jù)的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性。植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中無(wú)有性生殖細(xì)胞的結(jié)合，屬于無(wú)性生殖?！驹斘觥緼、愈傷組織具有分裂旺盛的優(yōu)點(diǎn)，適于誘變育種的取材，能提高突變頻率，加速育種進(jìn)程，A正確；B、植物細(xì)胞工程應(yīng)用之一是利用胚狀體包囊人工胚乳和人工種皮制成人工種子，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，從而解決種苗用量大、成本高的問(wèn)題，B正確；C、原生質(zhì)的融合原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性，通過(guò)去壁、促融、細(xì)胞壁再生、組織培養(yǎng)技術(shù)可培育異源雜合體，充分利用遺傳資源，該育種方式的典型優(yōu)勢(shì)是克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，C正確；D、莖尖等分裂旺盛部位無(wú)病毒感染，所以利用莖尖分生組織培養(yǎng)出無(wú)病毒且保持優(yōu)良性狀的幼苗，但脫毒苗的培育不等于具備抗病毒的能力，D錯(cuò)誤。故選D。18．下列生物工程實(shí)施過(guò)程中直接運(yùn)用了細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原理的是（

）A．植物組織培養(yǎng) B．制備單克隆抗體C．多利羊的誕生 D．制作尿糖試紙〖答案〗B〖祥解〗本題對(duì)現(xiàn)代生物技術(shù)的原理進(jìn)行了考查，理解掌握各項(xiàng)生物技術(shù)的過(guò)程及區(qū)別有助于理解相關(guān)技術(shù)的原理，這是解答本題的關(guān)鍵?！驹斘觥緼、植物的組織培養(yǎng)是將離體的細(xì)胞培養(yǎng)成植株的過(guò)程，體現(xiàn)細(xì)胞的全能性，A錯(cuò)誤；B、制備單克隆抗體屬于細(xì)胞融合，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，B正確；C、克隆羊多利的培育屬于克隆技術(shù)，C錯(cuò)誤；D、尿糖試紙與尿液相遇時(shí)，會(huì)因尿液中葡萄糖含量的由少到多而依次呈現(xiàn)出淺藍(lán)、淺綠、棕色或深棕色，沒(méi)有體現(xiàn)細(xì)胞膜的流動(dòng)性，D錯(cuò)誤。故選B。19．PCR技術(shù)（熒光PCR法），又稱(chēng)qPCR法，是指在反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，通過(guò)專(zhuān)門(mén)儀器實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)，以熒光強(qiáng)度來(lái)測(cè)定PCR循環(huán)后產(chǎn)物中的核酸水平，是病毒核酸檢測(cè)的主流方法。IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族，是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，IgM/IgG聯(lián)合檢測(cè)（膠體金法）是新冠抗體檢測(cè)試劑盒主要采用的技術(shù)。下列說(shuō)法不正確的是（）A．利用PCR技術(shù)進(jìn)行新冠病毒核酸檢測(cè)的前提是新冠病毒的一段核酸序列已知B．利用PCR技術(shù)擴(kuò)增新冠病毒的核酸用到的酶有逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶等C．IgM/IgG檢測(cè)試劑盒的原理是抗原—抗體特異性結(jié)合D．利用IgM/IgG試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性，一定為新冠肺炎患者〖答案〗D〖祥解〗1、PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法，它類(lèi)似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、脫氧核苷酸；而體外PCR反應(yīng)同樣需要類(lèi)似的成分，有模板、引物、PCR緩沖液、Taq酶、脫氧核苷酸。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列，實(shí)現(xiàn)對(duì)特定位置的擴(kuò)增。2、免疫學(xué)的臨床應(yīng)用有兩個(gè)方面：一是應(yīng)用免疫理論來(lái)闡明許多疾病的發(fā)病機(jī)制和發(fā)展規(guī)律；二是應(yīng)用免疫學(xué)原理和技術(shù)來(lái)診斷和防治疾病。免疫學(xué)原理主要是抗原抗體特異性結(jié)合的原理?！