血球計(jì)數(shù)板的使用

關(guān)于血球計(jì)數(shù)板的使用①血球計(jì)數(shù)板的原理和構(gòu)造②方法與步驟

第2頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天①血球計(jì)數(shù)板的原理和構(gòu)造Ⅰ構(gòu)造血球計(jì)數(shù)板是一種專門用于計(jì)算較大單細(xì)胞微生物的一種儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。第3頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第4頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個(gè)方格網(wǎng)。方格網(wǎng)上刻有9個(gè)大方格，其中只有中間的一個(gè)大方格為計(jì)數(shù)室。這一大方格的長(zhǎng)和寬各為1mm，深度為0.1mm，其容積為0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的計(jì)數(shù)板。第5頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天1mm×1mm×0.1mm=0.1mm320mm×20mm×0.25mm=100mm3第6頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天25×16型的計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)池中央的大格又被雙線劃分成25個(gè)中格，其中的每個(gè)中格又被單線劃分成16個(gè)小格，中央大方格由25×16=400個(gè)小方格組成。第7頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天在血球計(jì)數(shù)板上，刻有一些符號(hào)和數(shù)字(見(jiàn)圖一)，其含義是：XB-K-25為計(jì)數(shù)板的型號(hào)和規(guī)格，表示此計(jì)數(shù)板分25個(gè)中格；0.10mm為蓋上蓋玻片后計(jì)數(shù)室的高；1/400mm2表示計(jì)數(shù)室面積是1mm2，分400個(gè)小格，每小格面積是1/400mm2。第8頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天把中央大方格的中方格再分成小方格的分割線并不只局限于中央大方格內(nèi)，而是一直延伸到正方形凹槽的邊緣，所以在其延長(zhǎng)線上的4個(gè)大方格中分割線顯得密集。第9頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第10頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天25×16型的計(jì)數(shù)板一般計(jì)數(shù)四個(gè)角和中央的五個(gè)中方格（5×16=80個(gè)小方格）的細(xì)胞數(shù)。第11頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天Ⅱ血球計(jì)數(shù)板的原理第12頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算，對(duì)每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第13頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N1=(n1-1+n1-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n1-1n1-2N1=(n1-1+n1-2)/2第14頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N2=(n2-1+n2-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n2-1n2-2N2=(n2-1+n2-2)/2第15頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N3=(n3-1+n3-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n3-1n3-2N3=(n3-1+n3-2)/2第16頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天將計(jì)數(shù)板及蓋玻片用流水沖洗，擦干，重復(fù)上述步驟，對(duì)每個(gè)樣品可計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第17頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天將同一樣品的計(jì)數(shù)結(jié)果，取平均值。代入下式，求算單胞藻的密度：N小格平均每小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)=N/(5×16)設(shè)每毫升中有x個(gè)單胞藻

x個(gè)N小格×16×25個(gè)1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x個(gè)=N/(5×16)

×16×25個(gè)1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x=N/(5×16)

×16×25個(gè)×1cm3×

1000÷(1mm×1mm×0.1mm)=50000N第18頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天②用血球計(jì)數(shù)板對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法與步驟：ⅰ檢查計(jì)數(shù)室先用顯微鏡對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢是否干凈。若有污物，則需用清水清洗，吹干，用擦鏡紙擦拭干凈。蓋玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用時(shí)用眼科鑷取出，放在濾紙上吸水，用擦鏡紙擦拭干凈。將蓋有蓋玻片的計(jì)數(shù)板放在顯微鏡的載物臺(tái)上，調(diào)焦，用低倍鏡找到計(jì)數(shù)區(qū)檢查是否干凈。第19頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使單胞藻分布均勻，防止單胞藻凝聚沉淀，提高計(jì)數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性，求得的培養(yǎng)液中的單胞藻數(shù)量誤差小。第20頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天注意，當(dāng)藻液濃度高時(shí)，為了便于計(jì)數(shù)，可將藻液用消毒海水稀釋后進(jìn)行計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)有鞭毛或有運(yùn)動(dòng)性的藻類時(shí)，可先吸取定量的藻液，滴加魯哥氏碘液（1000毫升藻類用15毫升的魯哥氏液固定）進(jìn)行固定，然后添加消毒海水稀釋后計(jì)數(shù)。第21頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天將計(jì)數(shù)板連同蓋玻片一起取下，用細(xì)口膠頭滴管吸取稀釋后的搖勻的單胞藻懸液，迅速將吸管尖靠在計(jì)數(shù)池上蓋玻片的邊緣，略擠膠頭滴管讓培養(yǎng)液利用液體的表面張力，自行滲入。第22頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第23頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第24頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第25頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第26頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第27頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天樣品流入的量以充滿蓋玻片下面的空間為宜，蓋玻片下面不能有氣泡存在，否則會(huì)造成計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。多余的藻液會(huì)流入H形的凹溝中。第28頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天樣品添加到計(jì)數(shù)池后，靜置5min。使藻細(xì)胞沉降，否則，細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，不處于同一平面上，給計(jì)數(shù)造成不便。待單胞藻全部沉降到計(jì)數(shù)室底部后，將計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)的中央，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察，仔細(xì)調(diào)焦，同時(shí)調(diào)節(jié)光柵，必要時(shí)調(diào)節(jié)光源和反光鏡角度，直至細(xì)胞和縱橫格線都清楚。計(jì)數(shù)并記錄。第29頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天如果規(guī)格為25格×16格的計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)池中央大方格內(nèi)四角及中央中格內(nèi)(即80個(gè)小方格)的單胞藻數(shù)，并記錄。計(jì)數(shù)時(shí)，小心移動(dòng)載物臺(tái)，從上到下，由左及右又由右及左依次計(jì)數(shù)各小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理。凡壓方格的上線和左線的細(xì)胞，統(tǒng)一算此方格內(nèi)的細(xì)胞，而壓方格的下線和右線的細(xì)胞，統(tǒng)一不算此方格內(nèi)的細(xì)胞。第30頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天第31頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天如果一個(gè)小方格內(nèi)單胞藻過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋以便于單胞藻的計(jì)數(shù)。具體方法是：搖勻試管，取1mL單胞藻培養(yǎng)液，加入成倍的無(wú)菌水（消毒海水）稀釋，稀釋n倍后，再用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4—5個(gè)單胞藻細(xì)胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計(jì)數(shù)。第32頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算，將計(jì)數(shù)板及蓋玻片用流水沖洗，吹干，擦凈，重復(fù)上述步驟，對(duì)每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。第33頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N1=(n1-1+n1-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n1-1n1-2N1=(n1-1+n1-2)/2第34頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N2=(n2-1+n2-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n2-1n2-2N2=(n2-1+n2-2)/2第35頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天N3=(n3-1+n3-2)/2計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算。n3-1n3-2N3=(n3-1+n3-2)/2第36頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天將計(jì)數(shù)板及蓋玻片用流水沖洗，擦干，重復(fù)上述步驟，對(duì)每個(gè)樣品可計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第37頁(yè),共40頁(yè)，2024年2月25日，星期天將同一樣品的計(jì)數(shù)結(jié)果，取平均值。代入下式，求算單胞藻的密度：N小格平均每小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)=N/(5×16)設(shè)每毫升中有x個(gè)單胞藻

x個(gè)N小格×16×25個(gè)1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x個(gè)=N/(5×16)

×16×25個(gè)1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x=N/(5×16)

×16×25個(gè)×1cm3×

1000÷(1mm×1mm×0.1mm)=50000N第38頁(yè),共40頁(yè)，2