血型檢查方法學評價及其質(zhì)量控制

關于血型檢查方法學評價及其質(zhì)量控制血型概述

血型是人類血液以血型抗原為表現(xiàn)型的遺傳性狀，ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)是紅細胞的兩大血型抗原抗體系統(tǒng)，在臨床輸血和血液遺傳學研究上有重要意義。

血型鑒定(bloodtyping)是臨床輸血的首要問題，正確的血型鑒定是保證輸血安全的前提條件。第2頁,共38頁，2024年2月25日，星期天主要內(nèi)容ABO血型系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)抗原ABO血型系統(tǒng)抗體ABO血型系統(tǒng)亞型ABO血型鑒定檢測原理鑒定方法方法學評價質(zhì)量控制RH血型系統(tǒng)RH血型系統(tǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗體RH血型鑒定檢測原理鑒定方法方法學評價質(zhì)量控制第3頁,共38頁，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)抗體分為天然抗體和免疫性抗體天然抗體主要為IgM型免疫球蛋白免疫性抗體則來自母嬰血型不合的妊娠或血型不合的輸血，通常是來自母體的IgG型免疫球蛋白。第4頁,共38頁，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)抗體兩種抗體的比較特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐熱性（70℃）破壞穩(wěn)定與紅細胞結(jié)合最適溫度（℃）4-2537與紅細胞反應介質(zhì)生理鹽水酶處理或清蛋白溶液被血型物質(zhì)中和能不能通過胎盤不能能第5頁,共38頁，2024年2月25日，星期天ABO血型系統(tǒng)亞型A抗原的主要亞型有A1和A2，均能與抗A血清發(fā)生直接凝集反應。AB血型中也存在相應的A1B和A2B亞型。B亞型較少見，且抗原性弱，故臨床意義不大。第6頁,共38頁，2024年2月25日，星期天ABO血型檢測原理血型抗原與相應抗體在反應介質(zhì)中形成紅細胞和相應血型抗體結(jié)合的免疫復合物，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。正向定型（directtyping）反向定型（indirecttyping）第7頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法血凝試驗玻片法試管法全自動微板法流式細胞技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗微柱凝膠試驗第8頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法鹽水凝集法（saltmediumtest）第9頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法正定型，玻片法第10頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法玻片法評價它是目前臨床常用的血型鑒定的初篩試驗方法。具有操作簡便，節(jié)省材料的優(yōu)點。但弱凝集反應需要借助顯微鏡觀察確定。第11頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法反定型，試管法第12頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法試管法評價——優(yōu)點試管法是交叉配血試驗中最基礎的試驗方法之一。與玻片法原理相同，但是借助試管更大的反應空間，并對待測紅細胞予以一定的濃度的稀釋或者加入更多的待測紅細胞，通過低速離心后可根據(jù)有無肉眼可見凝集反應來判斷結(jié)果。由于待測紅細胞經(jīng)過稀釋，在一定程度上減少了血液中非特異性抗體的濃度，從而提高了試驗的敏感性。比玻片法更具有準確可靠的優(yōu)點。第13頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法試管法評價——缺點只能檢測出完全抗體（抗A、抗B）引起的血型不合，對免疫性抗體引起的血型不合不能檢出，有輸血史或不明輸血史及妊娠史不能用該法。本實驗中的生理鹽水對血清（漿）中的抗體有稀釋作用，易導致配血結(jié)果假陰性。易受冷凝集素的干擾。第14頁,共38頁，2024年2月25日，星期天方法學評價鹽水凝集法操作簡便，無需特殊儀器。玻片法：無需離心，適用于血型普查。但反應時間長，靈敏度差，凝集較弱時易導致定型錯誤。不適于反向定型。試管法：用離心法加速反應，所需時間短，適于急診定型。因離心增強紅細胞凝集，可發(fā)現(xiàn)較弱的凝集現(xiàn)象，有助于檢出亞型，故為常用血型鑒定方法。只能檢測完全抗體易受冷凝集素干擾第15頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法凝膠微柱法第16頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法凝膠微柱法的結(jié)果第17頁,共38頁，2024年2月25日，星期天方法學評價凝膠微柱法重復性好，特異性和靈敏度高，結(jié)果準確。試劑成本較高，需用離心設備。根據(jù)不同需要可選用中性凝膠、特異凝膠或抗球蛋白凝膠作為反應介質(zhì)。結(jié)果既可肉眼觀察，也可用血型分析儀分析。第18頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法全自動微板法標準化加樣、孵育、離心、懸浮、靜止反應前后吸光度值增加數(shù)值的計算對血型進行正定型與反定型第19頁,共38頁，2024年2月25日，星期天方法學評價全自動微板法此法正反定型試驗，準確率高，且能提高檢測靈敏度，使弱凝集樣本更加易顯現(xiàn)。快速、準確、自動化程度高等優(yōu)點，適合批量操作。血型微量化檢測具有節(jié)約大量昂貴抗血清、縮短檢測時間、操作程序簡單等優(yōu)點，目前在各大采供血機構(gòu)已得到廣泛應用。第20頁,共38頁，2024年2月25日，星期天鑒定方法流式細胞技術(shù)稀釋：將待測血樣的紅細胞用生理鹽水稀釋成百分之五的紅細胞懸液。標記：分裝各管分別等比加入熒光素標記抗體，避光放置15min待受檢紅細胞上的血型抗原與相應熒光標記抗體結(jié)合后，用生理鹽水洗滌離心除去未結(jié)合抗體。檢測：重懸后立即用流式細胞儀檢測與熒光標記抗體結(jié)合的紅細胞，通過軟件分析，從而得到待測樣本的紅細胞血型。第21頁,共38頁，2024年2月25日，星期天方法學評價流式細胞術(shù)在細胞分型方面具有速度快、靈敏度高、特異性好，檢測結(jié)果準確，重復性好。特別適合應用于ABO血型亞型的快速鑒定。目前有研究指出流式細胞技術(shù)亦可通過分離孕婦血液中的胎兒紅細胞用于產(chǎn)前非侵入性胎兒血型檢測。第22頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制1.標準血清要求：新鮮，在有效期內(nèi)，效價高，凝集力強，嚴防污染常用的抗血清有：人血清ABO血型抗體：穩(wěn)定性高，已滅活補體人ABO血型單克隆抗體：穩(wěn)定性較人血清抗體的穩(wěn)定性差第23頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制2.被檢紅細胞標本新鮮，嚴防污染。某些疾病出現(xiàn)假凝集，可加做自身血清和紅細胞，自身紅細胞和生理鹽水對照試驗及結(jié)合反定型結(jié)果進行鑒定。當疑有血漿成分干擾血型鑒定時可用生理鹽水反復洗滌紅細胞以除干擾。第24頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量控制3.試驗器材器材清潔、干燥、標記清楚。用試管法定型時，應同時進行正向和反向定型。須設置對照。紅細胞濃度按要求配置，紅細胞與相應抗體的比例適當。反應溫度、反應時間、離心時間。弱A亞型和弱B亞型，肉眼判斷必同時須用顯微鏡復查。第25頁,共38頁，2024年2月25日，星期天Rh血型系統(tǒng)抗原及抗體Rh血型系統(tǒng)抗原目前已發(fā)現(xiàn)的Rh抗原有45種，其中與人類關系最為密切的是D、E、C、c、e五種。D抗原的抗原性最強。Rh血型系統(tǒng)抗體絕大多數(shù)Rh抗體由輸血或妊娠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的IgG型免疫性抗體。主要Rh血型系統(tǒng)抗體有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五種，其中抗D最為常見。第26頁,共38頁，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測方法酶介質(zhì)法聚凝胺試驗（polybrenetest）第27頁,共38頁，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測方法抗球蛋白試驗（antiglobulintest）第28頁,共38頁，2024年2月25日，星期天Rh血型檢測方法人源鹽水介質(zhì)抗D試驗低離子強度溶液試驗第29頁,共38頁，2024年2月25日，星期天CompanyLogo方法學評價