驹斘觥緼、PCR是擴(kuò)增DNA的一種方法，如果是RNA病毒，首先要轉(zhuǎn)化成DNA，也就是反（逆）轉(zhuǎn)錄；利用PCR技術(shù)進(jìn)行新冠病毒核酸檢測(cè)時(shí)，引物是病毒的一小段DNA片段，A正確；B、PCR是擴(kuò)增DNA的一種方法，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增新冠病毒的核酸，首先要轉(zhuǎn)化成DNA，也就是反（逆）轉(zhuǎn)錄，反（逆）轉(zhuǎn)錄用到的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶、PCR過(guò)程需要耐高溫的TaqDNA聚合酶，B正確；C、IgM和IgG均屬于免疫球蛋白家族，是機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下由漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，該抗體可以與新冠病毒的表面抗原結(jié)合，其檢測(cè)原理是抗原―抗體特異性結(jié)合，C正確；D、利用IgM/TgG試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性，可能感染新冠病毒，但不一定患病，D錯(cuò)誤。故選D。20．科研人員在雜交瘤細(xì)胞的基礎(chǔ)上獲得了雙雜交瘤細(xì)胞，能夠產(chǎn)生雙特異性抗體，該抗體可以同時(shí)結(jié)合兩種抗原?？贵w由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，重鏈和輕鏈均分為恒定區(qū)和可變區(qū)，兩條重鏈依賴(lài)于A1或B1進(jìn)行組裝（A1與B1相同），重鏈與輕鏈的組裝依賴(lài)于恒定區(qū)A2、a或B2、b（a與b相同），如圖1。因此雙雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體種類(lèi)較多，其中有一種抗體能同時(shí)與抗原α與β結(jié)合稱(chēng)為雙特異性抗體，如圖2。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．科研人員將抗原α、β分別注射到小鼠體內(nèi)引起體液免疫，分泌相應(yīng)抗體B．制備雜交瘤細(xì)胞時(shí)，需要多次篩選得到兩種雜交瘤細(xì)胞C．誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等D．圖2中若1是A2，則2、3、4、5、6分別對(duì)應(yīng)a、B2、b、α、β〖答案〗D〖祥解〗圖1中是抗原α、β分別注射到小鼠體內(nèi)，小鼠分別產(chǎn)生的α、β的兩種單克隆抗體；圖2中是雙雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的雙特異性抗體。圖中抗體由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，重鏈和輕鏈均分為恒定區(qū)和可變區(qū)，兩條重鏈依賴(lài)于A1或B1進(jìn)行組裝（A1與B1相同），重鏈與輕鏈的組裝依賴(lài)于恒定區(qū)A2、a或B2、b（a與b相同）?！驹斘觥緼、抗原α、β分別注射到小鼠體內(nèi)引起體液免疫，刺激B細(xì)胞增殖和分化出記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞，漿細(xì)胞分泌相應(yīng)抗體，A正確；B、制備雜交瘤細(xì)胞時(shí)，需將上述小鼠的脾臟組織，用胰蛋白酶處理獲得單細(xì)胞后，再與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，多次篩選得到兩種雜交瘤細(xì)胞，B正確；C、誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等，C正確；D、有一種抗體能同時(shí)與抗原α與β結(jié)合稱(chēng)為雙特異性抗體，由于圖2抗體是雙雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的雙特異性抗體，可變區(qū)的重鏈1和2位置存在A2或B2，若1是A2，則2為B2，根據(jù)圖1信息判斷（a與A2在可變區(qū)并結(jié)合α，b與B2在可變區(qū)并結(jié)合β），圖2中3與1（A2）在可變區(qū)并結(jié)合5，故3對(duì)應(yīng)a，5對(duì)應(yīng)α，同時(shí)4與2（B2）在可變區(qū)并結(jié)合6，故4對(duì)應(yīng)b，6對(duì)應(yīng)β，因此2、3、4、5、6分別對(duì)應(yīng)B2、a、b、α、β，D錯(cuò)誤。故選D。21．細(xì)菌X合成的tcel蛋白和tcil蛋白使其在與其他細(xì)菌的競(jìng)爭(zhēng)中占優(yōu)勢(shì)，其中tcel蛋白是一種有毒性的分泌蛋白。研究人員利用野生型細(xì)菌X及其不同突變體進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：在固體培養(yǎng)基表面放置一張能隔離細(xì)菌的濾膜，將一種菌（下層菌）滴加在濾膜上后再放置第二張濾膜，滴加等量的另一種菌（上層菌），共同培養(yǎng)后，對(duì)上、下層菌計(jì)數(shù)得到的結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是（

