體外共培養(yǎng)條件下種植窗期子宮內膜與胚胎相互作用的研究

體外共培養(yǎng)條件下種植窗期子宮內膜與胚胎相互作用的研究背景及目的醫(yī)學發(fā)展的不斷進步,總會有震驚世界的奇跡出現(xiàn)。20世紀世界首例試管嬰兒的誕生,讓研究者們看到了打破常規(guī)的生育方法,為數(shù)以萬計的不孕患者解決了生育難題。不孕癥不僅在國外多發(fā),在國內,飽受生育困難的不孕夫婦也不在少數(shù)。在中國,傳宗接代已成為每個家庭的必須,生育一個健康的寶寶成了多數(shù)家庭的渴望。輔助生殖技術的發(fā)展為許多不孕患者帶來希望,在某種程度上,不僅維系了家庭的和諧,更為社會的和諧提供了支點。ART技術發(fā)展已有30余年,但成功率仍有待進一步提高。在正常女性月經周期中,胚胎著床是在很短的時間內完成的。這一過程十分復雜,能否成功妊娠的關鍵就取決于子宮內膜對胚胎的接受能力。母體子宮內膜對胚胎的接受能力,即為子宮內膜容受性(endometrialreceptivity)?！胺N植窗期”(implantationwindow)通常發(fā)生于正常女性月經周期排卵后第6-7天,此時,子宮內膜對胚胎的接受能力達到最佳狀態(tài),子宮內膜容受性最高,胚胎能夠順利著床。已有廣泛學者研究證明,人類白血病抑制因子(humanleukemiainhibitorygrowthfactor,LIF)和胰島素樣生長因子(insulim-likegrowthfactor,IGF)可同時作用于子宮內膜和胚胎,兩者的表達在女性黃體期逐漸升高,在種植窗期達到高峰,與子宮內膜容受性的形成密切相關,且與子宮內膜對胚胎的接受能力呈正相關,是保證胚胎著床和妊娠成功的關鍵因子。在臨床工作中,大齡女性患者的卵巢儲備功能下降,卵子質量遠不如年輕女性的理想,取卵后,在實驗室培養(yǎng)成的胚胎質量較差,移植進入宮腔后,胚胎著床能力也就較差,以致于使胚胎種植率和臨床妊娠率始終處于較低水平。因此,國外已經有很多學者從動物實驗出發(fā),應用共培養(yǎng)技術來提高大齡患者的胚胎種植率和臨床妊娠率。到目前為止,研究較為成熟的就是利用子宮內膜上皮細胞作為飼養(yǎng)層,與胚胎構建共培養(yǎng)體系,模擬胚胎在母體子宮內的生長環(huán)境。由于共培養(yǎng)體系更加接近母體的生長環(huán)境,可以提供胚胎生長狀態(tài)下所需的各種營養(yǎng)物質,同時又可以分泌多種有助于胚胎生長和提高子宮內膜容受性的相關因子,如LIF,IGF,EGF等多種因子,在一定程度上優(yōu)化了胚胎質量,促進胚胎程序化生長,提高了胚胎著床能力,進一步為后期胚胎種植率和臨床妊娠率的提高做準備。本實驗以此為背景,在體外條件下共培養(yǎng)子宮內膜和胚胎,構建體外共培養(yǎng)模型,采用RT-PCR法檢測與子宮內膜容受性相關的兩個因子LIF和IGF在子宮內膜上的表達水平,探討其在種植窗期的表達規(guī)律,并觀察共培養(yǎng)條件下胚胎的生長情況,分析種植窗期子宮內膜與胚胎之間的相互作用及分子對話,揭示胚胎植入的機制,探討共培養(yǎng)的優(yōu)越性,進一步為優(yōu)化臨床治療方案提供理論依據(jù)。材料和方法選擇2014年6月到2015年6月在鄭州大學第二附屬醫(yī)院生殖中心行人工助孕的10例患者,取卵后因有卵巢過度刺激綜合征傾向,取消移植,這些患者均于取卵后第3天取子宮內膜,和實驗室的冷凍年限較久(1-3年),患者已無生育要求,主動廢棄不要的評分I-II級的優(yōu)質冷凍胚胎組成子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組),以單獨子宮內膜培養(yǎng)組(B組)和單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)作為對照組,采用RT-PCR法分別于取卵后D3、D4、D5、D6、D7天檢測子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)和單獨子宮內膜培養(yǎng)組(B組)LIFmRNA和IGFmRNA的表達水平,并在顯微鏡下觀察子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)和單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)的胚胎生長情況,比較其囊胚形成率。研究所采用的數(shù)據(jù)處理軟件是SPSS20.0,所有數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計分析軟件,用重復測量數(shù)據(jù)方差分析進行檢測,P<0.05認為有統(tǒng)計學差異。結果1.LIF和IGF兩種因子mRNA在子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)呈陽性表達,在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達量逐漸升高,在D6,D7天呈強陽性表達,表達量升高最為明顯。2.LIF和IGF兩種因子mRNA在單獨子宮內膜培養(yǎng)組(B組)呈陽性表達,在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達量逐漸升高,在D6,D7天呈強陽性表達,表達量升高最為明顯。3.子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)的LIF和IGF兩種因子mRNA在子宮內膜中的表達顯著高于對照組單獨子宮內膜培養(yǎng)組(B組),且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4.在顯微鏡下觀察可見,子宮內膜與胚胎共培養(yǎng)組(A組)胚胎碎片少,卵裂球均勻,形態(tài)規(guī)則,胚胎發(fā)育速度相對單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)較快,桑葚胚形成率,囊胚形成率高于單獨胚胎培養(yǎng)組(C組)。結論1.LIF和IGF兩種因子是子宮內膜容受性的標志性分子。2.排卵后D6,D7天即是種植窗期,此時子宮內膜容受性最佳,子宮內膜對