番茄葉霉病原菌轉(zhuǎn)化人參皂甙的研究的開題報(bào)告

番茄葉霉病原菌轉(zhuǎn)化人參皂甙的研究的開題報(bào)告一、選題背景及意義番茄（LycopersiconesculentumMill）是我國最受歡迎的蔬菜之一，在世界上也是廣泛種植的重要作物之一。然而，番茄生產(chǎn)中常常遭受到多種病害的威脅，其中葉霉病（Earlyblight）是番茄生產(chǎn)中較為嚴(yán)重的一種病害。葉霉病是由真菌Alternariasolani(Ellis&Martin)Sorauer引起的，可導(dǎo)致葉片萎縮、變黃、褐色斑點(diǎn)等病征，對番茄產(chǎn)量和品質(zhì)造成嚴(yán)重影響。傳統(tǒng)的葉霉病防治方法主要是使用化學(xué)農(nóng)藥，但長期的使用會產(chǎn)生一系列的環(huán)境和健康問題。因此，研究安全、有效的葉霉病防治方法具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，一些植物具有天然的抗菌作用，其中人參皂甙是一種具有廣泛抗菌作用的天然產(chǎn)物。因此，將人參皂甙引入番茄植株中，有可能提高番茄植物的抗病能力，并有效防治葉霉病。本研究旨在使用基因工程技術(shù)，將人參皂甙合成基因引入番茄植株中，進(jìn)一步研究番茄植物中人參皂甙的合成與累積，探究人參皂甙對番茄葉霉病的防治效果及作用機(jī)制，為綠色防治葉霉病提供新思路和新方法。二、研究內(nèi)容和方法（一）研究內(nèi)容：1、構(gòu)建人參皂甙合成基因載體。2、將合成基因載體導(dǎo)入番茄植株中。3、分析不同發(fā)育時(shí)期（幼苗期、生長期和成熟期）番茄植株中人參皂甙的累積情況。4、分析人參皂甙轉(zhuǎn)化對番茄植物葉霉病防治效果及其作用機(jī)制。（二）研究方法：1、利用PCR技術(shù)，克隆人參皂甙合成基因。2、將克隆的人參皂甙合成基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體中，如pCAMBIA1304載體。3、將重組的植物表達(dá)載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入番茄葉中，并進(jìn)行篩選。4、進(jìn)行PCR、RTPCR、Westernblot等分析方法，驗(yàn)證轉(zhuǎn)化獲得的植物中是否存在人參皂甙合成基因的表達(dá)。5、采用高效液相色譜法（HPLC）等分析方法，分析番茄植株中人參皂甙的累積情況。6、采用葉片噴霧法建立番茄葉霉病模型，分析人參皂甙對葉霉病的防治效果，并通過光學(xué)顯微鏡等手段觀察病原真菌在植物體內(nèi)的分布情況，探究人參皂甙的作用機(jī)制。三、預(yù)期成果本研究預(yù)期利用基因工程技術(shù)將人參皂甙合成基因引入番茄植株中，探究人參皂甙對番茄葉霉病的防治效果及其作用機(jī)制。預(yù)期成果包括：1、構(gòu)建人參皂甙合成基因載體。2、成功導(dǎo)入人參皂甙合成基因到番茄植株中，獲得轉(zhuǎn)化植株。3、通過PCR、RTPCR、Westernblot等分析方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)化植物中是否存在人參皂甙合成基因的表達(dá)。4、通過HPLC等分析方法檢測番茄植株中人參皂甙的累積情況。5、驗(yàn)證人參皂甙對番茄葉霉病的防治效果，并探究其作用機(jī)制。四、研究的創(chuàng)新性和實(shí)用性本研究通過基因工程技術(shù)，將具有廣泛抗菌作用的人參皂甙合成基因?qū)氲椒阎仓曛?，?shí)現(xiàn)對番茄葉霉病的防治。與傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥使用相比，本方法具有環(huán)境友好、安全無害