）A．實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)皿、固體培養(yǎng)基和濾膜均需要進(jìn)行消毒處理B．對(duì)上、下層菌計(jì)數(shù)可以將濾膜菌體稀釋后采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)C．由甲、乙，丙三組結(jié)果可推測(cè)tcil蛋白能夠中和tcel蛋白的毒性D．野生型細(xì)菌X在與tcel—tcil雙突變體和tcel突變體的競(jìng)爭(zhēng)中均占優(yōu)勢(shì)〖答案〗C〖祥解〗微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斘觥緼、為避免雜菌的污染，實(shí)驗(yàn)中的濾膜、培養(yǎng)皿、固體培養(yǎng)基等均需滅菌處理，A錯(cuò)誤；B、對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法是稀釋涂布平板法，具體方法是：先將菌體進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)偻坎嫉綖V膜的表面，待菌落數(shù)穩(wěn)定時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)，不能用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的原因是顯微鏡直接計(jì)數(shù)不能區(qū)分死菌和活菌，B錯(cuò)誤；C、tcel蛋白是一種有毒性的分泌蛋白，乙組中野生型可產(chǎn)生tce1蛋白作用于tcel-tcil雙突變體，后者無(wú)法產(chǎn)生tci1蛋白中和tcel蛋白的毒性，使野生菌在競(jìng)爭(zhēng)中占據(jù)優(yōu)勢(shì)；而在丙組中，野生型可產(chǎn)生tce1蛋白作用于tcel突變體，后者可以產(chǎn)生tci1蛋白中和tcel蛋白的毒性，使野生型的生長(zhǎng)受到抑制，由此推測(cè)，tcil蛋白能夠中和tcel蛋白的毒性，C正確；D、由甲組、乙組可知，野生型細(xì)菌X在與tcel-tcil雙突變體的競(jìng)爭(zhēng)中均占優(yōu)勢(shì)，由甲組、丙組可知，野生型細(xì)菌X在與tcel突變體的競(jìng)爭(zhēng)中不占優(yōu)勢(shì)，D錯(cuò)誤。故選C。22．為解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來(lái)自B淋巴細(xì)胞的染色體丟失問(wèn)題，研究者將抗原刺激后的B淋巴細(xì)胞，用EBV（一種病毒顆粒）感染，獲得“染色體核型穩(wěn)定”的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞。EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對(duì)Oua敏感。骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對(duì)Oua不敏感。下圖表示操作過(guò)程。下列分析錯(cuò)誤的是（

）A．B淋巴細(xì)胞可從多次間歇注射某種抗原的動(dòng)物脾臟中獲得B．HAT培養(yǎng)基和Oua篩選去除的是未融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞C．雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能會(huì)導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生能力下降D．圖中獲得的雜交瘤細(xì)胞需經(jīng)抗體檢測(cè)篩選后才可用于生產(chǎn)〖答案〗B〖祥解〗1、單克隆抗體的制備過(guò)程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。2、兩次篩選：篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群?！驹斘觥緼、對(duì)動(dòng)物進(jìn)行間歇注射抗原處理，以刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；B淋巴細(xì)胞在骨髓中發(fā)育成熟，可分布于淋巴結(jié)和脾臟等處，故B淋巴細(xì)胞可從多次間歇注射某種抗原的動(dòng)物脾臟中獲得，A正確；B、據(jù)題意“EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對(duì)Oua敏感；骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對(duì)Oua不敏感”可知，HAT培養(yǎng)基去除的是未與EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞融合的骨髓瘤細(xì)胞和自身融合的骨髓瘤細(xì)胞，Oua篩選去除的是未與骨髓瘤細(xì)胞融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞和自身融合的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞，B錯(cuò)誤；C、抗體是由漿細(xì)胞分泌的，雜交瘤細(xì)胞若丟失來(lái)自B淋巴細(xì)胞的染色體，可能會(huì)導(dǎo)致抗體產(chǎn)生能力下降，C正確；D、圖示獲得的雜交瘤細(xì)胞還需要經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的篩選，用專(zhuān)一抗體檢測(cè)呈現(xiàn)陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞才能直接用于生產(chǎn)單克隆抗體，D正確。