方法

評價酶介質(zhì)法（直接法）

簡單、快速、經(jīng)濟，但靈敏度低。酶介質(zhì)法（間接法）

簡單、經(jīng)濟、靈敏?？设b定抗原和檢測抗體。

但較費時，準確性和穩(wěn)定性較差低離子強度溶液試驗反應時間短，靈敏度高聚凝胺試驗快速、靈敏、準確性高，應用較多抗球蛋白試驗

檢查不完全抗體最可靠方法，但操作復雜，

費時，試劑較貴。多用于新生兒溶血病的診

斷及因血型不合輸血產(chǎn)生的血型抗體的檢測人源鹽水介質(zhì)抗D試驗

操作簡單，特異性和靈敏度均高，應用廣泛，

但試劑昂貴第30頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測前標本處理：標本新鮮，嚴防污染。為避免假陰性，被檢紅細胞要用生理鹽水充分洗滌。試劑和器材：使用有效期內(nèi)的合格試劑?？寡逡咨票４妫乐挝廴?。使用的儀器、器材清潔干燥。第31頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測中抗原抗體比例、介質(zhì)濃度反應時間、反應溫度、離心條件陰性對照、陽性對照及試劑對照紅細胞上的Rh抗原與相應抗體反應形成的凝集較弱，觀察結(jié)果不可用力振搖當結(jié)果可疑時，須用顯微鏡觀察確認第32頁,共38頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)量保證檢測后復查實驗全過程，填寫試驗報告，查對無誤后方可發(fā)出報告。標本置4℃保存1周以上，以備復查。第33頁,共38頁，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制1、醫(yī)務人員的問題臨床醫(yī)生臨床護士抽取血標本時，未校對患者的姓名、床號檢驗科人員沒有對報告核對正確，造成血型鑒定錯誤第34頁,共38頁，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制2、被檢紅細胞血型測定的錯誤血型：檢測時只用肉眼觀察結(jié)果，微弱、細小的凝集未看到冷凝集素：在支原體肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，嚴重干擾血型鑒定。ABO亞型：抗原結(jié)構(gòu)和位點數(shù)改變導致的弱表現(xiàn)。ABO血型抗體減弱：當獻血者血清中抗A和抗B效價減弱，其反定型格局總表現(xiàn)為AB型。第35頁,共38頁，2024年2月25日，星期天臨床上血型檢查的質(zhì)量控制3、其它因素輸血或妊娠：產(chǎn)生不規(guī)則抗體類B抗原：某些受腸道革蘭氏陰性桿菌感染的病人，紅細胞獲得了類B抗原，A型病人可誤定為AB型，O型誤定為B型磺胺類藥物：注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗體，而青霉素已吸附在紅細胞表面，當此紅細胞與血清相遇時便發(fā)生凝集。