巨大口蘑培養(yǎng)條件及其原基形成機理研究

巨大口蘑培養(yǎng)條件及其原基形成機理研究巨大口蘑營養(yǎng)豐富,味道鮮美,具有多種生理功能,是經(jīng)濟價值和藥用價值極高的珍稀食用菌,且不易褐變和腐爛,耐貯運性好,在8~12℃條件下,貯藏30天不變色、不變味。但其生長速度慢,出菇時間較長,這嚴(yán)重制約了該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。其生產(chǎn)方式一般采用袋栽技術(shù),且需要在覆土條件下出菇,大部分生產(chǎn)巨大口蘑的食用菌生產(chǎn)企業(yè)尚未形成工業(yè)化、專業(yè)化、規(guī)模化的生產(chǎn)格局。為了探明巨大口蘑工廠化栽培中各個階段的管理參數(shù),找到能促進巨大口蘑在不覆土情況下也能出菇的有利因素,實現(xiàn)從傳統(tǒng)的袋子栽培、覆土出菇模式向瓶子栽培、不覆土出菇模式的轉(zhuǎn)化,本實驗結(jié)合巨大口蘑傳統(tǒng)的覆土栽培特點,對其不覆土的瓶栽關(guān)鍵技術(shù)進行了研究,并測定不同的出菇處理條件下其菌絲相關(guān)酶活性的大小,探明出菇與這些酶活性間的相關(guān)性。研究的內(nèi)容及結(jié)果如下:1、利用均勻設(shè)計法對以玉米芯為主要碳源的栽培料配方進行優(yōu)化,得出最優(yōu)結(jié)果為:玉米芯54.04%,麩皮28.16%,蔗糖13.20%,酵母粉4.70%。比較分別以玉米芯、甘蔗渣和薇甘菊為主料栽培巨大口蘑之間的菌絲生長速度和產(chǎn)量,發(fā)現(xiàn)以玉米芯為主要碳源栽培巨大口蘑的菌絲生長速度最快,其次為甘蔗渣,最慢的為薇甘菊;而從子實體采收量來看,以甘蔗渣為主要碳源的采收量最高,其次是薇甘菊,玉米芯的較低。2、通過單因素實驗研究栽培料的發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、初始pH值和水分含量對瓶栽巨大口蘑菌絲生長的影響,結(jié)果表明:栽培料的最適發(fā)酵溫度范圍為70~75℃,最適發(fā)酵時間為9d,最適初始pH值為8.5,最適水分含量為61%。3、環(huán)境條件對瓶栽巨大口蘑菌絲生長和出菇的影響:(1)瓶栽巨大口蘑菌絲生長速度的最適環(huán)境條件為溫度26℃,空氣相對濕度為60%,二氧化碳濃度為0.18%。(2)瓶栽巨大口蘑不覆土出菇的最適環(huán)境條件為溫度29℃,前期濕度為92%,光照為400lx,成菇期濕度為100%(3)瓶栽巨大口蘑覆土出菇的最適環(huán)境條件為溫度30℃,前期濕度為70%,光照為500lx,成菇期濕度為85%。(4)瓶栽巨大口蘑不覆土出菇的最適二氧化碳濃度為菌絲恢復(fù)期0.3%,扭結(jié)分化期為0.25%,幼小菇期為0.45%,成菇期為0.3%。4、不同催蕾方法對瓶栽巨大口蘑不覆土出菇的影響:(1)通過單因素實驗得出赤霉素、萘乙酸、藜蘆醇、醋酸鈉、十三烷醇幾種化學(xué)物質(zhì)的最佳濃度分別為8mg/L、20mg/L、8μmol/g、0.06%、0.16mg/L。用以上濃度的物質(zhì)對巨大口蘑無土條件下進行處理出菇,現(xiàn)蕾所用的天數(shù)從快到慢的比較為:泥土水>十三烷醇>醋酸鈉>清水>萘乙酸>藜蘆醇,用赤霉素處理的瓶子不能形成原基。(2)從培養(yǎng)料已經(jīng)高度分解但能出菇的瓶子中分離出霉菌、放線菌和細(xì)菌三種不同的微生物均不能促進其他瓶子的培養(yǎng)料形成原基,一些培養(yǎng)料已經(jīng)高度分解但能出菇,不是微生物導(dǎo)致的,而是其他因素作用的。(3)瓶子搔菌后催蕾時的菌床方向不同,對出菇有較大的影響。菌床為倒立方向時,有利于菌絲形成原基和催蕾出菇,而菌床為正立方向時,出菇效果較差。5、瓶子搔菌后在不同的時間覆土均能出菇,結(jié)合子實體采收量和至采收結(jié)束所用的天數(shù)來看,搔菌后第3d覆土比較合理,采收量較高,出菇周期最短。6、不同的催蕾方法對巨大口蘑菌絲體相關(guān)酶活力影響:能形成原基的三個處理組從菌絲恢復(fù)期到原基形成、現(xiàn)蕾階段,酪氨酸酶活性相對比較穩(wěn)定,不能形成原基的兩個處理組酪氨酸酶比較活躍,說明菌絲恢復(fù)后酪氨酸酶過高反而抑制了原基形成;而漆酶、蛋白酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶活性在原基形成前都得到有效的激活作用,不能形成原基的兩個處理組這幾種酶活性變化不大;五個處理組的過氧化氫酶和多酚氧化酶活性上下波動較大,能出菇的三個處理組在原基形成階段達(dá)到最大值,而不能出菇的兩個處理組在菌絲恢復(fù)前后達(dá)到最高峰,隨后快速下降;五個處理組的羧甲基纖維素酶、過氧化物酶活性都呈現(xiàn)不斷上升的趨勢。由此可以看出,在現(xiàn)蕾前的整個階段,不斷提高羧甲基纖維素酶、過氧化物酶、漆酶、蛋白酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶、多酚氧化酶和過氧化氫酶