故選B。23．脫氧核苷三磷酸(dNTP)和雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP，ddN-Pα~Pβ~Pγ)的結(jié)構(gòu)均與核苷三磷酸(NTP)類(lèi)似，其中dNTP核糖的第2位碳原子上的羥基(—OH)被氫原子取代而ddNTP核糖第2位和第3位碳原子上的羥基均被氫原子取代。DNA復(fù)制時(shí)，ddNTP可以與dNTP競(jìng)爭(zhēng)核苷酸鏈延長(zhǎng)位點(diǎn)，并終止DNA片段的延伸?，F(xiàn)有一些序列為5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子單鏈片段，擬通過(guò)PCR獲得被32P標(biāo)記且以堿基“A”為末端(3’為堿基A)、不同長(zhǎng)度的子鏈DNA。在反應(yīng)管中加入單鏈模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及緩沖溶液。下列敘述正確的是（

）A．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后最多可得到3種被32P標(biāo)記的子鏈DNAB．反應(yīng)底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P標(biāo)記的ddATPC．ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)的延長(zhǎng)位點(diǎn)是脫氧核苷酸鏈的5’末端D．TaqDNA聚合酶在PCR中的作用是形成氫鍵和磷酸二酯鍵〖答案〗A〖祥解〗ATP是腺苷三磷酸的英文名稱(chēng)縮寫(xiě)，其結(jié)構(gòu)可以簡(jiǎn)寫(xiě)成A—P~P~P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基團(tuán)，~代表一種特殊的化學(xué)鍵。由于兩個(gè)相鄰的磷酸基團(tuán)都帶負(fù)電荷而相互排斥等原因，使得這種化學(xué)鍵不穩(wěn)定，末端磷酸基團(tuán)有一種離開(kāi)ATP而與其他分子結(jié)合的趨勢(shì)，也就是具有較高的轉(zhuǎn)移勢(shì)能。分析題意可知，dNTP和ddNTP具有與ATP（NTP）相似的結(jié)構(gòu)，ATP中的糖是核糖，dNTP中的糖是脫氧核糖，而ddNTP中的糖是雙脫氧核糖。進(jìn)行DNA復(fù)制時(shí)，dNTP作為原料參與DNA的復(fù)制，同時(shí)能提供能量，而ddNTP可以與dNTP競(jìng)爭(zhēng)核苷酸鏈延長(zhǎng)位點(diǎn)，導(dǎo)致DNA片段延伸終止，即阻斷DNA的復(fù)制。題干中要對(duì)模板DNA分子單鏈片段通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增，且要獲得3’為堿基A的不同長(zhǎng)度的DNA分子，說(shuō)明需要ddATP作為競(jìng)爭(zhēng)底物參與PCR過(guò)程?！驹斘觥緼、分析題意可知，5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子單鏈片段共有四個(gè)堿基“A”，內(nèi)部有三個(gè)堿基“A”，因此利用PCR反應(yīng)體系，最多可得到3種被32P標(biāo)記的子鏈DNA，A正確；B、反應(yīng)底物是dCTP、dGTP、dTTP、dATP和α位32P標(biāo)記的ddATP，B錯(cuò)誤；C、DNA復(fù)制時(shí)，由5’端向3’端延伸，因此ddNTP與dNTP競(jìng)爭(zhēng)的延長(zhǎng)位點(diǎn)是脫氧核苷酸鏈的3’末端，C錯(cuò)誤；D、TaqDNA聚合酶能夠催化脫氧核苷酸在DNA的3’端延伸，故在PCR中的作用是形成磷酸二酯鍵，D錯(cuò)誤。故選A。24．人類(lèi)Y基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BC111A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，r基因的表達(dá)被抑制。通過(guò)改變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療?？蒲腥藛T擴(kuò)增了r基因上游不同長(zhǎng)度的片段(Fn與R)，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測(cè)，以確定BCL11A蛋結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體，指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需用Munl和Xhol處理載體B．從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過(guò)程需構(gòu)建7種載體C．將構(gòu)建的載體導(dǎo)入去除BCL11A基因的受細(xì)胞，可能出現(xiàn)含F(xiàn)1與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無(wú)熒光，而含F(xiàn)2-F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞有熒光D．向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，可導(dǎo)致部分受體細(xì)胞不再有熒光〖答案〗C〖祥解〗基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！驹斘觥緼、觀察載體的部分結(jié)構(gòu)的圖示，熒光蛋白基因的左側(cè)為終止子，為了將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，擴(kuò)增后的產(chǎn)物的插入點(diǎn)應(yīng)在熒光蛋白基因的右側(cè)，而熒光蛋白基因的右側(cè)有三個(gè)限制酶切點(diǎn)，分別是MunI、EcoRI和XhoI限制酶的切點(diǎn)，但因?yàn)橛肊coRI會(huì)破壞熒光蛋白基因，所以只能用MunI和XhoI限制酶切割，A正確；B、據(jù)圖中對(duì)限制酶的注釋可知，限制酶MunI識(shí)別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRI識(shí)別并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是EcoRI，在F1～F7末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是SalI，從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過(guò)程需構(gòu)建7種載體，即F1～F7與R的相關(guān)載體，B正確；C、據(jù)圖可知，F(xiàn)1與R的序列要長(zhǎng)于F2-F7與R序列，故不可能出現(xiàn)含F(xiàn)1與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無(wú)熒光，而含F(xiàn)2-F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞有熒光的現(xiàn)象，C錯(cuò)誤；D、分析題意可知，P是在雌激素誘導(dǎo)下發(fā)揮作用的啟動(dòng)子，向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，雌激素能誘導(dǎo)啟動(dòng)子發(fā)揮作用，構(gòu)建的載體含有BCL11A基因，導(dǎo)入構(gòu)建載體的受體細(xì)胞能合成BCL11A蛋白，r基因的表達(dá)被抑制，故向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，可導(dǎo)致部分受體細(xì)胞不再有熒光，D正確。故選C。25．某同學(xué)將生魚(yú)肉加鹽腌在冰箱，兩個(gè)月后發(fā)現(xiàn)魚(yú)肉看著還很新鮮但表面出現(xiàn)黃色顆粒，經(jīng)專(zhuān)家檢測(cè)這些黃色顆粒為金黃色葡萄球菌菌落，金黃色葡萄球菌對(duì)高溫、高鹽有一定耐受力，被誤食后會(huì)導(dǎo)致食物中毒。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．該腌魚(yú)可看作一種天然的選擇培養(yǎng)基B．該同學(xué)應(yīng)對(duì)冰箱進(jìn)行消毒處理C．腌魚(yú)通過(guò)烹煮做熟后，仍可安全食用D．可用LB液體培養(yǎng)基大規(guī)?？焖俜敝辰瘘S色葡萄球菌〖答案〗C〖祥解〗1、觀察菌落的形態(tài)特征應(yīng)在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行接種完成后，接種人員必須進(jìn)行消毒處理，而不是滅菌，因?qū)θ藷o(wú)法滅菌，只能消毒；2、天然培養(yǎng)基主要取自動(dòng)物體液或從動(dòng)物組織分離提取。其優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來(lái)源受限；天然培養(yǎng)基/液的種類(lèi)很多，包括生物性液體(如血清);組織浸液(如胚胎浸液);凝固劑(如血漿)等；3、選擇培養(yǎng)基是指一類(lèi)根據(jù)特定微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某理化因素抗性的原理而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長(zhǎng)，而同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的功能。【詳析】A、由題意可知，腌魚(yú)表面生長(zhǎng)有金黃色葡萄球菌菌落，可見(jiàn)腌魚(yú)為金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)提供了一些天然的營(yíng)養(yǎng)成分，可以看作一種天然的選擇培養(yǎng)基，A正確；B、由于冰箱內(nèi)腌魚(yú)表面生長(zhǎng)有金黃色葡萄球菌菌落，就需要對(duì)冰箱進(jìn)行消毒處理，B正確；C、由于該腌魚(yú)已有細(xì)菌生長(zhǎng)，即使烹煮做熟后還會(huì)有有細(xì)菌污染，不能食用，C錯(cuò)誤；D、可以用LB液體培養(yǎng)基來(lái)大規(guī)?？焖俜敝辰瘘S色葡萄球菌，D正確。故選C。二、非選擇題：本部分包括5題，共50分。26．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，除了添加糖，氨基酸等必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往還需添加動(dòng)物血清，原因是什么？______________________________________________〖答案〗由于人們對(duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)完全搞清楚，動(dòng)物血清營(yíng)養(yǎng)成分比較齊全。可以彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足?！枷榻狻絼?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）?！驹斘觥吭趧?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中除了添加糖、氨基酸等必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往還添加動(dòng)物血清，原因是由于人們對(duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)完全搞清楚，動(dòng)物血清營(yíng)養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基的不足。27．纖維素是自然界最豐富的可再生資源，纖維素酶與纖維素的利用息息相關(guān)。某興趣小組研究了海藻酸鈉溶液濃度對(duì)固定化纖維素酶活性的影響，結(jié)果如圖。回答下列問(wèn)題：（1）纖維素是生物大分子，以____________為骨架。纖維素酶至少包括三種組分，即____________。（2）加熱溶化的海藻酸鈉需冷卻才能與纖維素酶混合，原因是______________________。由圖可知，海藻酸鈉溶液對(duì)酶活性的影響是____________、____________。出現(xiàn)此結(jié)果的原因是：海藻酸鈉溶液濃度過(guò)低，____________。海藻酸鈉溶液濃度過(guò)高，凝膠孔徑過(guò)小，影響酶與底物結(jié)合。（3）進(jìn)一步探究纖維素酶的活性，纖維素酶分解纖維素產(chǎn)生____________等還原糖，能與堿性條件下的3，5－二硝基水楊酸（DNS）生成棕紅色的化合物。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度正相關(guān)，與已知濃度的____________比較，測(cè)定還原糖的生成量，即可測(cè)定纖維素酶的活性，該方法為_(kāi)___________法。（4）在鑒定纖維素分解菌的培養(yǎng)基中，____________染料可與纖維素形成紅色復(fù)合物，而不與纖維素分解后的產(chǎn)物形成紅色復(fù)合物?！即鸢浮剑?）碳鏈C1、CX酶和葡萄糖苷酶（2）避免高溫使酶失活隨海藻酸鈉溶液濃度的升高，酶活性先增大后減小濃度為3.5%時(shí)，酶活性最大凝膠孔徑過(guò)大，酶易從包埋材料中漏出（3）葡萄糖（纖維二糖）標(biāo)準(zhǔn)顯色液比色（4）剛果紅〖解析〗1、纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。2、固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。固定化細(xì)胞多采用包埋法、物理吸附法，如用海藻酸鈉進(jìn)行包埋。固定化酶固定的是一種具體的酶，不能催化一系列化學(xué)反應(yīng)；與直接使用酶相比，固定化酶使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，還可以被反復(fù)利用。一般來(lái)說(shuō)，酶更合適采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定化，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞體積大，而酶分子??；體積大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合，而體積小的酶容易從包埋材料中漏出。【詳析】（1）纖維素是生物大分子，以碳鏈為骨架。纖維素酶至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。（2）高溫會(huì)破壞酶的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致酶失活，加熱溶化的海藻酸鈉需冷卻才能與纖維素酶混合，原因是避免高溫使酶失活。由圖可知，海藻酸鈉溶液對(duì)酶活性的影響是隨著海藻酸鈉溶液濃度的增加，酶的活性呈先上升后下降的趨勢(shì)；濃度在3.5%時(shí)，酶的活性最大。出現(xiàn)此結(jié)果的原因是：海藻酸鈉溶液濃度過(guò)低，凝膠孔徑過(guò)大，酶易從包埋材料中漏出，海藻酸鈉溶液濃度過(guò)高，凝膠孔徑過(guò)小，影響酶與底物結(jié)合。（3）進(jìn)一步探究纖維素酶的活性，纖維素酶分解纖維素產(chǎn)生葡萄糖和纖維二糖等還原糖，能與堿性條件下的3，5-二硝基水楊酸（DNS）生成棕紅色的化合物。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度正相關(guān)，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯示液比較，測(cè)定還原糖的生成量，即可測(cè)定纖維素酶的活性，該方法為比色法。（4）在鑒定纖維素分解菌的培養(yǎng)基中，剛果紅染料可與纖維素形成紅色復(fù)合物，而不與纖維素分解后的產(chǎn)物形成紅色復(fù)合物，可依據(jù)培養(yǎng)基中是否產(chǎn)生透明圈來(lái)鑒定纖維素分解菌。28．豆腐和腐乳是我省多地的傳統(tǒng)美食，其制作過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)與豆腐相比，腐乳易于消化吸收的原因是________________________。(2)流程①中封瓶時(shí)防止雜菌污染的措施是________________________。(3)豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉菌株需接種到酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為毛霉生長(zhǎng)提供的主要營(yíng)養(yǎng)有水、無(wú)機(jī)鹽以及____________。某同學(xué)用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)溫度始終未達(dá)到所需的121℃，則可能的操作失誤是____________。(4)用稀釋涂布平板法測(cè)定豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉數(shù)量時(shí)，某同學(xué)將稀釋倍數(shù)為103的菌液涂布一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為31，進(jìn)而計(jì)算豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉數(shù)量。以上實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？若合理，請(qǐng)說(shuō)明理由；若不就合理，請(qǐng)改正：____________。〖答案〗(1)經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵，豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪分解成甘油和脂肪酸(2)將瓶口通過(guò)酒精燈火焰(3)碳源、氮源未排盡鍋內(nèi)的冷空氣（或未關(guān)閉排氣閥）(4)不合理，至少涂布三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算平均菌落數(shù)〖祥解〗1、腐乳的發(fā)酵在多種微生物的協(xié)同作用下進(jìn)行，其中起主要作用的是毛霉，它是一種絲狀真菌，新陳代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。2、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求?！驹斘觥浚?）毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。與豆腐相比，腐乳經(jīng)過(guò)微生物的發(fā)酵，豆腐中的蛋白質(zhì)被分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸，小分子物質(zhì)更易于消化吸收。（2）流程①（腐乳制作）中密封腌制封瓶時(shí)，將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰防止被雜菌污染，影響腐乳品質(zhì)。用含水量不同的豆腐作制作腐乳的原料、制作腐乳時(shí)控制不同的發(fā)酵條件、裝瓶時(shí)加入不同的輔料等可以制成不同風(fēng)味的腐乳。不同培養(yǎng)基的組分不盡相同，但培養(yǎng)基一般都含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，以滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求。（3）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，加熱滅菌鍋，打開(kāi)排氣閥，使水沸騰，排除鍋內(nèi)的冷空氣，等冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐步上升；若未排除鍋內(nèi)的冷空氣或未關(guān)閉排氣閥，則溫度不能達(dá)到設(shè)定要求的121℃。（4）某同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定豆腐塊上生長(zhǎng)的毛霉數(shù)量，只涂布了一個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，結(jié)果不具有說(shuō)服力，故不合理。應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，（至少）涂布三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算平均菌落數(shù)，使結(jié)果更接近真實(shí)值。29．目前，臨床上開(kāi)始采用重組人血清白蛋白（rHSA）替代人血清白蛋白（HSA）。圖1為工業(yè)化生產(chǎn)rHSA的過(guò)程示意圖?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)依據(jù)圖1和下表所示分析，在獲取目的基因時(shí)，最好選擇限制酶和共同切割質(zhì)粒，雙酶切法的優(yōu)點(diǎn)有________________________（答出2點(diǎn)）。除圖示中的啟動(dòng)子之外，構(gòu)建的表達(dá)載體還需要具有的結(jié)構(gòu)有________________________（答出2點(diǎn)）。限制酶ⅠⅡⅢⅣ識(shí)別序列及切割位點(diǎn)G↓GATCCCCTAG↑GT↓GATCAACTAG↑T↓GTACCATG↑A↓AGCTTTTCGA↑A(2)PCR擴(kuò)增時(shí)，要設(shè)計(jì)一對(duì)引物（引物1和引物2），根據(jù)圖2中HSA基因的兩端序列，需要設(shè)計(jì)的引物序列分別是____________和____________。如PCR過(guò)程完成四次循環(huán)，則所需引物的總數(shù)為_(kāi)___________。(3)可采用____________將重組基因表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌。然后在含四環(huán)素和氨芐青霉素的兩種培養(yǎng)基上分別篩選，篩選出具有____________特點(diǎn)的是含HSA基因表達(dá)載體的目標(biāo)菌。(4)AOX1為甲醇氧化酶基因的啟動(dòng)子，生產(chǎn)中常以其作為HSA基因的啟動(dòng)子，在以____________為碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)發(fā)酵。該方法的優(yōu)點(diǎn)是____________?！即鸢浮?1)ⅡⅣ使用兩種不同的限制酶可以避免目的基因和質(zhì)粒反向連接；避免目的基因和質(zhì)粒自連目的基因、標(biāo)記基因、終止子(2)5'-AATGGATCCTTC-3'3'-GTAAGTTAAGAG-5'30(3)顯微注射法抗四環(huán)素不抗氨芐青霉素(4)甲醇可以通過(guò)控制培養(yǎng)液中甲醇的有無(wú)來(lái)控制HSA基因的表達(dá)〖祥解〗1、基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品；基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)。2、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斘觥浚?）由于質(zhì)粒上沒(méi)有限制酶Ⅲ的識(shí)別位點(diǎn)，故不能選用限制酶Ⅲ；由于氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因均含有限制酶Ⅰ的識(shí)別位點(diǎn)，故不能使用限制酶Ⅰ，所以選用Ⅱ和Ⅳ切割目的基因和質(zhì)粒，選用雙酶切法，可有效避免基因的反向鏈接和自身環(huán)化。構(gòu)建基因表達(dá)載體是需要有啟動(dòng)子（起始轉(zhuǎn)錄）、目的基因、標(biāo)記基因（便于篩選）、終止子（終止轉(zhuǎn)錄）等。（2）PCR中需要一對(duì)特異性的引物，該引物能與目的基因堿基互補(bǔ)配對(duì)，子鏈延伸時(shí)從引物的5'向3'端延伸，所以?xún)蓚€(gè)引物分別為：5'-AATGGATCCTTC-3'，3'-GTAAGTTAAGAG-5'。PCR過(guò)程完成一次循環(huán)產(chǎn)生兩個(gè)DNA分子，所需引物為2個(gè)，完成第二次循環(huán)產(chǎn)生四個(gè)DNA